耐高温酶的dna聚合酶最先由哪位科学家从哪种菌体中分离出来

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-02-06 07:46 标签： 耐高温酶

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本酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段同时該酶具有3?→5?外切酶校读功能，保真性高，还具有特殊的链置换和连续合成特性。

  • 利用随机引物扩增DNA。
  • 该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保證其最大酶活性故如果缓冲液不新鲜或经过反复冻融，使用前应添加4mM的DTT

应用：菌液测序模板制备

优点：无需细菌培养、收集、裂解和質粒DNA的分离与纯化，不需要离心机和PCR仪

  • 样品预变性：挑取单克隆，参考右侧反应体系热变性
  • 热失活：65℃10分钟。
  • 测序反应：取上述反应液2μl加8μl双蒸水即可用于直接测序。

经多次柱纯化SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶汙染

在30℃条件下，10min内能使0.5 pmol的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位

常用反应体系（50μl）

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一、一般来说以DNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶都的结合位点都在DNA上。

但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 （也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶）,它们的结合位点在RNA上.

也就是说模版是谁，结合位点就在谁上

一般来说，以DNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶都的结合位点都在DNA上

但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 （也僦是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶）,它们的结合位点在RNA上.

也就是说，模版是谁结合位点就在谁上。

2.结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列洳RNA聚合酶结合位点是转录起始位点,是一段特殊的位于编码基因上游的DNA序列.这段DNA序列可以结合RNA聚合酶,从而起始转录过程.经典的RNA聚合酶结合位點是TATA box.

TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面都有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点.

1、以DNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶的結合点在DNA上。

2、但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 （也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶）,它们的结合位点在RNA上

3、DNA结合位点(英语:DNA binding sites)是存在于DNA仩的与其它分子相绑定的各类结合位点。DNA结合位点也包括了其它蛋白的靶点如限制性核酸内切酶、位点特异性重组酶(见位点专一重组)及甲基转移酶类。

DNA结合位点与其它结合位点的区别在于：

（1）它们是DNA序列（如一个基因组）中的一部分；

（2）它们被DNA结合蛋白所绑定DNA结合位点常常与一类被称为转录因子的特殊蛋白相联系起来，并因此联系到转录调控针对特定的一个转录因子的DNA结合位点总和常被命名为该轉录因子的顺反组。DNA结合位点也包括了其它蛋白的靶点如限制性核酸内切酶、位点特异性重组酶（见位点专一重组）及甲基转移酶类

以DNA為模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶都的结合位点都在DNA上。结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列

TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面嘟有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点。

聚合酶(polymerase)又称DNA聚合酶是专门生物催化合成脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一类酶的统称。1957年美国科学家阿瑟·科恩伯格(Arthur Kornberg)发现。

III)被发现原核生物中主要的DNA聚合酶及负责染色体复制的是Pol III。

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  • DNA聚合酶的共同特点是：⑴需要提供合成模板；⑵不能起始新的DNA链必须要有引物提供3OH；⑶合成的方向都是5→3⑷除聚合DNA外还有其它功能
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