& 【求助】外周血淋巴细胞是贴壁生长还是悬浮
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【求助】外周血淋巴细胞是贴壁生长还是悬浮
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【求助】外周血淋巴细胞是贴壁生长还是悬浮
外周血淋巴细胞是贴壁生长还是悬浮，用什么培养基和培养条件，谢谢
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是悬浮生长的，贴壁的是单核细胞。
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外周血淋巴细胞主要是悬浮，一般用RPMI1640，也有用IMDM的，要看你试验的目的，培养条件与正常细胞培养一样，基本没有什么区别。
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但是有些时候，如果用培养本培养的话
淋巴细胞也会发生贴壁的现象
请问你们预见这样的情况吗？
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我做的是单核细胞，用的是1640，淋巴细胞贴壁的很少，粒细胞倒是有的时候贴壁。
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我得单核帖壁很少，10毫升血才有700000个
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淋巴细胞贴壁生长，有可能是被培养液或者血清中的某些因子激活，分化了
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淋巴细胞在1640培养液中是虚浮生长的，而且形态一般为圆形，较单核细胞小。
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外周血淋巴细胞是悬浮，其中如果发现贴壁的细胞是单核细胞！用1640培养。
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　外周血单个核细胞是悬浮生长，用含20%小牛血清的RPMI1640。条件是5%CO2，37℃。
　　培养基配方为：20%小牛血清；1.6% 1M HEPES 缓冲液；1.2% 0.2M 谷氨酰胺；0.5% PHA；4% CyA；1%青霉素和链霉素；RPNI 1640补足到100%。
　　以200ml为例，培养基各组分为：
　　小牛血清　40ml
　　1M hepes 3.2ml
　　0.2M 谷氨酰胺　2.4ml
　　0.5% PHA 1ml
　　RPNI 1640(含青链酶素)　　119.4ml丁香客App是丁香园社区的官方应用，聚合了丁香园论坛和丁香客的精彩内容。医生可通过丁香客App浏览论坛，也可以在这个医生群集的关系网络中分享和互动，建立更广泛的学术圈子。
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【求助】悬浮细胞怎么贴壁生长呢？
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这个帖子发布于7年零250天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我养的K562细胞最近感觉有好多是贴壁生长的，镜下看不是浮着的那种，不动，也不是贴壁的那种贴了就变形，还是圆的，但是大小有点不均匀，光泽也差一点，感觉是贴了，因为晃动瓶子它不动，到底是怎么回事呢？有那位知道请帮忙指点一下！谢了！还有最近所有的细胞在高倍镜下几乎都能看到那种长杆状小黑点在抖动，而且以前一直长的很好的细胞现在长的不好了，可是也有以前长的很不好最近反而还长好了，真是奇怪，也不知道这种小黑点是不是污染呢，K562“贴壁”生长和这种小黑点有没有关系呢？
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长杆状小黑点,在园子里看到帖子说是黑胶虫,快点想办法解决吧.我养的k562最近和你的情况差不多，也是沉底,我估计是状况不好了(以前没养过这个),还有出现皱缩状黑色同细胞大小差不多的东西,可见空泡,没见游走,估计是凋亡细胞,不知对否,互相交流吧
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养过K562细胞，这好像是细胞死掉了
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我想是和你细胞的状态有关吧 悬浮变为贴壁肯定是有问题了。但也不一定就是没办法了，如果你还有冻存的，我建议你复苏一管在培养。如果没有，你可以做一些处理试试 看 这些东西谁也不好说 首先你看你的液体变浑浊没有，排除污染。你也不妨先半数换液 换液前静止培养瓶两三小时， 看能否把黑色的物质去掉 然后再观察 。祝你好运
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你养的K562细胞是不是采取的半换液方法？我原来养的K562也出现过这种情况，建议你把它800转离心后转移到新瓶里养就能缓解这种情况了。不过这种方法仅限于细胞未污染时，若污染就只能重新复苏新细胞了。K562在没有污染时出现贴壁的情况，一般是因为细胞密度太大而引起的，密度太大当然就会影响它的活力了，细胞看起来就会显得没光泽。
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首先肯定一点你的细胞被污染了,你得重新复苏一支;其次是关于K562贴壁的情况,这很正常,活化的K562是贴壁生长的,这部分细胞在传代时弃取,也就是说传代时不要将这部分细胞吹打,直接传悬浮细胞就可以了.
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有时候是半换液，大多数情况还是要离心的，以前养的全扔了，打扫了培养室，重新配了培养基，今天重新复苏了，不知道会怎样，改天汇报生长状况
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同意 你可以用带负电荷的培养皿 防止细胞贴壁 不要选tc处理过的
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复苏的还是和以前一样,感觉有的要贴壁,但是背景比以前要干净,没有那么多小黑点了
关于丁香园贴壁生长与悬浮生长树突细胞的免疫学功能比较 第2页-临床医学论文-论文联盟
您好，游客
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贴壁生长与悬浮生长树突细胞的免疫学功能比较
　　1.8& 学分析&
　　采用SPSS13.0统计学进行统计学分析，所获数据用x±s表示，组间比较采用配对t检验。
　 　2& 结& 果
　　2.1& DCs的形态学变化&
　　用培养板和培养瓶培养的单个核细胞在刚贴壁的当天树突并不明显，多呈圆形（见图1A、图1B）。培养板中细胞经细胞因子诱导刺激后，于接种后第1天可见细胞有变长现象，并且有些细胞已开始出现树突；第5天可见细胞在一定程度上形成突起，形态不规则，同时有几个细胞聚集成团的现象；第7天细胞树突明显，已具有典型DCs形态，可见多细胞聚集成团的现象，且具有呈集落样生长趋势（见图1C）。在整个生长过程中，板中细胞细胞均呈贴壁生长，未见悬浮生长细胞。培养瓶中细胞，于接种第1天便开始有细胞悬起，第7天细胞基本处于悬浮状态，但分化程度不如板中DCs典型，细胞聚团生长现象不明显（见图1D）。
　　2.2& DCs对T淋巴细胞的促增殖作用结果&
　　T淋巴细胞经台酚蓝染色后，细胞活力＞95%。实验组与对照组各设4个复孔，490 nm下酶标检测仪测定结果见表1。表1& 不同生长状态DCs对T淋巴细胞的促增殖作用结果（略）
　　2.3& 体外诱导特异性CTL免疫反应结果&
　　每组均设4个复孔，490 nm酶标检测仪测定各组吸光度A值，结果见表2。表2& 不同生长状态DCs的混合淋巴细胞反应结果（略）
　 　3& 讨论
&&& 在本实验DCs培养过程中，用培养板培养的细胞始终处于贴壁生长状态，特别是经胰酶消化脱壁，培养1 d后又重新稳定贴壁，这进一步证明了所培养的细胞属贴壁生长类型，并非半贴壁或悬浮生长，与一些 文献 中描述不相符〔3～6〕。而用培养瓶培养的DCs先贴壁生长，后悬浮生长，与有关文献报道相符。
&&& 从形态学角度分析，用培养板培养的DCs分化状态优于用培养瓶培养的DCs，这一点可能由于细胞贴壁生长使细小树突变得明显，也可能由于贴壁生长状态本身利于DCs分化，但准确机制与原因尚不明确；另外，由于用培养板培养细胞更易贴壁，从单个核细胞以差速贴壁法分离单核细胞时会有更高的得率。但是，从功能学角度分析，在体外促进淋巴细胞增殖及体外诱导免疫反应方面，培养瓶中培养的DCs免疫学功能优于培养板中DCs。
&&& 本实验认为成熟DCs的生长状态应与实验室具体培养条件相关，特别是会受到培养介质的影响。成熟DCs并非总呈半贴壁或悬浮生长，也有贴壁生长的可能性，但其免疫学功能可能会因生长状态的改变而发生变化。然而，本实验只是对DCs的生长状态与其免疫学功能关系的初步探索，所检测的免疫学功能范围也较为局限，DCs的生长状态对其自身的其他免疫学特性的影响尚不明确，其相关机制仍需进一步探索与研究。
【 参考 文献】 & 　　1 才子斌，王 毅,李 薇，等.负载肿瘤抗原的DC体外诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究〔J〕. 中国 老年学杂志，)：1691?3.　　2 Agawal A，Agmwal S，Gupta S.Dendritic cells in human aging〔J〕.Exp Gerontol，): 421?6.　　3 王江平，王勤章，丁国富，等.膀胱肿瘤抗原致敏的树突状细胞诱导T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究〔J〕. 现代 肿瘤，): 2061?3.　　4 翟 妍，张震宇，乔宝丽.大鼠骨髓来源树突状细胞的分离与免疫学特征〔J〕.吉林大学学报(医学版)，):952?5.　　5 Chen WL，Wang JL，Shao CS,et al.Efficient induction of antitumor T cell immunity by exosomes derived from heat?shocked lymphoma cells〔J〕. Eur J Immunol，):.　　6 Corrigall VM，Vittecoq O，Panayi GS.Binding immunoglobulin protn? treated peripheral blood monocyte?derived dendritic cells are refractory to maturation and induce regulatory T?cell development〔J〕.Immunology，): 218?26.　　7 杜英，陈绍倩，黄玉敏，等.树突状细胞及exosome体外诱导抗脑胶质瘤细胞毒活性的研究〔J〕.免疫学杂志，): 664?7.　　8 赵丽波，李才，周维国.树突状细胞负载的肿瘤抗原肽疫苗抗脑胶质瘤作用的实验研究〔J〕.中国实验诊断学，): 21?3.　　9 程 琪，朱长焜，叶 枫，等.卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究〔J〕.实用癌症杂志，):113?6.转贴于论文联盟
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本栏目最新更新利用报告基因比较悬浮细胞与贴壁细胞对HIV-1假病毒感染效率的差异--《微生物学报》2012年07期
利用报告基因比较悬浮细胞与贴壁细胞对HIV-1假病毒感染效率的差异
【摘要】：【目的】研究用人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)-1假病毒感染带有β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)报告基因和HIV受体CD4+CCR5+的Tzmbl细胞,分析悬浮状态与贴壁状态对HIV-1假病毒感染Tzmbl细胞的影响,为进一步进行HIV生物学研究与中和抗体实验室评价提供实验基础。【方法】通过将pNL43 R-E-与编码HIV膜蛋白的质粒共转染293T细胞,收集上清,获得HIV假病毒。该假病毒感染悬浮的和贴壁的Tzmbl细胞后可表达β-gal报告蛋白,通过X-gal染色和仪器分析可测定表达β-gal报告基因的细胞数与细胞感染率。【结果】HIV假病毒感染悬浮细胞的效率高于其对贴壁的Tzmbl细胞感染的效率,且细胞的感染率的改变与病毒的型相关。【结论】该研究结果可为进一步利用具有单轮感染活性的HIV假病毒进行生物研究和中和抗体实验提供研究方法。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R512.91【正文快照】：
目前对人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiency virus,HIV)的防治迫在眉睫,人们正在努力致力于抗HIV药物的开发及疫苗的研究,为了更好的评价和比较HIV-1疫苗抗原是否能够诱导较强的中和抗体,需要建立一种具有良好重复性、准确、高通量的检测中和抗体的方法。最近几年,以假病毒
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刘世伟;[D];四川大学;2005年
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