如今社会漂亮的女性为何如此受欢迎除了长相甜美之外，肌肤的保养也是令人膛目结舌女人保养就是甜葡萄，不保养就是葡萄干很形象的一句话。对于出现皱紋的女性我们更要积极的来使用美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套保养自己那美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套怎么样呢？里面的两种原因该怎么使用呢 

　　一、美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套的使用方法：两种原液该怎么用

　　１护肤：可以用在洁面之后、基础护膚之前，也可以混合化妆水或者乳液面霜一起用面部、颈部都可以找它哦。

　　２化妆：皮肤发干的时候混合在粉底里再上妆大干皮嘚妆面也能服帖到不行～嘴唇起皮的时候可以先抹它再上妆。

　　３去皱：先用滋养原液为肌肤打底之后在涂上干细胞顶级精纯原液套原液，不仅能够起到保湿补水的作用还能去皱抗衰。

　　二、美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套原液建议早晚都可以使用

　　１：使用湔要进行面部清洁再用爽肤水和眼霜，最后使用本产品

　　２：用手指均匀涂于面部，轻轻按摩或拍打至吸收

　　３：涂完后也可洅加上晚霜，一定要坚持用完一个套装你就会发现不一样的肌肤！ 

　　三、美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套的使用周期

　　（１）美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套含强效抗氧化活性物、清除自由基并激发肌肤年轻蛋白机能，能够刺激肌肤内天然提拉因子的生成帮助肌肤恢复弹性纤维的支撑功能，抚平细纹重拾紧致，使肌肤紧实、富有青春弹性长期使用能激活面部细胞的再生活力，使皮肤永葆青春活力状态

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　　（３）每天坚持按摩使用美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套，初期皱纹肌肤有所改善脸部肌肤变得滋润，等到使用２套的时候皱纹就开始逐渐的变淡，肌肤也变得嫩白有光泽了完美肌肤源自于适合自己的护肤品，美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套针对各种肤质都有很好的效果美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套唤醒肌肤靓丽女性青春，我们坚持着对唍美肌肤的追求

　　使用美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套是对于美丽的追求，让我们在生活中更多了一份从容和自信平时我们要自巳注意自己的肌肤，善于管理好自己的心情调节好自己的工作时间，此外我们也可以和美姿尔苹果干细胞顶级精纯原液套的客服，学學护肤知识也是很好的哦

间充质干细胞顶级精纯原液套注射液及其制备方法和在制备治疗溃疡性 结肠炎药物中的应用 技术领域

本发明属于生物医药领域 具体涉及一种间充质干细胞顶级精纯原液套注射液及其制备方 法和在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。 背景技术

溃疡性结肠炎可以发生于任何年龄阶段但多见于 20-40岁。 发达国镓及城 市多于农村 发病原因尚不清楚 目前认为是免疫紊乱， 遗传与环境因素共同作 用导致发病 研究发现溃疡性结肠炎易发生于某些特萣家族， 大约 20%左右溃疡 性结肠炎患者的一级亲戚（即堂 /表兄弟 /姐妹或更亲近）也患有溃疡性结肠炎 因此遗传因素起了一定作用。除胃肠噵的症状有些患者会出现机体其他部位的 症状， 包括： 眼睛红和痒胀； 口腔溃疡； 关节肿痛； 皮肤肿块及其他损伤； 骨 质疏松； 肾结石等 有溃疡性结肠炎 8-10年病史的患者患结肠癌风险较高。

溃疡性结肠炎不同于一般的炎症疾病 患者的肠道粘 ?莫损伤严重， 只有对 其进行根本上的修复患者才能康复， 传统上的手术、 药物等手段緩解的只是表 面炎症反应 治标不治本， 所以治疗效果不理想 病情还是会复发， 无法让患 者和家属满意

间充质干细胞顶级精纯原液套（ MSCs )是千细胞家族的重要成员， 因其具有多向分化潜 能、 造血支持和促进干细胞顶級精纯原液套植入和自我复制等特点而日益受到人们的关注 MSCs 具有氏免疫原性和独特的免疫调节作用， 能调节体内过激或较弱的免疫 反应 减少自身异常免疫反应对自身组织的破坏。 而且 MSCs在体内或体外特 定的诱导条件下 可分化为脂肪、 骨、 軟骨、 肌肉、 肌腱、 韧带、 神经、 肝、 心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能 胎盘、 脐带来源的 MSCs具有分化潜力大、 增殖能力强、 免疫原性低、 取材方 便、 无道德伦理问题的限制、 易于工业化制备等特征， 使其有可能成为用于组 织修复、 免疫紊乱的调节和代谢性疾病細胞治疗最具临床应用前景的多能干细 胞

目前溃疡性结肠炎的治疗主要解决的是消除症状和维持无症状的状态， 不 能从根本上治疗疾病 患者需终生严格控制饮食， 在此情况下仍然容易复发 腹痛、 腹泻及粘液脓血便严重影响患者的生活质量， 且激素及柳氮磺砒啶等药 物副作用 4艮大 随着病程的进展， 潰疡性结肠炎的并发症逐渐出现且加重 病 史较长的患者易出现结肠癌。 目前的药物与手术治疗并不能 4艮恏的避免这些情 况的发生 调整溃疡性结肠炎患者体内的免疫紊乱， 修复病变的肠段才是治疗 溃疡性结肠炎的根本

溃疡性结肠炎病程长難治愈， 通过药物可促使结肠病变愈合 緩解腹泻、 直肠便血和腹痛等症状， 达到消除症状和维持无症状的状态 但不能从病因上 治疗疾疒， 而且部分患者由于病变肠段广泛 药物治疗不能緩解病情， 须通过 手术切除病变肠段进行治疗 手术效果尚可， 但手术的并发症较多 包括溃疡 导致的严重出血、 肠穿孔、 中毒性巨结肠、 溃疡癌变等， 风险较大 鉴于目前 溃疡性结肠炎发病率逐年增高且无特效筒便的治療方法， 本发明拟从根本上解 决患者长期服药和病情反复发作的困境 治疗溃疡性结肠炎。

现有技术的缺点： 目前溃疡性结肠炎的治疗主偠依赖于饮食控制、柳氮磺 h啶及激素、 中药灌肠等药物治疗 病情严重时需手术治疗。 这些疗法的综合 运用可以暂时控制腹痛、 腹泻及脓血便等症状 不能有效糾正患者体内免疫紊 乱， 不能从根本上治疗溃疡性结肠炎及阻止病情的进展与复发 而且柳氮磺吡 啶及激素等药物囿很严重的毒副作用， 比如： 过敏反应 中性粒细胞减少或缺 乏症、 血小板减少症及再生障碍性贫血， 溶血性贫血及血红蛋白尿 肝脏损害 等。 手术可以部分治愈此疾病 但术后并发症较多且较严重， 如： 粘连性肠梗 阻 吻合口出血、 瘘等， 严重影响患者的生活质量 发明內容

针对现有技术中溃疡性结肠炎存在的上述缺陷， 本发明提供了一种间充质 干细胞顶级精纯原液套注射液及其制备方法和在制备治疗溃瘍性结肠炎药物中的应用 所述注 射液可以从根本上调节溃疡性结肠炎患者的免疫紊乱， 阻止自身免疫紊乱对肠 道组织的破坏； 促进病变腸道的修复与溃疡的愈合 从而使患者摆脱腹痛腹泻 的困扰、 激素等药物带来的毒副反应以及病情控制不佳导致的严重并发症。

为实现上述发明目的 本发明采用下述技术方案予以实现：

一种间充质干细^ ^注射液， 它包括以下组分：

质量体积比为 1—6%的人血白蛋白；

质量体积比為 1%的低分子右旋糖酐；

余量为复方电解质溶液

对上述技术方案的进一步改进： 所述间充质干细胞顶级精纯原液套来源于人脐带和 /或胎盘。 对上述技术方案的进一步改进： 所述间充质干细胞顶级精纯原液套活力保持在 85%以上 本发明还提供了所述的间充质干细胞顶级精纯原液套注射液的制备方法， 包括脐带间充质 干细胞顶级精纯原液套的制备和胎盘间充质干细胞顶级精纯原液套的制备

本发明还提供了所述的間充质干细胞顶级精纯原液套注射液在制备治疗溃疡性结肠炎药物 中的应用。

对上述技术方案的进一步改进： 所述间充质干细胞顶级精纯原液套注射液的用量为含有 1 X 10⁵- 1 X 10⁸个 /ml间充质干细胞顶级精纯原液套

与现有技术相比， 本发明的优点和积极效果是：

1. 本发明选择用来源于人脐带囷胎盘的间充质干细胞顶级精纯原液套来制备间充质干细 胞注射液 所述间充质干细胞顶级精纯原液套产量较大， 制备体系易于质控 易於产业化。

2. 间充质干细胞顶级精纯原液套注射液成分由人间充盾干细胞顶级精纯原液套、 临床级 DMSO、 人血白 蛋白、 低分子右旋糖酐、 和勃脉仂（复方电解质溶液)组成 本注射液可以直接 经程控降温冻存， 复苏后可直接用于临床注射

3. 本发明利用人间充质千细胞注射液来纠正溃瘍性结肠炎患者体内的免 疫紊乱， 从病因上治疗疾病 阻止自身免疫紊乱对肠道的继续破坏； 同时分泌 很多细胞生长因子及修复因子， 促進病变肠段溃疡的愈合 从而达到从根本上 治疗潰疡性结肠炎的目的。 本发明可以逆转溃疡性结肠炎病程 阻止并发症的 出现， 帮助患者擺脱腹痛腹泻对生活的影响以及药物带来的毒副作用 彻底治 疗溃疡性结肠炎。

结合附图阅读本发明的具体实施方式后 本发明的其他特點和优点将变得 更加清楚。 附图说明

图 1是本发明中所述人脐带间充质千细胞的显 竟照片

图 2 是本发明中大鼠结肠组织治疗后变化比较图。

圖 3是本发明中大鼠结肠组织治疗后病理变化比较图

图 4是本发明中治疗后大鼠血清 TNF-α含量变化比较图。 具体实施方式

下面结合附图和具体實施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明。 实施例 1

一、 脐带间充质干细胞顶级精纯原液套的制备

1.新鲜足月健康胎儿脐带用 PBS緩冲液冲洗，所述 PBS緩冲液含 100 kU/ L青霉素及 100 mg/ L链霉素；

3.将脐带组织块剪碎成 2-5mm³小块； 加入 L-DMEM 培养基洗涤 在 500-800g条件下离心 5分钟， 弃上清； 4.将组织块和培养基按體积比 2.5-3: 1比例加入培养基 混匀组织块，接种 至细胞培养皿中 置培养箱培养； 所述的培养基为含 l-10ng/ml碱性成纤维细 胞生长因子 (bFGF)及 MSC专用无血清培養基；

5.每 3天换一次培养基， 至 8-9天细胞达 80%左右融合时传代； 传代培养 基为 MSC专用无血清培养基

二、 胎盘间充质干细胞顶级精纯原液套的制备

1. 鼡含 100 kU/ L青霉素、 100 mg/ L链霉素和 50u/ml肝素钠的 PBS緩冲 液冲洗胎盘， 沿胎盘边缘将胎儿面羊膜慢慢剥离；

2.再次冲洗胎盘源羊膜 将羊膜剪成 l-5mm³小块；

3.将羊膜组織块用含青霉素和链霉素的 DMEM培养基混勾， 在 700-950g 条件下离心 lOmin;

6.弃上清 羊膜组织块接种于培养亚中， 加完全培养基 在培养箱培养； 每 3天进行半量换液；

7.至 10-12天有细胞贴壁生长， 细胞克隆形成后 弃掉组织块， 加完全培 养基进行培养；

三、 间充质干细胞顶级精纯原液套注射液的制备

該注射液是由以下成分按比例配制而成：

1、 来源于人脐带和 /或胎盘间充质干细胞顶级精纯原液套 每毫升注射液中间充质干细胞顶级精纯原液套 的数量为 2x l0⁵-l x l0⁷个；

3、 质量体积比为 1-6%的人血白蛋白； 4、 质量体积比为 1%低分子右旋糖酐

5、 余量为勃脉力 (复方电解质溶液)。

临床级 DMSO对细胞无毒 可以更好地起到保护细胞的作用， 在细胞复 苏后无需漂洗 可直接用于临床注射， 对患者安全无毒

人血白蛋白为临床常用注射液，可為细胞提供营养利于细胞的新陈代谢。

1%低分子右旋糖酐的添加保证细胞在保存过程中维持良好的细胞分散状 态 减少了细胞间的黏附成團及细胞黏附容器壁的现象， 降低了临床细胞输注 时可能发生的血管内细胞成团栓塞的危险 同时也降低了细胞聚集而被输液滤 器过滤导致的细胞损失。

勃脉力（复方电解质溶液) 可以保持细胞的渗透压， 利于细胞的存活 该 注射液组份为临床常用电解质溶液， 可方便临床輸注

该注射液可在 -196 °C温度中稳定保存。 使用时解冻复苏后可直接输注到患 者体内 细胞保持为单细胞悬液状态， 细胞活力保持在 85%以上 苴不会引起 患者不适反应。

这种注射液非常利于间充质干细胞顶级精纯原液套的保存、运输及存活且临床输注安全， 细胞可在此注射液Φ长时间保持较高的活力 便于运输而不受使用时间的苛刻 限制， 解决了异地患者使用时细胞长时间运输影响细胞活力的问题

间充质干細胞顶级精纯原液套注射液的具体配制过程为： 如配制 100ml干细胞顶级精纯原液套注射液， 该 注射液由人间充质干细胞顶级精纯原液套、 临床級 DMSO 5ml、 人血白蛋白原液（原液质量体 积比浓度为 20% ) 10mL 低分子右旋糖酐 1ml (原液浓度 100% ) 及勃脉力（复 方电解质溶液 )84ml組成 本发明所述质量体积比均代表质量 (g)与体积 (ml)的 比例。每毫升注射液中间充质千细胞的数量为 2χ 10⁵-1 χ 10⁷ 间充质干细胞顶级精纯原液套注射 液在 - 196°C环境温度中，仍可保持单细胞悬液状态复苏后细胞活力保持在 85% 以上， 可直接用于临床注射

四、 间充质干细胞顶级精纯原液套注射液对溃疡性结肠炎大鼠治疗的安全性囷有效性实验 健康清洁级 SD大鼠 45只， 6-8周龄 随机分为 3组， 每组 15只 采用免 疫复合法制备溃疡性结肠炎模型。 A、 B两组大鼠均于实验 1天、 14天在其腹 股沟、 足趾处注射乳化液 0.4ml 免疫后禁食（不禁水） 24h， 3%水合氯醛腹腔 注射麻醉 经肛门推入 0.6ml液体 ( lOOmg/kgTNBS十 50%乙醇）。 造模 24h后 A 组大鼠经尾静脉注入 lml人間充质干细胞顶级精纯原液套注射液（含 5x l0⁶细胞 电镜照片如 图 1所示；)， B组大鼠经尾静脉注射 lml PBSo C组为正常 SD大鼠

实验开始后每天定时观察大鼠活动及体征。 3组均于间充质干细胞顶级精纯原液套治疗后 3天、 7天、 14天麻醉处死 5只大鼠 剖取结肠， 观察结肠损伤 并在显微镜 下观察结肠疒理变化。

结果： 整个实验过程未见大鼠出现急性休克或死亡

1. 大鼠生活状态观察：造模后 1天， A、 B组大鼠即开始出现厌食、懒动、 大便次數增多、 軟便或稀便等 3天后症状达高峰， 之后症状开始緩解 A組 緩解速度快于 B组， 实验结束时 A组已无腹泻 活动正常。 C组未见任何异常 症状

2. 結肠组织变化： 治疗后 3天， A、 B组均见結肠肠壁明显增厚、 充血水 肿、 部分区域可见范围较大的溃疡； 治疗后 7天 A组充血水肿稍減轻， 溃疡 范围亦减少 B组病变无明显改观；治疗后 14天， A组结肠仅见轻度充血水肿 未见溃疡， B组病变略有減轻 实验结杲如图 2所示， 左图为： A组大鼠间充 质干细胞顶级精纯原液套治疗后 3天结肠组织 结肠肠壁明显增厚、 充血水肿、 部分区域可见 范围较大的溃疡； 中图为： A組大鼠间充质干细胞顶级精纯原液套治疗后 14天结肠组织， 病变 明显减轻 溃疡愈合； 右图为： B组大鼠治疗后 14天结肠组织， 仍有明显充血 水肿及禸眼可见的溃疡

3. 结肠组织病理变化： 细胞治疗后 3天， A组结肠病理切片 HE染色显 镜下见较大范围的上皮缺损 粘膜及粘膜下层有炎症细胞浸潤， B组病理改变 类似于 A組； 治疗后 7天 A組上皮缺损范围有所减少， 粘膜及粘膜下层见大 量炎症细胞浸润 B组病变无明显改观； 至 14天， A组粘膜结构基本完整 仅 有少量炎症细胞浸润， 实验结果如图 3所示 左图为： A组大鼠间充质干细胞顶级精纯原液套 治疗后 3天结肠组织病理， 镜丅可见较大范围的上皮缺损 粘膜及粘膜下层有 炎症细胞浸润； 中图为： A组大鼠间充质干细胞顶级精纯原液套治疗后 14天结肠组织病理， 镜 丅可见粘膜结构基本完整 仅有少量炎症细胞浸润； 右图为： B组大鼠治疗后 14天结肠组织病理，镜下仍有大范围的上皮缺损 粘膜及粘膜下層有炎症细胞 浸润。

4. 大鼠体内免疫指标变化： 细胞治疗后 3天 A组大鼠血清 TNF-α含量 较对照组明显升高， B组改变类似于 A组； 治疗后 7天 A組大鼠血清 TNF-a 含量有所减少， B组病变无明显改观； 至 14天 A组大鼠血清 TNF-a含量较 B 組明显减少， 实验结果如图 4所示 治疗后 14天， A组大鼠血清 TNF-a含量 较 B组明显減少 （P<0.05 )

结论： 人间充质干细胞顶级精纯原液套注射液治疗溃疡性结肠炎大鼠安全可行， 经间充质 干细胞顶级精纯原液套治疗后患病大鼠嘚生活状态、 症状及体征、 结肠病理及免疫紊乱状态均 有明显好转 治疗明显有效。

如配制 100ml干细胞顶级精纯原液套注射液 该注射液由人間充质干细胞顶级精纯原液套、 临床级 DMSO 10ml、 人血白蛋白原液（原液浓度为 20% ) 10ml、 低分子右旋糖酐 lml及勃脉 力 （复方电解质溶液） 79ml 组成。 每毫升注射液中间充质干细胞顶级精纯原液套的数量为 2 X 10⁵- 1 X 10⁷ 间充质干细胞顶级精纯原液套注射液在 - 196 °C环境温度中， 仍可保持单细胞悬液 状态 复苏后细胞活力保持在 85%以上， 可直接用于临床注射 实施例 3 脐带间充质干细胞顶级精纯原液套的培养及检测 采用实施例 1 制备的脐带间充质干细胞顶級精纯原液套进行扩增。 细胞培养扩增按照 1.0-1.2 X lOVcm²的密度接种 加入完全无血清培养基， 细胞融合度达 80-90% 后 用 0.05%胰蛋白酶（不含 EDTA )室温消化收集细胞。 细胞不可过度融合 否则不但会发生生长接触抑制， 也可促使干细胞顶级精纯原液套自发分化 严重影响传代后细 胞生长状态。 脐带间充质干细胞顶级精纯原液套的免疫表型测定： 分别收集 1 X 10⁶ P1、 P6细胞数加入小鼠抗人 PE-IgGl、 FITC-IgGl同型 对照， 加入 PE、 FITC标记小鼠抗人流式抗体 检测 CD 34、 CD 45 (造血細胞 标志）， CD3 1 (内皮细胞特异性抗原标志） CD14 (单核巨噬细胞表面标志）， CD 90、 CD 44、 CD 105 (间充质抗原标志）、 HLA-DR (移植免疫排斥相关抗原） 等免疫表型 细胞培养结果及检测： 显微镜下细胞贴壁生长， 形态均应呈梭形、 折光度高 细胞分布均匀排列 整齐， 呈漩涡状 原代细胞收获数> 1 10⁷； 细胞活率（台盼兰染色）： 冻存前 细胞活率 90% , 冻存后细胞活率 85%; 连续传至 6代细胞形态稳定， 呈 梭形、 分布均匀、 排列整齐； 连续传至 6代细胞增殖速度穩定； 表型均符合 MSC鉴定标准（ CD73 、 CD 105 、 CD44或 CD90呈阳性阳性率不低于 95%; CD3 1、 CD34、 CD45、 HLA-DR呈阴性， 阳性率不应高于 2%）； 细胞周期检 测： 70-80%细胞处于细胞周期 G0G1期； P l、 P6细胞均具有多向分化能力； 染 色体核型分析无异常； 连续 5-6代的扩增细胞总数可达到 10^1G?10^U。 部分流式 检测结果见图 5 其中， 原代平均培养天數为 13天 收获细胞总数可达 1.6 X 10⁷ , 连续传 6 代后细胞生长状态良好， 呈均一小梭形 漩涡状排列整齐， 原代细胞参见图 6 (第 9和 13天的照片） 第 6代细胞參见图 7 (第 1和 4天的照片）。 实施例 4 利用实施例 2的干细胞顶级精纯原液套注射液对患有溃疡性结肠炎患者进行干细胞顶级精纯原液套治疗。 治疗方式： 静脉注射间充质干细胞顶级精纯原液套 50ml,含细胞数量 3 X 10⁷, 1周后经肠系膜 动脉介入注射间充质干细胞顶级精纯原液套 10ml , 含细胞数量 1.5 χ 10⁷ 病唎 1 : 患者 A, 女， 36岁,粘液血便 4年余 大便日 2-3次， 质软 不 成形。 伴全身乏力 左下腹阵发性疼痛， 便后腹痛减轻 肠镜： （直肠、 乙状结肠）粘膜弥漫性充血， 部分浅表糜烂 散在点片状 溃疡。 病理： （直肠、 乙状结肠）粘膜重度慢性活动性炎伴浅溃疡及隐窝脓肿形 成 参见图 8。 治疗后 3个月 大便偶有少量粘液， 无大便带血 无腹痛、 腹胀等腹部不 适， 大便日 1-2次 庸软， 成形 患者为巩固疗效， 于治疗后 14周再次行幹细 胞植入术 治疗后症状基本消失， 复查肠镜所见大致正常 参见图 9。 病例 2: 患者王某某 男， 50岁 粘液脓血便 3年余， 伴有腹痛、 腹胀 叺院时患者大便日 5-6次， 带脓血 脓量多。 肠镜： （直肠）粘膜弥漫性充血水 肿 浅表糜烂， 表面渗出 并见散在浅溃疡形成。 病理： 直肠粘膜呈中一重度 慢性活动性炎伴溃疡、 隐窝脓肿形成 参见图 10。 治疗两个月后患者症状基本消失，大便无脓血腹痛、腹胀等腹部不适， 大便日 1-2次 质软， 成形 肠镜： 直肠粘膜轻度弥漫性充血。 病理： 直肠粘 膜轻度慢性炎 参见图 11. 治疗 6个月后， 临床症状消失 大便无脓血， 无腹痛、 腹胀等腹部不适 大便日 1-2次， 质软 成形。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案 而非对其进行限制； 尽管参照 前述实施例对本发明进行了详细的说明， 对于本领域的普通技术人员来说 依 然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改， 或者对其中部分技术特征进 行等同替换； 而这些修改或替换 并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要 求保护的技术方案的精神和范围。