由ScFv构建而成的抗体库有什么橡木家具的优缺点点

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-05-17 14:14 标签： 集成灶的优缺点
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【求助】构建人ScFv噬菌体抗体库
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现在在构建人的单链噬菌体抗体库，已经从人的外周血中提了RNA，逆转录成cDNA了，下一步需要做PCR扩人抗体的重链及轻链可变区基因，连接起来构成ScFv基因，但是这个人抗体重链和轻链可变区的引物应该怎么得到呢？
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两种方法: 1, 做5'race找出抗体mRNA 5'端的序列, 据此序列设计重链和轻链可变区的引物2. 抗体序列有一定规律,有一定的相似性,你可以尝试设计简并引物, 扩出重链及轻链可变区基因.
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PCR扩人抗体的重链及轻链可变区基因需要设计兼并引物，可以多查一些中英文文章，我这里有一些，如有意向邮件联系：。
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文献很多，还有本书：antibody phage display: methods and protocols 可供参考。根据载体需要来设计引物和linker序列。
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我也想问问这个问题，引物设计纠结了一个月了，不知楼主咋整的
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也在设计引物。。。
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&&&浏览历史克伦特罗(Clenbuterol,CL)是1种人工合成的β_2-肾上腺素受体激动剂,常用作支气管扩张剂,用于支气管哮喘及肺气肿等呼吸疾病所致的支气管痉挛。当其应用剂量达到治疗量的5～10倍时,CL可增强肌肉发育,降低脂肪沉积。由于其特殊的生物学功能常被用做饲料添加剂非法用于动物的饲养。CL具有在体内吸收快,脂溶性高,残留性积累和半衰期长等药理特性,人在食用残留CL肉制品后引起的中毒事件不断发生,所以加强检测CL在肉制品中的残留非常必要。目前的理化检测方法存在仪器化程度高,检测成本高,难于推广等缺点;免疫学分析方法检测CL具有快速简便的特点,而免疫分析方法检测需要有CL的特异性抗体。 基因工程重组单克隆抗体化学结构特点与单克隆抗体相同,是具有稳定的免疫特异性的1类抗体。其中,单链抗体(singe chain variable fragment,ScFv)具有低或无免疫原性、分子量小、组织穿透力强、成本低、可大规模生产等特点。ScFv可以通过噬菌体展示技术或核糖体展示技术加以制备。核糖体展示技术(RD)是1种完全不依赖于细胞的体外展示技术,库容量远远大于应用较成熟的噬菌体展示技术,此外RD还具有建库和筛选...
Clenbuterol(Clenbuterol,CL) is a syntheticβ_2-adrenergic receptor agonists.It is often used for prevention and treatment of bronchiectasis as asthma and emphysema and other respiratory diseases caused by bronchial spasms.When its application to the treatment dose of 5～10 times can enhance muscle growth and reduce fat deposition. Because of its unique biological properties,it is often used as feed additives for animal husbandry illegally.As CL has the pharmacological properties of absorb fast in the body, hi...
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基于流式细胞术的scFv 抗体库筛选技术的建立
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人源性噬菌体抗体库与rhGCSF基因工程ScFv抗体的研究硕士论文.pdf132页
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浙江大学博士学位论文
一、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的构建和鉴定
目的 构建抗rhG-CSF噬菌体抗体文库，以探索制备rhG-CSF病诊疗用单克
隆抗体的新方法。方法 用文库构建试剂盒，以健康人外周血淋巴细胞为材料，
建立噬菌体抗体文库，并对其进行鉴定。结果 构建完成了一滴度为 6.42x
10'0cfu/ml的噬菌体抗体库。结论 rhG-CSF噬菌体抗体库的建立为对文库进行
进一步的筛选、表达奠定了基础。
二、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的筛选和阳性克隆的鉴定
目的 研制rhG-CSF的单链抗体。 方法 用rhG-CSF抗原 包板，对己构
建的抗rhG-CSF噬菌体抗体库进行3轮富集，然后用EL工SA法从富集的次级抗体
库中筛选阳性克隆，最后借助ELISA,SDS-PAGE和Western印迹等方法，根据克
隆表达产物与其它4种 抗原反应的情况，进行特异性鉴定。 结果 从随机挑
取的80个克隆中筛选到阳性克隆6个，经交叉筛选和鉴定最终获得特异性抗
rhG-CSF阳性克隆2个。 结论 用固相富集和ELISA筛选法可以从抗体库中有
效地筛选到抗rhG-CSF的阳性克隆，获得的抗体克隆可用于抗rhG-CSF单链抗
体的制备。
三、抗rhG-CSF噬菌体抗体基因结构分析
目的 对获得的抗rhG-CSF的抗体克隆进行基因分析。方法 将2株阳性
克隆抗体基因进行测序，并用NCBI和IgBlastAntibodyofImmunoglobulin
sequences中的软件，对DNA序列和由其推导的氨基酸序列进行分析，并对其二
级结构进行了模拟。结果G9和G32阳性克隆抗体基因的长度分别为7086p和
732bp，轻链和重链可变区基因与人免疫球蛋白基因有高度的同源性。推导的氨
基酸序列具有典型的抗体轻、重链可变区特征。对2株克隆抗体基因二
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