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【求助】 如何定检测限，定量限&[精华]
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关于检测限和定量限的问题，我们可以引用新版指导原则来回答这个问题。检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。该验证指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证检出需控制的杂质。1、直观法 直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。检测限的测定是通过对一系列已知浓度被测物的试样进行分析，并以能准确、可靠检测被测物的最小量或最低浓度来建立。说明：直观分析方法主要用于滴定法等非仪器分析方法，比如在做滴定实验时，检测线一般是指能够发生阳性反应的最小浓度或量，比如，能够看到指示剂变色的最小浓度或量等。2、信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算可检出的最低浓度或量。一般以信噪比为3：1时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。无论用何种方法，均应用一定数量的试样，其浓度为近于或等于检测限，进行分析，以可靠地测定检测限。比如做液相色谱时，适当稀释样品的浓度，使其达到噪音的3倍即可，这个噪音应该是主峰的附近的峰或者说是最能影响主峰的峰。至于定量限，和检测相是同理的，可见下面：定量限定量限系指试样中的被分析物能够被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保证含量很少的杂质能够被准确测出。常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10：1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。1、直观法 直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。定量限一般通过对一系列含有已知浓度被测物的试样进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况下，来确定被测物能被定量的最小量。2、信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算出可检出的最低浓度或量。一般可信噪比为10：1。其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。无论用何种方法，均应用一定数量的试样，其浓度为近于或等于定量限，进行分析，以可靠地测定定量限。
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1.第一步,先进一针溶剂,测出主峰出峰处的峰高或面积,假设峰高为h2.第二步,进一针已知浓度(C)的 对照品,测得主峰的峰高或峰面积,假设峰高为H检测限浓度=(3 * c * h ) / H 其实检测限定量限本身就不是很精确的,所要求的只是一个大致的浓度,
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非常感谢 学习中！
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定量限系指试样中的被分析物能够被定量测定的 最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。
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4-药物的含量测定方法与验证-吴
药​物​分​析
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1％自身对照计算杂质含量
请问，在药品质量控制的有关物质一项的申报中，药监部门在批复中提到“有无系统适用性溶液及灵敏度测试溶液，杂质A，杂质B含量是否可按1％自身对照计算含量”。我想问，这里提到的1％自身对照计算含量具体如何操作，杂质的计算公式会是怎样的？另外系统适用性溶液指什么，是在问测试中有无固定要求的稀释溶液吗？
系统适用性溶液就是在实验之前，通过进样测定某溶液，并从其色谱图中得到塔板数、分离度等等适用性信息，并据此判断该系统是否适用于分析目标待测物，这个溶液就是系统适用性溶液。
灵敏度测试溶液应该和检测限、定量限的意思差不多，但不一定就是让你每次都进检测限多定量限溶液，而你是某一个用来衡量该系统是否达到分析时灵敏度要求的一个溶液，这个要看你的方法要求了。
杂质的计算可以有外标法、主成分自身对照法（加校正因子、不加校正因子）、归一化法。按照审评意见的话，你的杂质A、B应该是可以考虑主成份自身对照法，你考察一下主成份、杂质A、B之间的响应因子，如果在0.9~1.1之间，则认为不加校正因子可以主成份自身对照，对照时可以选主成份1%做自身对照。
计算时，如果是限度控制，则不用算出具体值，只比较峰面积即可；若要计算的话，实际上就是相当于把1%作为杂质对照品按照外标法计算公式计算就行了。
就是这个意思，祝LZ好运。 建议将杂质A，B单独研究一下，通过线性关系试验，得出响应因子（0.9至1.1之间可以用主成分自身对照法，范围外的用加校正因子的主成分自身对照法）；定量限、检测限、进样精密度、准确度等验证灵敏度。系统适用性将杂质A、B和主成分一起进样，考察的分离度，理论板数，拖尾因子等。 稀释到1%去比峰面积 其实是人家审评老师让你简化标准呢，如果通过响应因子对比，这两个杂质均在0.9~1.1之间，且其与主峰、相邻杂质峰的分离度均能达到要求，则可节省很多杂质对照，用相对比保留时间定杂质峰位、主成分自身对照法计算就好了，因为毕竟无论哪个项目的杂质制备量都是远远不够的。 : Originally posted by 星海慧儿 at
系统适用性溶液就是在实验之前，通过进样测定某溶液，并从其色谱图中得到塔板数、分离度等等适用性信息，并据此判断该系统是否适用于分析目标待测物，这个溶液就是系统适用性溶液。
灵敏度测试溶液应该和检测限、定 ... 我想问下，这种杂质计算方法，能在药典或者其它相关法典上找到吗？因为生产及技术部门都在国外，拿者法规给他们看是最能说明问题的&& 查看话题
新药研发中质量标准的建立，有关物质及含量的研究
各位大侠，真心求帮助，本人刚刚进入新药研发这个行业，从事药分工作，目前说白了就是建方法分离杂质和样品峰，然后建质量标准啥的，我自己也说不明白呢，我现在想请求的问题很多，挑几个主要的吧，
1. 含量测定和有关物质的分析是两个不同的分析方法是吗？我用的HPLC，如果是，那在含量测定的分析方法中只要把样品尽量分纯，不需要将其中的杂质峰也完全分开吧？还有就是在确定含量测定的分析方法时，需考察几个呢？因为我觉得我用现在的分离条件是分离出杂质峰了，但我不敢保证我换一个分离条件它就拉不出杂质峰了。如果确定了含量测定的分析方法，然后进行方法验证，之后就采用对照品进行外标法定量，来计算确定含量，是这样吗？
2. 关于有关物质的分析，在建立分析方法时，也需要将样品峰分纯，然后再将已知杂质都完全分离开吗？如果有未知杂质，是否需要将其定性呢？还是根据其大小来确定，如果很小就不关注了，这个限度是多大呢？再就是关于有关物质的限度，我查资料一般都是用百分比表示，这个百分比是如何计算的呢？是每个杂质的含量相对于主峰的含量百分比吗？还是直接用的面积归一化软件显示的面积百分比？如果我的杂质没有对照品，那如何通过自身对照来计算含量呢？
3. 进行降解试验时，会产生很多杂质峰，每一个都要分离开并且要定性吗？
4. 这些有关物质是如何确定的呢？是根据合成过程中可能产生的杂质来自己确定吗？因为如果进样品分析，这些杂质可能有看不见的，在做有有关物质的方法学验证时，供试溶液就是样品溶液吗？那可能有杂质看不到啊？还有就是那个对照液是怎么配置的呢？
我的问题可能比较低级，但刚接触真是不懂，希望哪位好些人能帮我回答一些，如果能告诉我个大概流程就更好了，我现在都无从下手，不知道一步一步该做哪样，焦头烂额的，网上是有好多资料，但可能已经很详细了，但我还是有好多不会具体操作，谢谢了
药物分析与化学分析完全不同，药物分析侧重方法可重复性，就是你今天测定的数据，要与一年以后甚至两三年后的数据进行比较，这就涉及方法的耐用性问题，既然选了这行，你就要好好地去读GMP法规，ICH法规，这些都是指导性原则 看来LZ是个很用心的人，你这些疑问好多刚刚踏入这个门槛的新人几乎都遇到过，你在这里提出来可见很用心。
今天时间不充裕，我们在这里就先简单聊一聊。
1.对物质进行含量等的分析研究其方法有很多，比如常见的滴定、GC、LC等。既然你用的LC那我们就简单谈谈这个：采用LC方法测定含量，常用的是外标法，即用已知含量的对照品来测定待测物的含量。采用外标法定量检测在方法学上应满足系统适用性、专属性、精密度、定量限、准确度、线性等的要求（详见中国药典附录），其中专属性就是你说的“分纯”的概念，这个是基本的要求。对于LC方法来说，一般先摸索有关物质的检测方法，在该基础上得到含量测定方法，这样可以保证专属性的要求，将可能的杂质和样品等峰都分开。
2.关于有关物质的分析检测，简单来讲你要先分析可能的杂质，比如说合成过程中的中间体、起始原料、副产物等，降解产物等；利用可获得的杂质先初步建立方法，一般大于0.1%的杂质要定性（详见杂质研究指导原则），经分析可能产生遗传毒性杂质的要严加控制。进行有关物质研究时应采用二极管阵列检测器等能够扫全谱的检测器，这样就能判断杂质分离情况。对于不能得到杂质对照品时，就可以采用降解试验进行破坏，并将样品在上述检测器上检测，通过全谱的结果考察方法的专属性。有关物质的计算一般有杂质对照品外标法（同含量测定的原理）、主成份自身对照法（加校正因子、不加校正因子）、归一化法，在选择时，首选外标法（定量准确），也可选用自身对照法（注意波长的选择、校正因子的测定），一般不用归一化法（偏差大）。
3.对于降解试验中的杂质应达到一定的分离度，要求是完全分离，但实际较难完全达到，不过一般应至少分离度1.0以上。
4.看到这个问题，我就肯定LZ是个认真的人，不用心的人不太可能发现这个问题。
就像你说的，有些杂质可能在LC上根本没有吸收或吸收很弱，那该怎么办呢？其实很简单，如果是无机杂质那么通过炽灼残渣、重金属、硫酸盐等相应项的检测，可以得到结果。对于有机杂质，首先分析一下（假如一定会产生这种杂质的情况下）这个杂质是不是不要的质控杂质，接着根据分子结构的特征，可以选择GC测定，或者质量型检测器如ELSD、RID等进行检测，有时也可将样品衍生化（接上有强紫外吸收的基团）后用LC检测（要考虑衍生化反应率的问题，不太常用）。
你说的样品溶液是什么，你用于分析的溶液就是样品溶液。在含量测定中，供试品溶液就是待测物的含量测定溶液，在有关物质测定中，供试品溶液就是你配制的一定浓度的待测物的溶液。
方法学的考察可以参见中国药典附录，定量还是限度检测，考察的内容有一点区别。
欢迎楼主加入这个行业，加油！ : Originally posted by 星海慧儿 at
看来LZ是个很用心的人，你这些疑问好多刚刚踏入这个门槛的新人几乎都遇到过，你在这里提出来可见很用心。
今天时间不充裕，我们在这里就先简单聊一聊。
1.对物质进行含量等的分析研究其方法有很多，比如常见的滴定 ... 真的非常非常感谢您能给与我这么细致的解释，但我还是有很多到具体你操作的问题就无从下手了，我再多学习学习吧！可能也没那么急，但我是个急脾气，搞不清楚就很茫然，谢谢了！ : Originally posted by xcbjl1234 at
真的非常非常感谢您能给与我这么细致的解释，但我还是有很多到具体你操作的问题就无从下手了，我再多学习学习吧！可能也没那么急，但我是个急脾气，搞不清楚就很茫然，谢谢了！... 不客气。有什么问题都欢迎常来小木虫这个平台和大家交流，o(∩_∩)o ... : Originally posted by ahwkl at
药物分析与化学分析完全不同，药物分析侧重方法可重复性，就是你今天测定的数据，要与一年以后甚至两三年后的数据进行比较，这就涉及方法的耐用性问题，既然选了这行，你就要好好地去读GMP法规，ICH法规，这些都是指 ... 同意你的观点 法规就是天条 必须遵循 分析方法开发与验证是一个较为刻板也是非常专业的的工作，需要积累。多看看法规，多看看专业书籍会对你有帮助。
Method Validation in Pharmaceutical Analysis 先看看这本书
药典也会有指导原则 : Originally posted by 1949stone at
分析方法开发与验证是一个较为刻板也是非常专业的的工作，需要积累。多看看法规，多看看专业书籍会对你有帮助。
Method Validation in Pharmaceutical Analysis 先看看这本书
药典也会有指导原则 谢谢，好的 1、含量和有关物质可以是两个不同的方法，也可以是同一个方法。有关物质和含量为同一个方法的例子还是有的，不过现在貌似少了。
关于HPLC的含量方法，其实它是由有关物质的分析方法演变而来的。有关物质的分析时间过于长，供试品浓度过大，色谱峰可能不是很好（例如，峰对称型、拖尾等），且这对色谱柱的损伤也较大。因此，在有关物质方法的基础上，改变色谱条件，例如，改变流动相比例、柱温、降低供试品浓度等因素，在不影响主峰纯度或者杂质、辅料峰不影响主峰测定的情况下，拟定有别于有关物质的专门的含量分析方法。
不过，我们现在做的药物研发基本上都有可参考的分析方法，含量初步考察杂质和辅料对主峰的干扰，线性即可。必要时可采用有关物质的降解样品进行含量测试，考察峰纯度和杂质的干扰。
原料的标定，当然是采用拟定的方法。对于原料的标定，则采用药典原料或者厂家的方法进行标定。
2、对于有关物质的分析方法的考察，是否需要购买全部的杂质。个人鄙见，根据自己的API工艺结合相关质量标准，拟定杂质的购买，进行方法的建立考察，对于外购的API最好能索取API厂家的合成路线，不过基本上不可能，这时对于杂质的购买，还是尽力购买可能的药典杂质吧。现在的杂质研究要求，也是严。上面不对之处，请指正。
对于杂质的相关要求，可以仔细研读ICH的杂质相关章节。对于降解试验的大于鉴定限度和界定限度的未知杂质，只有在稳定性期间增长大于ICH相关限度的才需鉴定。当然，在降解试验中出现的大于限度的未知杂质可以进行标记，例如相对保留时间，以便在稳定性期间密切关注。
未知杂质的限度参考ICH要求。对于未知杂质，一般默认其与主成分的相对校正因子为1.0，故可以采用不加校正因子的自身对照法（中国药典多采用此法定量未知杂质）或者采用主成分作为杂质对照品（USP多采用此种方法进行未知杂质的定量）进行定量。 已知杂质一般可以买到对照品的。有些标准中采用相对校正因子或者相对响应因子，以个人经验来说，如要采用相对校正因子进行杂质定量，有条件可以自行测定。很多情况下，可能存在出入。
3、降解试验的主要考察峰纯度以及可能的已知杂质与主成分的分离度，物料平衡情况。
关于物料平衡可以说道一下，关于物料平衡多少是合适呢？这个目前为止没有明确的指导原则说明，所以只要自圆其说就可以。我看到的资料中提到，在2002版的ICH中要求回收率为96%~10x%，后来也撤消了。个人认为，理想情况下，90%~110%就可以，因为杂质的相对校正因子为0.9~1.1可默认为1.0。其实，很多情况下可能达不到。
可是，我们应当明确降解试验它只是一种考察方法和开发方法的手段，物料不平衡的原因可能是局限于分析技术的不足，或者方法的缺陷。例如降解产物无紫外吸收，或者有紫外吸收但波长选择不合适，再者有些药物--甲硝唑的降解产物都无紫外吸收，甚至产生氨气挥发了。
降解试验的降解杂质只要不影响主峰的纯度以及需定量杂质与降解杂质的分离度即可。有条件的话，可以看看已知杂质的峰纯度。
我上传了一份关于降解试验的外文书籍，绝对的经典，链接地址：http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=6898614
4、再次强调，多看ICH杂质章节。制剂与原料对于杂质的要求是不一样的。现在强调“质量源于设计”，对于杂质的确定应当根据合成工艺和相关的理化知识进行确定，再采用试验进行确定，最终的杂质的确定是根据你的稳定性长期结果进行确定。根据实际的商业批次的稳定性再修改杂质的控制。不妨看看站内别人分享的资料---马小波博士（SFDA推出）。你采用原研的有关物质浓度即可。一般国外文献多采用1mg/ml进行讲解试验的，不妨采用之。你也可以采用较高浓度，以柱子不是过载很严重为终点。
方法学验证，杂质采用的是加标，回收率考察的。
个人鄙见，欢迎指正。:hand: : Originally posted by 星海慧儿 at
看来LZ是个很用心的人，你这些疑问好多刚刚踏入这个门槛的新人几乎都遇到过，你在这里提出来可见很用心。
今天时间不充裕，我们在这里就先简单聊一聊。
1.对物质进行含量等的分析研究其方法有很多，比如常见的滴定 ... 谢谢分享! 相当专业的回答, 而且很用心!:hand: : Originally posted by News at
1、含量和有关物质可以是两个不同的方法，也可以是同一个方法。有关物质和含量为同一个方法的例子还是有的，不过现在貌似少了。
关于HPLC的含量方法，其实它是由有关物质的分析方法演变而来的。有关物质的分析时间 ... 谢谢，太全面了，很感激！可是我不知道怎么送金币啊？;) : Originally posted by xcbjl1234 at
谢谢，太全面了，很感激！可是我不知道怎么送金币啊？;)... 你问版主吧，我不懂 : Originally posted by News at
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