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学位授予单位：&
授予学位：硕士
学位年度：2012
摘要:银杏是我国传统的药源植物，本研讨以春季的银杏幼叶为外植体，经由过程树立悬浮细胞造就系统，商量分歧浓度的NaCl和稀土铈（Ce3+）对细胞发展心理及黄酮代谢的影响，重要结论以下：1、以春季的银杏幼叶为外植体，树立无菌造就系统。经由正交设计和叶块发展情形的综合剖析，注解以70%酒精30s+0。1%升汞8min的消毒灭菌计划最好。该灭菌组合处置下叶片的成活率高而净化率、褐化率绝对较低，利于子女的继代造就。2、愈伤组织引诱率最高的组合为：MS+NAA1。0mg/L+KT1。0mg/L；细胞悬浮造就成活率最高的激素组合为：NAA1。0mg/L+KT0。5mg/L。3、分歧浓度NaCl对细胞的发展心理和黄酮含量的影响注解：当NaCl浓度为550mmol/L时，利于细胞发展，生物量和卵白质的积聚，含水量高，而膜透性低；100mmol/L时，MDA含量和PAL活性到达最年夜值，125mmol/L时，脯氨酸含量到达最年夜值；当NaCl浓度为25和175mmol/L时，黄酮含量分离涌现峰值，前者是增进细胞发展，积聚生物量的浓度值，后者是构成钳制，细胞转入次生代谢门路时的浓度值。4、分歧浓度NaCl对细胞发展和黄酮含量静态变更的影响注解：造就基中添加必定浓度的NaCl可以延长分解黄酮的时光，这类效应以较低浓度NaCl为佳（25、75mmol/L），造就第4d时黄酮分解量显著进步，高浓度NaCl（150mmol/L）处置组在造就第16d时，涌现了褐化，总黄酮含量显著高于造就时代其他处置组，能够与此时的细胞遭到严重钳制，次生代谢加强有关。5、分歧浓度Ce3+对细胞的发展心理和黄酮含量的影响注解：当Ce3+浓度为0。5mmol/L时，细胞发展兴旺，活气较强，生物量和可溶性卵白质含量最高；Ce3+浓度为1mmol/L时，对细胞膜形成必定损害，细胞发展变慢，安慰了次生代谢的加强，黄酮含量最高。6、分歧浓度Ce3+对细胞发展和黄酮含量静态变更的影响注解：第12d时，对比、0。1、0。5、1mmol/L处置组的细胞干鲜重均到达了最年夜值，0。5mmol/L处置组在第9d时干鲜重高于其他处置组，第12d时干重高于其他处置组。注解低浓度Ce3+可以明显增进细胞的发展，加快代谢、生物量的积聚。黄酮含量的静态剖析注解，造就第6d时低浓度（0。1、0。5mmol/L）Ce3+可以明显进步黄酮含量，高浓度（1mmol/L）处置组第12d时含量显著高于其他处置组，能够因为此时细胞遭到重度钳制，次生代谢显著加强。
Abstract:Ginkgo biloba is a traditional Chinese medicine source plant, in this research, the spring of the ginkgo leaves as explants, through the process of establishing cell suspension train system, discuss the different concentrations of NaCl and rare earth cerium (Ce3) effect on cell development and metabolism of flavonoids in psychology, the following important conclusions: 1, in the spring of Ginkgo leaves as explants create system, establish the sterile. Through comprehensive analysis of orthogonal design and leaf development situation, annotated with 70 alcohol for 30s 0. Disinfection and sterilization in 1 HgCl2 8min the best plan. The survival rate of sterilization combined disposal leaves under high purification rate, browning rate is relatively low, for children to create the subculture. 2, the highest rate of callus lure was: MS NAA1. 0mg/L KT1. 0mg/L; cell suspension makes the survival rate was the highest in hormone combinations: NAA1. 0mg/L KT0. 5mg/L. Effect of different concentration of 3, notes NaCl on cell development psychology and Huang Tong content: when the concentration of NaCl was 550mmol/L, beneficial to the cell development, biomass and protein accumulation, high water content, and the membrane the 100mmol/L, MDA content and PAL activity reached the most Nianye value, 125mmol/L, proline content rea when the concentration of NaCl is 25 and 175mmol/L, the content of the emergence peak separation of Huang Tong, the former is promoting cell development, the accumulation of biomass concentration values, the latter is composed of clamping, cells into secondary metabolism path when the value of concentration. Effect of different concentration of 4, notes NaCl on cell development and flavonoid content of static change: create add must concentration NaCl medium can prolong the decomposition of flavonoids in time, this kind of effect at low concentration of NaCl was better (25, 75mmol/L), creating the first 4D flavonoids decomposed significantly progress, high concentration of NaCl (150mmol/L) treatment group in creating the first 16d, the emergence of browning, the content of total flavonoids was significantly higher than that of other treatment groups to create the times, with the cells was severely muzzled, secondary metabolism related to strengthening. Effect of different concentration of 5, notes Ce3 on cell development psychology and flavonoid content: when the concentration of Ce3 was 0. 5mmol/L cells are thriving vitality, strong, biomass and soluble protein cont the concentration of Ce3 was 1mmol/L, the formation will damage to the cell membrane, cell development slow, comfort the strengthening of secondary metabolism of flavonoids content in the highest. Effect of different concentration of 6, notes Ce3 on cell development and flavonoid content of static change: 12D, contrast, 0. 1, 0. 5, in 1mmol/L treated cells dry weight and fresh weight reached maximum value, 0. In 5mmol/L treated fresh weight was higher than other treatment groups in the 9D stem, the first 12D dry weight than the other treatment groups. Note the low concentration Ce3 can obviously promote the cell development, accelerate metabolism, biomass accumulation. Static analysis of annotated flavonoids content, make the low concentrations of 6D (0. 1, 0. 5mmol/L) Ce3 can significantly improve the flavonoids content, high concentration (1mmol/L) disposal group at 12D were significantly higher than other treatment groups, because the cells were severe clamp can be significantly strengthened, secondary metabolism.
目录:致谢3-4摘要4-5Abstract5-6第一部分 文献综述12-22&&&&1 银杏资源概述12-16&&&&&&&&1.1 形态及地理分布12&&&&&&&&1.2 银杏提取物（EGB）及应用12-15&&&&&&&&&&&&1.2.1 银杏黄酮成分及药效13&&&&&&&&&&&&1.2.2 银杏萜内酯及药效13-14&&&&&&&&&&&&1.2.3 银杏多糖及药效14&&&&&&&&&&&&1.2.4 氨基酸类化合物14&&&&&&&&&&&&1.2.5 其他有效成分14-15&&&&&&&&1.3 银杏提取物（EGB）获得途径15-16&&&&&&&&&&&&1.3.1 传统方法15&&&&&&&&&&&&1.3.2 组织培养方法15-16&&&&2 植物细胞培养及其调控16-19&&&&&&&&2.1 植物细胞培养16&&&&&&&&2.2 调控方法16-19&&&&&&&&&&&&2.2.1 物理方法17-18&&&&&&&&&&&&2.2.2 化学方法18-19&&&&3 黄酮类化合物的提取分离方法及应用19-21&&&&&&&&3.1 溶剂提取法19-20&&&&&&&&3.2 超声波提取法20&&&&&&&&3.3 微波助提法20&&&&&&&&3.4 pH 梯度萃取20&&&&&&&&3.5 超临界 CO2萃取法20-21&&&&&&&&3.6 酶法提取21&&&&4 课题来源、研究背景及意义21-22&&&&&&&&4.1 课题来源21&&&&&&&&4.2 研究背景及意义21-22第二部分 银杏叶片悬浮细胞培养体系建立22-29&&&&1 无菌体系的建立22-24&&&&&&&&1.1 材料22&&&&&&&&1.2 方法22&&&&&&&&1.3 培养条件22-23&&&&&&&&1.4 统计分析方法23&&&&&&&&1.5 结果与分析23-24&&&&2 愈伤组织的诱导24-25&&&&&&&&2.1 材料24&&&&&&&&2.2 方法24&&&&&&&&2.3 培养条件24&&&&&&&&2.4 统计分析方法24&&&&&&&&2.5 结果与分析24-25&&&&3 悬浮细胞培养体系的建立25-27&&&&&&&&3.1 材料25&&&&&&&&3.2 方法25&&&&&&&&3.3 培养条件25&&&&&&&&3.4 统计分析方法25&&&&&&&&3.5 结果与分析25-27&&&&4 结论与讨论27-29&&&&&&&&4.1 消毒方法的筛选27&&&&&&&&4.2 银杏愈伤组织诱导和悬浮细胞培养的优化27-29第三部分 NaCl 对银杏悬浮细胞生长及黄酮代谢的影响29-48&&&&1 材料29&&&&2 处理方法29&&&&&&&&2.1 不同浓度 NaCl 对细胞生长生理及黄酮含量的影响29&&&&&&&&2.2 不同浓度 NaCl 对细胞生长及黄酮含量动态变化的影响29&&&&3 测定指标及方法29-31&&&&&&&&3.1 细胞生长量29&&&&&&&&3.2 含水量29&&&&&&&&3.3 相对电导率29-30&&&&&&&&3.4 丙二醛（MDA）含量30&&&&&&&&3.5 可溶性蛋白（Pr）含量30&&&&&&&&3.6 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性30&&&&&&&&3.7 脯氨酸（Pro）含量30&&&&&&&&3.8 黄酮的提取及含量测定30-31&&&&&&&&&&&&3.8.1 黄酮的提取30-31&&&&&&&&&&&&3.8.2 含量测定31&&&&4.统计分析方法31&&&&5 结果与分析31-45&&&&&&&&5.1 不同浓度 NaCl 对细胞生长及生理的影响31-42&&&&&&&&&&&&5.1.0 不同处理之间生理指标的多重对比31-32&&&&&&&&&&&&5.1.1 生长量32-33&&&&&&&&&&&&5.1.2 含水量33-34&&&&&&&&&&&&5.1.3 相对电导率34&&&&&&&&&&&&5.1.4 丙二醛(MDA)含量34-35&&&&&&&&&&&&5.1.5 可溶性蛋白（Pr）含量35-36&&&&&&&&&&&&5.1.6 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性36-37&&&&&&&&&&&&5.1.7 脯氨酸（Pro）含量37&&&&&&&&&&&&5.1.8 黄酮含量37-41&&&&&&&&&&&&5.1.9 指标间的相关性分析41-42&&&&&&&&5.2 不同浓度 NaCl 对细胞生长及黄酮含量动态变化的影响42-45&&&&&&&&&&&&5.2.1 细胞生物量42-43&&&&&&&&&&&&5.2.2 槲皮素43-44&&&&&&&&&&&&5.2.3 山柰酚44-45&&&&&&&&&&&&5.2.4 总黄酮45&&&&6 结论与讨论45-48&&&&&&&&6.1 不同浓度 NaCl 对细胞生长生理及黄酮含量的影响46-47&&&&&&&&6.2 不同浓度 NaCl 对细胞生长及黄酮含量动态变化的影响47-48第四部分 铈（Ce~(3+)）对银杏悬浮细胞生长及黄酮代谢的影响48-62&&&&1 材料48&&&&2 处理方法48&&&&&&&&2.1 不同浓度铈（Ce~(3+)）对细胞生长生理及黄酮含量的影响48&&&&&&&&2.2 不同浓度铈（Ce~(3+)）对细胞生长及黄酮含量动态变化的影响48&&&&3 测定指标及方法48-49&&&&&&&&3.1 细胞生长量48&&&&&&&&3.2 含水量48&&&&&&&&3.3 相对电导率48-49&&&&&&&&3.4 丙二醛（MDA）含量49&&&&&&&&3.5 可溶性蛋白（Pr）含量49&&&&&&&&3.6 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性49&&&&&&&&3.7 黄酮的提取和含量测定49&&&&4.统计分析方法49&&&&5 结果与分析49-59&&&&&&&&5.1 不同浓度铈（Ce~(3+)）对细胞生长生理及黄酮含量的影响49-57&&&&&&&&&&&&5.1.1 不同处理之间生理指标的多重对比49-50&&&&&&&&&&&&5.1.2 生长量50-51&&&&&&&&&&&&5.1.3 含水量51&&&&&&&&&&&&5.1.4 相对电导率51-52&&&&&&&&&&&&5.1.5 丙二醛（MDA）含量52&&&&&&&&&&&&5.1.6 可溶性蛋白（Pr）含量52-53&&&&&&&&&&&&5.1.7 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性53-54&&&&&&&&&&&&5.1.8 黄酮含量54-56&&&&&&&&&&&&5.1.9 各指标间相关性分析56-57&&&&&&&&5.2 不同浓度铈（Ce~(3+)）对细胞生长及黄酮含量动态变化的影响57-59&&&&&&&&&&&&5.2.1 细胞生长量57-58&&&&&&&&&&&&5.2.2 槲皮素58&&&&&&&&&&&&5.2.3 山柰酚58-59&&&&&&&&&&&&5.2.4 总黄酮59&&&&6 结论与讨论59-62&&&&&&&&6.1 不同浓度 Ce~(3+)对细胞生长生理及黄酮含量的影响60&&&&&&&&6.2 不同浓度铈（Ce~(3+)）对细胞生长及黄酮含量动态变化的影响60-62第五部分 全文总结62-64&&&&1 结论62-63&&&&2 创新点与不足之处63&&&&3 展望63-64参考文献64-72详细摘要72-75
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