2015届高考生物一轮复习 第一单元 第3讲 细胞中的生物大分子 蛋白质和核酸课件 苏教版_百度文库
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2015届高考生物一轮复习 第一单元 第3讲 细胞中的生物大分子 蛋白质和核酸课件 苏教版|
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你可能喜欢下列实验中所用试剂错误的是 [] A．在观察植物细胞有丝分裂
练习题及答案
下列实验中所用试剂错误的是
[     ]
A．在观察植物细胞有丝分裂的实验中，使用醋酸洋红溶液使染色体着色B．在提取叶绿体色素的实验中，使用丙酮提取色素C．在DNA的粗提取与鉴定的实验中，使用氯化钠溶液析出DNAD．在蛋白质的鉴定的实验中，使用苏丹Ⅲ染液鉴定蛋白质
题型：单选题难度：中档来源：同步题
所属题型：单选题
试题难度系数：中档
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高中二年级生物试题“ 下列实验中所用试剂错误的是 [] A．在观察植物细胞有丝分裂”旨在考查同学们对
实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质、
实验：绿叶中色素的提取和分离、
实验：观察根尖分生组织细胞的有丝分裂、
DNA的粗提取与鉴定、
……等知识点的掌握情况，关于生物的核心考点解析如下：
此练习题为精华试题，现在没时间做？，以后再看。
根据试题考点，只列出了部分最相关的知识点，更多知识点请访问。
考点名称：
（1）还原糖的检测和观察常用材料：苹果和梨试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/ml的NaOH；乙液：0.05g/ml的CuSO4）注意事项：①还原糖有葡萄糖，果糖，麦芽糖；②甲乙液必须等量混合均匀后再加入样液中，现配现用；③必须用水浴加热颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色（2）脂肪的鉴定常用材料：花生子叶或向日葵种子试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液注意事项：①切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊。②酒精的作用是：洗去浮色③需使用显微镜观察④使用不同的染色剂染色时间不同颜色变化：橘黄色或红色（3）蛋白质的鉴定常用材料：鸡蛋清，黄豆组织样液，牛奶试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/ml的NaOH；B液：0.01g/ml的CuSO4）注意事项：①先加A液1ml，再加B液4滴②鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比颜色变化：变成紫色（4）淀粉的检测和观察常用材料：马铃薯试剂：碘液颜色变化：变蓝
考点名称：
一．实验原理：（1）叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮．乙醇等能提取色素。（2）层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析法来分离四种色素。二．实验材料：幼嫩、鲜绿的菠菜叶三．实验步骤：（1）提取色素（2）收集滤液（3）制备滤纸条（4）划滤液细线（5）纸层析法分离色素（6）观察实验结果四．实验结果：扩散最快即在层析纸上处于最上面的色素，而色素带的分布从上到下依次为胡萝卜素，叶黄素，叶绿素a，叶绿素b。五．注意问题：（1）滤纸条上的滤液细线，不能触及层析液的原因答：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。（2）提取和分离叶绿体色素的关键：答：提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿；②研磨要迅速、充分；③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。
考点名称：
一．实验目的：（1）制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片（2）观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期，比较细胞周期不同时期的时间长短。3．绘制植物细胞有丝分裂简图。二．实验原理：（1）在高等植物体内，有丝分裂常见于根尖、芽尖等分生区细胞。由于各个细胞的分裂是独立进行的，因此在同一分生组织中可以看到处于不同分裂时期的细胞。（2）染色体容易被碱性染料(如龙胆紫溶液)着色，通过在高倍显微镜下观察各个时期细胞内染色体（或染色质）的存在状态，就可判断这些细胞处于有丝分裂的哪个时期，进而认识有丝分裂的完整过程。三．实验材料： 洋葱(可用葱、蒜代替)。因为根尖生长点属于分生组织，细胞分裂能力强，易观察到有丝分裂各个时期的细胞。四．实验步骤：（1）根尖的培养（2）装片的制作(解离→漂洗→染色→制片)（3）观察制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键有以下几点：（1）剪取洋葱根尖材料时，应该在洋葱根尖细胞一天之中分裂最活跃的时间；（2）解离时，要将根尖细胞杀死，细胞间质被溶解，使细胞容易分离；（3）压片时，用力的大小要适当，要使根尖被压平，细胞分散开。
考点名称：
一、实验原理提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。（1）DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。此外，DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。（3）DNA的鉴定在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二、实验设计（1）实验材料的选取凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。（2）破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。注意：①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响?研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。（3）去除滤液中的杂质 方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。注意：①为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。②方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。（4）DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。三、实验步骤—以洋葱为实验材料（1）称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。 洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。（2）研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。（3）向滤液中加入95%的酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是记录生命遗传信息的重要物质——DNA。DNA析出的过程中，切忌震动和搅拌（不震动易于分层，我们就能很容易观察到上清液中的丝状物；搅拌会使非常柔软的DNA断裂成小段，不易取出）。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙签，DNA提取物就缠绕在牙签上了。（4）鉴定：取两支试管，编为1、2号，各加入2mol/L的氯化钠溶液2mL，向1号试管中加入一些白色纤维状物，振荡使其溶解，然后向两支试管中各加入2mL二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟。四、注意事项（1）以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。（2）加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。（3）二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。（4）DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系：当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。（5）盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。
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CopyRight & 沪江网2014专题5　 DNA与蛋白质技术　专题复习表解
当前位置：>>>>>>>>>>>>>>
（1）DNA粗提取与鉴定
（2）PCR技术的基本操作和应用&
（3）蛋白质的提取和分离&&&&&&&&&
掌握程度参考本考试大纲中的：
一、考核目标与要求
2．实验与探究能力
1.DNA与蛋白质提取分离与鉴定比较
DNA粗提取与鉴定
血红蛋白的提取和分离
盐析法、酒精沉淀法和显色法
凝胶色谱法和电泳法
1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同（如图）：
在2mol/LNaCl溶液中，DNA溶解，部分蛋白质盐析生成沉淀，过滤可除去部分蛋白质；在0.14mol/LNaCl溶液中时，DNA析出，过滤可除去部分蛋白质。
2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离。
3.利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA
凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程短，移动速度快；相对分子质量小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程长，移动速度慢。因此，样品中相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的分子后流出。因此得以分离。
2. 电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物大分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH下会带上正电或负电；在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极方向移动。电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的的。
实验材料的选取
一定要选取含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难。实验中一般选用鸡血或菜花作为实验材料，不选择哺乳动物的血细胞，因为其红细胞无核，很难提取到。
破碎细胞，获取含的滤液
以动物细胞为实验材料时，破碎细胞较容易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。以植物细胞为材料时，充分研磨破坏了细胞壁，洗涤剂中的表面活性剂成分能够与膜蛋白结合从而破坏细胞膜，这些为核的释放提供了通道。同时要加入食盐使溶解，便于提取。
去除滤液中的杂质
根据的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将与杂质分开。
（）利用在不同溶液中溶解度不同，通过控制溶液的浓度去除杂质。
（）直接在滤液中加入嫩肉粉，使嫩肉粉中的木瓜蛋白酶分解蛋白质。
（）将滤液放入0℃～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min，注意严格控制温度。
的析出与鉴定
在滤液中加入冷却的无水乙醇，并用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌，由于 DNA不溶于酒精，会出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸去表面的水分。
两支试管中各加入2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，搅拌使其充分溶解后，向两支试管中分别加入4mL 二苯胺试剂，混匀后沸水溶中加热5min，待试管冷却后，比较两试管的颜色变化，将发现加入DNA的试管中的溶液呈蓝色，从而鉴定DNA的存在。
血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
（）红细胞的洗涤。洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白。采用低速短时间离心，吸出上层透明的黄色液体，再加入五倍体积的生理盐水，重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。
（）血红蛋白的释放。红细胞在蒸馏水和的甲苯作用下破裂，释放血红蛋白。（）分离血红蛋白溶液。将混合液进行离心后会分层，第层的红色透明液体是血红蛋白。
粗分离――透析　目的是除去样品中的分子量较小的杂质。
纯化――凝胶色谱操作
（）凝胶色谱柱的制作
（）凝胶色谱柱的装填
装填前，凝胶用蒸馏水或者洗脱液充分溶胀。
凝胶装填要均匀，色谱柱内不能有气泡，一旦发现有，必须重装。
装填完后，立即用的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶，使凝胶装填紧密。
（）样品的加入和洗脱
按正确方法加样，不能破坏凝胶面。
进行洗脱时，等红色的蛋白质接近色谱柱底端时，采用试管收集。
纯度鉴定――聚丙烯酰胺凝胶电泳选做
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量,是根据大多数蛋白质都能与阳离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的负电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质分子相对迁移率的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子量的标准蛋白质的对数和相对迁移率所作的标准曲线中求出供试品的分子量。
（1）制备鸡血细胞液时，要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，使血液分层，取下层血细胞沉淀。
（2）获取较多DNA的关键是向鸡血细胞液加入足量的蒸馏水，以便使细胞膜和核膜破裂，核内物质释放出来。
（3）实验中共有3次过滤。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或黏稠物有关。第1、3次要取其滤液，使用的纱布为1―2层，第2次是要取其滤出的黏稠物，使用的纱布为多层。
（4）实验中有6次搅拌，除最后一次搅拌外，前5次搅拌要朝向一个方向，并且在析出DNA，DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。
（5）实验中有两次使用蒸馏水。一次在第1步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，不应少于5min，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第3步，加水是为了稀释氯化钠溶液。
（6）实验中有三次加氯化钠溶液。在步骤2中，当加入氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离，并溶解在氯化钠溶液中。在步骤5中，加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。在步骤8中，加的NaCl溶液的浓度比前2次低的多，但还是为溶解DNA。
（7）DNA进一步提纯时选用预冷95%的酒精作用是抑制核酸水解酶活性，防止DNA讲解；降低分子运动，易于形成沉淀；低温有利于增加DNA柔韧性，减少断裂。
（8）本实验成功的关键，是保证提取到足量且较纯净的DNA。因为DNA在细胞中含量少，所以在下列步骤中应特别注意：在步骤1中使用的鸡血的量要在180mL左右。提取细胞核物质时要充分搅拌5min以上。在步骤2中要充分晃动烧杯，在步骤3中加蒸馏水要控制好量，同时应用玻璃棒缓缓搅动使DNA聚集其上。在第4步中要使用多层纱布过滤，在第5步中要充分搅伴，在第7步中使用冷酒精。因为DNA易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少DNA的损失。
（9）盛放鸡血细胞液的容器和实验中的烧杯和试管最好也是塑料制的，因为玻璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA含量。
（10）二苯胺实际要现用现配，否则会影响鉴定效果。
洗涤红细胞时，洗涤次数过少，无法去除血浆蛋白；离心速度过高和时间过高会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，达不到分离的效果。
商品凝胶是干燥的颗粒，使用前需要放在洗脱液中膨胀，为了加速膨胀，可以加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温接近至沸腾，通常需1～。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内空气。
凝胶色谱柱的装填是分离关键之一，装填时要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填时不能有气泡，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。装填后不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。一旦出现上述现象都需重填。如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。
分离蛋白质时，要求各种蛋白质同时从相同起点开始分离，在凝胶色谱操作中加样时要保证分离样品进入凝胶层后再接通洗脱液，开始洗脱。在电泳操作中，通过浓缩胶的作用，将样品浓缩后再进入分离胶分离。
5.滴加样品时，吸管关口贴管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。
2.细胞内DNA复制与PCR技术的比较
在解旋酶作用下，细胞提供能量，部分DNA双链解开
80～100℃高温解旋DNA双链全部解开，不需要解旋酶
DNA解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶
TaqDNA聚合酶
可以是RNA或单链DNA分子片段
在引物基础上，一条链连续合成；另一条链不连续合成。再由DNA连接酶连接
分别从两条链的引物端开始，都是连续合成
体内温和条件
边解旋边复制& 半保留复制
体外快速扩增
受生物体自身控制
引物之间DNA片段
都需要提供DNA模板；以4种脱氧核苷酸(dNTP)为原料；都需要在一定缓冲溶液中进行；子链延伸的方向都是从5′→3′方向
微量离心管、微量移液器、DNA扩增仪（热循环仪）、台式高速离心机 、一次性枪头、紫外分光光度计
（1）准备：按照PCR反应体系配方将所需试剂摆放到实验桌上
（2）移液：用微量移液器按照配方在微量离心管加入各组分
（3）混合：盖严离心管盖子，防止脱落或液体外溅，并用手指轻弹管壁，使反应液混合均匀。
（4）离心：将微量离心管放在离心机上，离心约10s，目的使反应液集中在离心管底部，提高反应效率。
（5）反应：将离心管放入PCR仪中，设置程序进行反应。
（6）测定：用紫外光光度计测定DNA在260nm紫外线的光吸收值，计算DNA的含量。
其原理与细胞内DNA复制相似,但反应体系较简单，其基本过程为：①变性：通过加热至95℃左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，作为反应的模板。②退火（复性）：将温度降至引物的50℃左右或以下，引物与DNA模扳互补区域结合，形成杂交链。③延伸： 当反应体系温度升至72℃左右时，DNA聚合酶催化以引物为起始点的5@→3@DNA链延伸反应，形成新生DNA链。以上三步为一个循环，每一个循环的产物作为下一个循环的模板,如此循环30次，介于两个引物之间的DNA片段呈指数扩增。
(1)DNA扩增的理论数值
①开始有1条模板，则复制n次有2n条
②开始有m条模板，则复制n次有m×2n条
（2）计算DNA含量。公式：DNA含量(g)=50×（260nm的读数）×稀释倍数。
（1）为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压蒸气灭菌。
（2）在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。所有的成分都加入后，盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀，再将微量离心臂放在离心机上，离心约10s，使反应液集中在离心管底部，再放入PCR仪中& 进行反应。
1.DNA复制需要引物的原因：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从
3′端延伸DNA链。
2.当PCR体系的温度有变性后快速冷却到50℃左右时，引物与模板可结合，一般不需考虑解开的两个DNA链的重新结合，原因是：
（1）模板DNA比引物长得多，而且复杂得多，不易重新结合。
（2）引物和模板之间的碰撞机会远远高于模板互补链之间碰撞。
（3）加入的引物的量足够大而模板链数量少。
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