微生物检验培养基质量控制技术_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
文档贡献者
评价文档：
&&¥1.00
&&¥3.00
&&¥3.00
&&¥3.00
&&¥3.00
喜欢此文档的还喜欢
微生物检验培养基质量控制技术
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
大小：4.57MB
登录百度文库，专享文档复制特权，财富值每天免费拿！
你可能喜欢实习一、培养基制备、消毒与灭菌
15:36:22&&&来源：&&&评论：&&
[实习一、培养基制备、消毒与灭菌] 一、目的和要求
通过实验掌握有关培养基的一般原理，常用培养基的制备方法和用途；了解消毒和灭菌的常用方法和适用范围，掌握干热灭菌和高压湿热灭菌的操作方法。
二．材料和用具
电炉、石棉网、铝锅、铁架、漏斗（带橡皮管的铁夹）、量杯、玻棒、标签、记号笔、纱布、未脱脂棉花、烧杯、小刀、药匙、粗天平、称量纸、三角瓶、试管。
马铃薯、蔗糖、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂。
1mol ml HCL、1mol ml NaOH、精密试纸（…… [本文关键词:灭菌 培养基 微生物 棉花 酒精]…
一、目的和要求
通过实验掌握有关培养基的一般原理，常用培养基的制备方法和用途；了解消毒和灭菌的常用方法和适用范围，掌握干热灭菌和高压湿热灭菌的操作方法。
二．材料和用具
电炉、石棉网、铝锅、铁架、漏斗（带橡皮管的铁夹）、量杯、玻棒、标签、记号笔、纱布、未脱脂棉花、烧杯、小刀、药匙、粗天平、称量纸、三角瓶、试管。
马铃薯、蔗糖、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂。
1mol/ml HCL、1mol/ml NaOH、精密试纸（pH6.8－8.2）。
高压灭菌锅、烘箱、培养皿、铝盒（装培养皿用）、吸管、塑料枪头、长铁筒（装吸管用）、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基、营养琼脂（NA）培养基、灭菌水。
三、内容与方法：
（一）培养基制备
1．培养基的种类 培养基的种类很多，名称各异，成分也各不相同。
根据培养基的形态不同有液体培养基（培养液）、半固体培养基和固体培养基三大类。
根据营养物质的来源不同，可分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
根据培养基的用途不同可分为生长繁殖培养基、加富（富集）培养基、贮存培养基、选择性培养基和鉴别培养基等。
2．常用培养基的制备
（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基 培养真菌最常用的培养基，成分如下：
去皮马铃薯 200 g 葡萄糖或蔗糖 20g
琼脂 15－20g 水 1000 ml
配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。标准试管（15&150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA） 是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。成分如下：
酵母浸膏 1g 牛肉浸膏 3g
蛋白胨 5-10g 蔗糖（或葡萄糖） l0g
琼脂 15-20g 水 1000ml
配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3） 玉米叶培养基 取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润， 加棉花塞后灭菌。天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基 查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：
NaNO3 2g K2HPO4 1 g
MgSO4&7H2O 0．5g KCl 0．5g
FeSO4 0．01g 蔗糖 30g
（5）灭菌水的配制 蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。一般每试管装10ml的蒸馏水。准备做系列稀释的灭菌水，每试管装9ml蒸馏水。三角瓶也可分装灭菌水。分装后的试管或三角瓶即可加棉花塞灭菌。如果自来水中含氯量太高，必须用蒸馏水灭菌备用，否则影响微生长。
3．培养基的分装与灭菌
配制好的培养液可直接通过漏斗分装在试管中或三角瓶中，加试管塞后灭菌。如是固体培养基，则应趁热用纱布过滤后立即通过漏斗分装在试管或三角瓶中。分装时应注意防止培养基粘附在管口或瓶口，如有粘附应用干净湿纱布仔细擦去。
供移植菌种用的斜面培养基，每支试管（150&15mm）盛有3－5ml培养基，倒培养皿（直径9cm）用的每支10ml。试管塞可以用未脱脂的棉花制成，也可用橡皮塞或泡沫塑料塞。
棉花塞的制作最普遍，其大小和松紧程度是否适当很重要，须反复练习才能制作出正确的棉塞，每人都应学会棉花塞的制作方法。通常选用未脱脂的经过弹松的棉花卷制。
培养基的灭菌一般都采用高压蒸气灭菌法，在1．1 kg ／ cm２（121℃）中保持20&30分钟。特殊的培养基（如牛乳、糖液等）才采用10磅10分钟的灭菌法，甚至采用过滤除菌的方法。
经过灭菌的培养基和灭菌水等应及时从灭菌锅内取出。要搁置斜面的，应在室温下稍冷却后再搁置成斜面，否则表面的冷凝水太多，会影响微生长发育。
4． 培养基的存放
灭菌后的培养基最好先放在30℃恒温箱中48-72小时，一方面可以使斜面上的水滴蒸发掉，又可以观察有无杂菌生长，经检查合格的培养基即可放在玻璃橱内备用，也可放在4℃冷橱中保存。不同种类的培养基应分类存放，写上标签，也可用不同色彩的帽或标签带作标记，以防混淆。
（二） 消毒
1．器具的消毒 玻璃缸、玻片、玻棒、刀剪等小型器具，洗净干燥后可用消毒剂擦拭，淋洗或浸泡消毒。常用的消毒剂有75％乙醇、5 ％煤酚皂（Lysol）、0．25％新洁尔灭等。
保湿接种材料所用的玻璃缸，及上面加盖的玻璃板，可先用酒精涂擦，再用点燃的酒精棉球擦一遍。利用酒精火焰消毒，同时将多余的酒精烧去。
2．工作场所的消毒 为创造无菌条件进行微生物的分离，工作场所必须先进行消毒。首先要做好室内特别是工作台的清洁工作，然后用水喷雾除去悬浮在空中的尘埃和微生物。有条件的工作室可用水蒸气除尘。较小的场所如无菌操作箱内可放一杯水，利用煮沸杯水时产生的蒸气除尘。要求较严的场所如无菌室、无菌操作箱、超净工作台、培养箱等，可用漂白粉、甲醛、新洁尔灭、乙醇、石炭酸、煤酚皂等消毒剂的溶液擦洗或喷雾提高消毒效果。必要时还可用紫外光灯照射消毒。
工作场所的空气消毒，可用石碳酸喷雾、甲醛熏蒸或硫磺熏蒸均能获得良好效果。
除尘消毒后的工作台上铺上湿纱布，并有次序地放好所需工具后就可以按预定的程序进行无菌操作。
3．分离材料的表面消毒 分离病原物所用的病组织材料要先经表面消毒，去除或杀死粘附在表面的微生物，而保存病组织内部的病原物才能分离获得纯培养。
表面消毒的方法是将病组织小块放在消毒剂中浸泡一定时间，取出沥去残留表面的消毒剂，用灭菌水清洗后分离。
常用的表面消毒剂有0．1％升汞溶液， 2－10％漂白粉溶液，或70％乙醇溶液等。
消毒前将病组织小块在70％乙醇溶液中浸5－10秒钟，驱除病组织表面的气泡，再放入0．1％升汞溶液处理2－5分钟让病组织与升汞溶液充分接触发挥消毒作用。升汞的毒性很大，配制好的溶液要加蓝色或红色染料标记。消毒后要用灭菌水清洗3次。
如不用升汞水消毒处理，也可用2&10％漂白粉溶液表面消毒，处理的时间一般为2-10分钟，也有长达30分钟。因为漂白粉液中的氯气能自行挥发，消毒后一般不必清洗，但如漂白粉溶液不够澄清，可以用灭菌水洗去残留在病组织上的漂白粉微粒。
从枝干或肉质组织上分离病原物时，常用70％乙醇溶液擦拭或浸泡消毒。也可以用酒精棉球涂擦分离部位再通过火焰将酒精烧去，如此反复1－2次，也可达到表面消毒甚至表面灭菌的效果。
（三）灭菌
１．高温灭菌
（1）火焰灭菌：直接用酒精灯或煤气灯的火焰烧灼器皿用具，灭菌彻底。对于接种饵（环、针）、镊子等金属用具可烧灼至发红，在空气中冷却后即处于无菌状态。玻棒、剪刀等可采用蘸酒精后通过火焰数次的方法达到灭菌的目的。
一些大的容器也可用少许酒精棉球涂擦烧灼的方法达到消毒或灭菌的要求。
（2）干热灭菌：使用干燥的热空气（176℃）保持1－2小时的方法杀死器皿中的微生物。各种玻璃器皿（培养皿、吸管、金属器具等）均可用干燥灭菌法灭菌，但所有棉纱或化学纤维制品、橡胶制品、塑料制品、含水的培养基等，均不能用干热灭菌法，否则会被烤焦变形、变性或炸裂。
使用电热干燥箱（烘箱）干热灭菌时，应注意下列几点：
①所有玻璃器皿要洗净、擦干或晾干后包装好，以防烤焦和炸裂。培养皿直接装入铝盒。单支吸管用纸卷好，再装入铁筒。
②烘箱中不能装得太满，以总容量的2／3为限，上部1／3应留有空隙。
③物品不能直接放在底板上，尽量不放纸和棉纱等易燃物品，非用不可时千万不能与箱壁接触。
④升温时要打开排气孔，在保温时关闭。灭菌后应让其自然降温至室温或低于60℃时才能取用，高温时不得打开箱门，以防炸裂。
（3）常压蒸气灭菌：此法是湿热灭菌的方法之一。材料放在不能密封的容器中，利用水蒸气杀死微生物。由于在常压下水蒸气的温度不超过100℃（在高海拔地区还要低些），因此并不能杀死所有微生物，但适用于糖溶液、牛奶等培养基的灭菌。巴斯德消毒法（Pasteurization）和间隙灭菌法都是常压蒸气灭菌法。
间隙灭菌法是将培养基等材料在常压下煮沸30分钟，然后放在28－30℃下培养24小时，每天煮沸一次，连续煮三次的方法，可以杀死包括芽孢在内所有的微生物，但不破坏或改变培养基的性质
（4）高压（蒸汽）灭菌：此法是微生物学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法。微生物的营养细胞在开水中即可被杀死，但有芽孢的细菌，常压下煮沸10分钟甚至2个小时也不死亡，要在加压的条件下提高温度才能全部杀死。通常都是在1．05 ka ／ cm 2或15磅/英寸2压力下保持20－30分钟。在此压力条件下温度可达到121．5℃，可以杀死细菌芽孢。
水蒸汽的温度与压力高低呈正相关，但是如果高压灭菌锅内不全是水蒸汽而有空气，则同样压力条件下温度就低。
常见的高压灭菌锅有卧式、立式和手提式三种，压力锅上的压力表刻度有&公斤／平方厘米&（kg/cm2）和&磅／平方英寸&（lb/in2）两种。
使用高压锅的注意事项：
（1）水要加足以防烧干；
（2）加盖密封时对称地旋紧密封螺丝，用力要均匀，防止密封不好而漏气；
（3）加温时要打开放气阀，直至空气完全排空才关闭升压；
（4）灭菌结束后要逐渐地打开排气阀，缓缓放气降压，不能过快，以防培养基沸腾而冲出容器或弄湿棉塞。
放气降压打开锅盖要及时，否则相对延长了加压加热时间，易使培养基成分分解变质，引起pH值的改变或产生沉淀物，同时容器上的棉花塞因长时间闷在水蒸气中，易被沾湿而增加污染的机会。
2．过滤除菌
一些不耐热的物质，在高温条件下会分解变质或失效，故不能用加热灭菌的方法，如抗菌素、血清、噬菌体、疫苗(vaccine)、糖类、氨基酸、维生素等，可采用特制的细菌滤器。
此外，还有空气过滤器，所用的材料是活性炭和棉花或玻璃纤维等，超净工作台的空气就是经过过滤除菌的纯净空气。
3．辐射灭菌
一定剂量的射线可以杀死微生物，常用的辐射处理方法有紫外线杀菌和电离辐射灭菌两类。
（1）紫外线灭菌 波长在 （260－280nm）之间的紫外线具有很强的杀菌能力很低，在距离光源20-50厘米之内的微生物，经照射3－10分钟即可被完全杀死，但它的穿不能透过普通玻璃。紫外线灭菌力。紫外线灭菌灯广泛应用于超净工作台、无菌室、手术室、病房等场所的空气消毒与灭菌。
（2）电离辐射 由放射性元素产生的射线如X-线、&-线等都有很强的穿透力和杀菌力，各种罐头食品和中成药等材料均可用射线灭菌。一般使用的照射剂量为40－60 kGy（戈瑞）或400-600万拉德（rad）。
3．化学灭菌
一些化学物质具有很强的杀菌和抑菌活性，如多种氧化剂或烷化剂，它们影响或破坏了微生物细胞的表面结构或内部生理活动，常用的如70％乙醇、0．1 ℅升汞、2-10％的漂白粉、0．5ppm氯气、3％的双氧水、3－8％甲醛、0．1-0．5％高锰酸钾、0．1&0．25％的新洁尔灭、1％碘酒、5％ 的石炭酸或煤酚皂等。此外还有0．2－0．5％过氧乙酸、生石灰、4％龙胆紫、0．01％硫柳汞等。特殊条件下还可用溴甲烷或氯化苦、环氧乙烷等气体熏蒸做灭生性处理。
四、作业与思考题
（1）为什么有的培养基要调节酸度值，有的可不调？
（2）为什么有时在1．1 kg/cm2灭菌30分钟后的培养基上仍然长出杂菌来？
（3）仔细思考日常生活中的保健知识，哪些与消毒和灭菌有关？哪些与微生物的培养基有关？
（4）在没有超净工作台或无菌室的实验室分离或移植微生物时，应怎样处理才能减少污染？
（5）试比较水、自来水、井水、矿泉水、沙滤水、水、重水和灭菌水的异同（从微生物学的角度来分析）
（6）试设想培养皿的灭菌方法可有几种？
五、实验时间
将本文分享到下面的网站：
相关热词搜索：
[实习一、培养基制备、消毒与灭菌]延伸阅读：
频道总排行
频道本月排行微生物知识查询
所在位置：-& -& -& 胆盐硫乳琼脂培养基
胆盐硫乳琼脂培养基
英文名称：
产品货号：HB4087-1
产品规格：250g
产品价格：100元
产品用途：肠道菌选择性培养基，特别是沙门氏菌的选择性分离
产品用途：肠道菌选择性培养基，特别是沙门氏菌的选择性分离
称取本品65.2g，加热溶解于1000ml纯化水中，待冷却至50-55℃，倾入无菌平皿，无需高压灭菌。
胆盐硫乳琼脂培养基相关产品:
产品货号产品名称产品规格产品说明及用途
HB0167-5R2A Agar250g用于纯化水中菌落总数的测定
HB5211Egg-Yolk Salt Agar Base250g用于药品，生物制品金黄色葡萄球菌选择性分离
HB5200Rose Bengal Agar Medium250g用于霉菌、酵母菌计数
HB5193Yeast Peptone Dextrose Agar250g用于测定酵母菌总数
HB8420Lactose Broth250g用于大肠菌群发酵试验
HB7010Eosin-Methylene Blue Agar250g弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌
HB6238Maconkey Agar Medium250g用于肠道致病菌的选择性分离、培养
HB5213MUG Medium100g用于大肠杆菌酶底物法检测
HB4086-3Tetrathionate Broth Base250g用于沙门氏菌选择性增菌培养
HB4089-1250g用于沙门氏菌，志贺氏菌的选择性分离培养
HB4121Sodium Tellurite Broth Base250g用于金黄色葡萄球菌选择性增菌培养
HB5187Pseudomonas Agar P250g用于铜绿假单胞菌的绿脓菌测定
HB0124-11Columbia Blood Agar Medium250g用于梭菌的选择性分离培养
HB0124-1a1ml*5每支添加于200ml哥伦比亚琼脂培养基中或培养基Q中
HB0316-1Clostridium enrichment Medium250g用于梭菌的增菌培养和计数
HB0236-21%Tween 80-Corn Agar Medium250g用于白色念球菌培养
HB0236-21%Tween 80-Corn Agar Medium250g用于鉴定白色念球菌和霉菌(产芽管试验)。
HB0253-8Sabouraud’s Glucose Agar Medium250g用于真菌的培养
HB0253-7Sabouraud’s Glucose Broth Medium250g用于真菌的培养
HB4088-5Triple Sugar Iron Agar250g用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选（葡萄糖，乳糖，蔗糖）
HB0110Lactose Bile Broth250g用于大肠菌群，粪大肠菌群，大肠杆菌的测定
HB4086a2ml*20支取一支添加于100mlTTB中或四硫磺酸钠亮绿培养基或液体连四硫酸盐培养基中
HB4086b1ml*20取一支添加于100mlTTB中或四硫磺酸钠亮绿培养基或液体连四硫酸盐培养基中
HB5024Mannitol Salt Agar Medium250g用于金黄色葡萄球菌选择性分离培养
HB7015Candida Chromogenic Medium1000ml用于白色念珠菌分离和鉴定
HB0124-1Columbia Agar Medium250g用于梭菌分离培养
HB4089-1Salmonella-Shigella250g用于沙门氏菌,志贺氏菌的选择性分离培养
HB6238-8Maconkey Agar Medium250g用于肠道致病菌的选择性分离培养
感兴趣的产品：
您的单位：
您的姓名：
联系电话：
详细地址：
常用邮箱：
请填写留言内容：*
地址：青岛市李沧区九水东路320号-25 &E-mail:
电话:3、935169&&&传真：0、&
& All Righs Reserved 青岛高科技工业园海博生物技术有限公司 版权所有