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P13K―Akt信号通路在七氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用
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　　摘要：目的 研究磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶（P13K-Akt）信号通路在七氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 雄性成年SD大鼠40只，按随机法分为5组（n=8）：假手术组（C组）、缺血再灌注组（IR组）、七氟醚预处理组（S组）、七氟醚预处理+抑制剂LY294002 组（S+LY组）和溶剂组（DMSO组）。采用夹闭双侧颈总动脉法制备脑缺血再灌注模型，灌注24 h后取大鼠海马组织，光镜下观察各组的病理学变化，免疫组化法检测磷酸化的Akt表达，TUNEL法计算细胞凋亡指数（AI）。结果 与C组相比，其余4组AI、p-Akt指标表达均增加（P<0.05），与IR组相比，S组AI表达降低显著（P<0.05），p-Akt表达明显增加（P<0.05），S+LY组及DMSO组AI和P-Akt表达差异无统计学意义。结论 七氟烷预处理可能通过激活PI3K/Akt 信号通路，减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。 中国论文网 /6/view-6262920.htm　　关键词：脑缺血再灌注；七氟醚预处理；磷脂酰肌醇3-激酶；蛋白质丝/苏氨酸激酶 　　中图分类号：R743 R285.5 文献标识码：A 　　doi：10.3969/j.issn.14.09.045 文章编号：（0-02 　　脑缺血再灌注损伤可引起脑细胞凋亡。苏氨酸激酶/磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸（P13K-Akt）是参与细胞增殖分化、抑制细胞凋亡，是细胞生存的一种重要信号通路之一[1]。研究表明，七氟烷预处理对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，而这种保护机制尚不完全明确[2，3]。本实验研究P13K-Akt信号通路来评价七氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 成年雄性SD大鼠40只，体重220 g～280 g（山西医科大学动物实验中心提供），按随机数字法，随机分为5组（n=8）：假手术组（C组）、缺血再灌注组（IR组）、七氟烷预处理组（S组）、七氟烷预处理+抑制剂LY294002（S+LY组）、溶剂组（DMSO组）。 　　1.2 模型制备及分组处理 采用夹闭双侧颈总动脉法制备脑缺血再灌注模型。大鼠称重，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，经口气管插管，接ALC-V8小型动物呼吸机（上海奥尔特生物科技有限公司）行机械通气，潮气量为（5～7）mL/kg，频率为60次/min，吸纯氧，流量为2 L/min，吸呼比1∶2。大鼠仰卧固定，颈前正中切开逐层分离，暴露双侧颈总动脉，然后用无创微动脉夹夹闭双侧颈总动脉20 min，松开动脉夹后恢复脑血流灌注，搏动恢复为建模成功。C组只分离双侧颈总动脉；IR组夹闭双侧颈总动脉缺血20 min，再灌注24 h；S组、S+LY组、DMSO组在缺血前60 min分别经七氟烷挥发罐（Aeommed vp3000）吸入2.4%七氟烷（sevoflurane，H，丸石制药株式会社）、2.4%七氟烷+侧脑室注入抑制剂LY294002（北京博奥森生物技术有限公司，溶于DMSO中，0.3 mg/kg）8 μL、侧脑室注入DMSO 8 μL，缺血20 min，再恢复灌注24 h。 　　1.3 标本采集 各组24 h灌注结束后取海马组织，置于10%甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下（×400）观察各组病理学变化。 　　1.4 磷酸化Akt（p-Akt）的检测 采用免疫组化法（PV-6001二步法，试剂购于北京中杉金桥生物技术有限公司）检测p-Akt的活性（p-Akt多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司）。光镜下p-Akt阳性胞浆呈现黄棕色，每张切片随机选取5个视野，用图像分析系统计算平均光密度值（OD值），作为评价阳性产物指标。 　　1.5 细胞凋亡的检测 TUNEL法检测脑细胞凋亡，检测程序按照TUNEL试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）说明书进行。随机选取5个视野，计算阳性细胞数占总细胞数的百分比（阳性细胞细胞核呈现棕色颗粒），所得指数即为凋亡指数（AI）。 　　1.6 统计学处理 用统计学SPSS17.0软件分析，实验数据采用均数±标准差（x±s）表示，组间行单因素方差分析，两两之间采用SNK法，P<0.05为差异有统计学意义。 　　2 结 果 　　2.1 大鼠脑细胞凋亡指数 AI及海马组织P-Akt表达 与C组比较，余4组凋亡指数AI及磷酸化Akt 表达均增加（P<0.05）。同IR组比较，S组凋亡指数AI表达降低明显（P<0.05），磷酸化Akt表达增加（P0.05）。与S组相比，S+LY组与DMSO组凋亡指数AI表达明显增加，磷酸化Akt表达降低显著（P<0.05）。详见表1。 　　表1 大鼠脑细胞凋亡指数AI及海马组织P-Akt表达（x±s） 　　2.2 各组海马组织光镜观察 C组神经元细胞分布均匀，形态正常，核圆形或椭圆形，核仁清楚可见。IR组、S+LY组及DMSO组脑细胞排列分布稀疏紊乱，数目减少，胞核固缩或溶解，边界模糊不清，核仁模糊，凋亡细胞增多。S组脑神经元细胞排列稍不整齐，大部分细胞结构尚清晰，细胞损伤轻微。 　　3 讨 论 　　有研究显示，选择2.4%的七氟烷浓度进行研究，以夹闭双侧颈动脉法制备大鼠脑缺血再灌注模型[4，5]。本实验结果显示，与S组比较，IR组AI值升高显著，p-Akt降低显著，海马组织病理学损伤明显，提示脑缺血再灌注损伤模型制备成功。 　　大鼠脑海马区神经元对脑缺血反应较敏感，表现为细胞的凋亡、坏死，最终导致神经元数目减少，进而影响生物学功能[6]，因此选其作为研究对象。本实验中，以凋亡指数AI来评价海马组织神经元细胞损伤情况，IR组细胞损伤严重，AI显著增高，S组AI降低明显，细胞坏死损伤轻微，说明七氟烷预处理能有效减少细胞凋亡，对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。
　　PI3K是一种联系胞外信号与细胞应答的桥梁分子，在上游或旁路信号分子的影响下，通过活化下游的多种效应分子，并作用于下游分子而调节细胞周期运行以及抑制细胞的凋亡[7]，而Akt是PI3K下游重要的效应介质之一，是该通路的中心枢纽和直接靶点，直接传递着PI3K的信息[8]，Akt磷酸化激活后，增加NOS生成、抑制下游凋亡蛋白Caspase-9等的表达，促进抗凋亡蛋白Bcl-2等的表达而发挥抗凋亡作用[9，10]，因此，PI3K-Akt信号通路对细胞的增殖和存活起着重要的作用[11]。研究表明，心肌缺血再灌注时，活化的Akt可以防止细胞凋亡，促进细胞的存活，减轻缺血再灌注损伤[12]。本研究结果显示，与IR组比较，S组P-Akt表达增加，使用PI3K特异性抑制剂LY294002后，P-Akt表达下调，七氟烷保护效应消失，提示PI3K-Akt信号通路介导了七氟烷预处理减轻脑缺血再灌注损伤中的作用。七氟烷预处理可通过激活PI3K/Akt信号通道而发挥减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。 　　参考文献： 　　[1] Dhanasekaran A，Gruenloh SK，Buonaccorsi JN，et al. Multiple antiapoptotic targets of the PI3K-Akt survival pathway are activated by epoxyeicosatrienoic acids to protect cardiomyocytes from hypoxia/anoxia[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，（2）：724-735. 　　[2] 邵建林，朱俊超，吴滨阳，等.异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CBS/H2S、iNOS/NO和HO-1/CO的影响[J].中华麻醉学杂志，）：907-910. 　　[3] 林红妃，朱智瑞，胡智勇.七氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].中华医学杂志，）：. 　　[4] Ye Z，Guo Q，Wang N，et al.Delayed neuroprotection induced by sevoflurane via opening mitochondrial ATP-sensitive potassium channels and p38 MAPK phosphorylation[J].Neurological Sciences，）：239-249. 　　[5] Zhao H，Sapolsky RM，Steinberg GK，et al.Interrupting reperfusion as a stroke therapy：Ischemic postconditioning reduces infarct size after focal ischemia in rats[J].J Cereb Blood Flow Metab，14-1121. 　　[6] 柯荔宁，王玮，林凌，等.缺氧对大鼠海马神经元生物学功能的影响[J].神经解剖学杂志，）：135- 140. 　　[7] 王维，张?.PI3K-Akt信号转导通路的研究进展[J].现代医药卫生，）：. 　　[8] 徐宪连，张英杰.心肌缺血后处理胞内信号转导研究进展[J].生命学，）：116-119. 　　[9] Krolikowski JG，Weihrauch D，Bienengraeber M，et al.Role of Erk1/2 p70g6k，and Enos in isoflurane-induce cardiopretection during early reperfusion in vivo[J].Can J Anaesth，）：174-182. 　　[10] Raphael，Abedat S，Rivo J，et al.Volatile anesthetic preconditioning attenuates myocardial apoptosis in rabbits after regional ischemia and reperfusion via Akt signaling and modulation of Bcl-2 family proteins[J].J Pharmacol Exp Ther，（1）：186-194. 　　[11] Osaki M，Oshimura M，Ito H.PIK3/Akt pathway：Its functions and alterations in human cancer [J].Apoptosis，）：667-676. 　　[12] Zhu M，Feng J，Lucchinetti E，et al.Ischemic postconditimdng pretects remodeled myocardium via the PIK3-PKB/Akt reperfusion injury salvage kinase pathway[J].Cardiovasc Res，）：152-162. 　　作者简介：杨华丽，女，硕士，现就读于山西医科大学（邮编：030001）；韩冲芳（通讯作者）、雒珉、王晓鹏、张建文、张卫卫，工作于山西大医院（邮编：030032）；周晓辉，就读于山西医科大学。 　　（收稿日期：） 　　（本文编辑 王雅洁）
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各位老师，能否提供一份SCI期刊文档和SCI-E文档。
两个一定要分开。
行业分类：生物、医药
回答时间： 13:04:27
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科学引文索引(Science Citation Index) 简称SCI ，创刊于1963年，是由美国人E.加菲尔德创立的美国科学情报研究所（Institute for Scientific Information，简称ISI，超链接地址）编辑出版的。是一种国际性的、多学科的综合性索引，涉及的学科有数、理、化、农、林、医和生物学等。SCI从来源期刊（超链接） 数量来看可分为SCI 和SCI-E 。SCI是指来源期刊为3500种左右的SCI印刷版和SCI 光盘版。SCI-E的全称是SCI-Expanded，又称SCI Search ，是SCI的扩展库，有来源期刊5300种，可通过国际联机和国际互联网进行检索。书本式SCI分为双月刊、年度累积本和多年累积本等三种形式，内容都包括五个部分：引文索引、专利引文索引、来源索引、机构索引和轮排主题索引。SCI不仅是一种大型的文献检索工具，而且是引文分析的极为重要的工具之一。
SCI（《科学引文索引》，英文全称为Science Citation Index）是美国科学情报研究所（Institute for Scientific Information，简称ISI，网址：/）出版的一部世界著名的期刊文献检索工具，其出版形式包括印刷版期刊和光盘版及联机数据库，现在还发行了互联网上Web版数据库。
　　 SCI收录全世界出版的数、理、化、农、林、医、生命科学、天文、地理、环境、材料、工程技术等自然科学各学科的核心期刊约3500种。ISI通过它严格的选刊标准和评估程序挑选刊源，而且每年略有增减，从而做到SCI收录的文献能全面覆盖全世界最重要和最有影响力的研究成果。
　　 ISI所谓最有影响力的研究成果，指的是报道这些成果的文献大量地被其它文献引用。为此，作为一部检索工具，SCI一反其它检索工具通过主题或分类途径检索文献的常规做法，而设置了独特的“引文索引”（Citation Index）。即通过先期的文献被当前文献的引用，来说明文献之间的相关性及先前文献对当前文献的影响力。
　　 SCI以上做法上的特点，使得SCI不仅作为一部文献检索工具使用，而且成为科研评价和的一种依据。科研机构被SCI收录的论文总量，反映整个机构的科研、尤其是基础研究的水平；个人的论文被SCI收录的数量及被引用次数，反映他的研究能力与学术水平。
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回答时间： 17:20:45
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EPIDEMIOL COMMUN H 英国 3 AM J OPHTHALMOL 美国 3 VOX SANG 瑞士 3 J HOSP INFECT 英国 3 ENDOSCOPY 德国 3 J ECT 美国 3 JPEN-PARENTER ENTER 美国 3 PSYCHIAT RES-NEUROIM 荷兰 3 MULT SCLER 英国 3 VIRCHOWS ARCH 德国 3 EUR J CLIN MICROBIOL 德国 3 J PHARM SCI 美国 3 INT J PARASITOL 英国 3 CLIN DIAGN LAB IMMUN 美国 3 CAN MED ASSOC J 加拿大 3 J NEUROCYTOL 英国 3 ANAESTHESIA 英国 3 DEV BRAIN RES 荷兰 3 DIGEST DIS SCI 美国 3 J AFFECT DISORDERS 荷兰 3 ACTA PSYCHIAT SCAND 瑞典 3 SCAND J IMMUNOL 挪威 3 J CLIN PHARMACOL 美国 3 ARCH FAM MED 美国 3 J PERIODONTOL 美国 3 J BIOMED MATER RES 美国 3 GEN COMP ENDOCR 美国 3 METABOLISM 美国 3 ANN EMERG MED 美国 3 J INTERF CYTOK RES 美国 3 PERSPECT DRUG DISCOV 荷兰 3 INT J LEGAL MED 德国 3 HEARING RES 荷兰 3 J PAIN SYMPTOM MANAG 美国 3 PROG BRAIN RES 荷兰 3 MICROSC RES TECHNIQ 美国 3 J REPROD IMMUNOL 荷兰 3 CLIN CHEM LAB MED 德国 3 J CLIN VIROL 荷兰 3 NEUROTOXICOLOGY 美国 3 J CLIN NEUROPHYSIOL 美国 3 EXP PARASITOL 美国 3 ANN EPIDEMIOL 美国 3 CLIN NEUROPHARMACOL 美国 3 DRUG DEVELOP RES 美国 3 MED MICROBIOL IMMUN 德国 3 SPINE 美国 3 NEUROIMMUNOMODULAT 瑞士 3 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MICROB PATHOGENESIS 英国 4 BRAIN RES BULL 英国 4 EUR J CLIN NUTR 英国 4 PRENATAL DIAG 英国 4 PARASITE IMMUNOL 英国 4 CLIN NEUROPHYSIOL 英国 4 PHARM SCI TECHNOL TO 英国 4 MELANOMA RES 英国 4 RES IMMUNOL 英国 4 ANTI-CANCER DRUG DES 英国 4 XENOBIOTICA 英国 4 BIOMATERIALS 英国 4 J BONE JOINT SURG BR 英国 4 ENDOCRINE 英国 4 PHARMACOL BIOCHEM BE 英国 4 BLOOD COAGUL FIBRIN 英国 4 T ROY SOC TROP MED H 英国 4 DEV MED CHILD NEUROL 英国 4 AGE AGEING 英国 4 J CLIN PATHOL 英国 4 EUR J VASC ENDOVASC 英国 4 NMR BIOMED 英国 4 SPORTS MED 英国 4 INT J DEV NEUROSCI 英国 4 INT J GERIATR PSYCH 英国 4 MED MYCOL 英国 4 SCAND J WORK ENV HEA 英国 4 ALCOHOL ALCOHOLISM 英国 4 J BIOMECH 英国 4 Q J EXP PSYCHOL-A 英国 4 TRANSFUSION MED 英国 4 J NEUROSCI METH 荷兰 4 JMRI-J MAGN RESON IM 美国 4 INT J GYNECOL PATHOL 美国 4 EUR J APPL PHYSIOL 德国 4 J NERV MENT DIS 美国 4 J PEDIATR GASTR NUTR 美国 4 BAILLIERE CLIN HAEM 英国 4 LEUKEMIA RES 英国 4 J WOMENS HEALTH 美国 4 J HEALTH POLIT POLIC 美国 4 ARCH PATHOL LAB MED 美国 4 CURR OPIN OBSTET GYN 美国 4 J SURG RES 美国 4 EAR HEARING 美国 4 PEDIATR ALLERGY IMMU 丹麦 4 IMMUNOL LETT 荷兰 4 J CANCER RES CLIN 德国 4 INT J CLIN LAB RES 意大利 4 LANGENBECK ARCH SURG 德国 4 PEDIATR NEPHROL 美国 4 ALCOHOL 英国 4 ACTA ANAT 瑞士 4 J COMPUT ASSIST TOMO 美国 4 JPN J PHYSIOL 日本 4 JPN J PHARMACOL 日本 4 PERCEPT PSYCHOPHYS 美国 4 PHARMACOTHERAPY 美国 4 J OCCUP ENVIRON MED 美国 4 CURR PROB CARDIOLOGY 美国 4 NEUROTOXICOL TERATOL 英国 4 ORAL MICROBIOL IMMUN 丹麦 4 BRIT J UROL 英国 4 EXP LUNG RES 美国 4 BAILLIERE CLIN GASTR 英国 4 J NEURAL TRANSM-SUPP 奥地利 4 INT J NEUROPSYCHOPH 英国 4 J ANTIBIOT 日本 4 CATHETER CARDIO INTE 美国 4 BAILLIERE CLIN RHEUM 英国 4 TOXICON 英国 4 MED ONCOL 英国 4 CURR EYE RES 美国 4 GEN HOSP PSYCHIAT 美国 4 INT J ORAL MAX IMPL 美国 4 EXP CLIN IMMUNOGENET 瑞士 4 HASTINGS CENT REP 美国 4 IEEE T BIO-MED ENG 美国 4 THROMB RES 英国 4 EUR J ORAL SCI 丹麦 4 J ANAT 英国 4 INT J COLORECTAL DIS 德国 4 J AUTONOM NERV SYST 荷兰 4 STAT MED 英国 4 J GLAUCOMA 美国 4 J INFECTION 美国 4 J INHERIT METAB DIS 荷兰 4 COMPR PSYCHIAT 美国 4 VIRUS GENES 美国 4 ANTI-CANCER DRUG 英国 4 ONCOL REP 希腊 4 CLIN INVEST MED 英国 4 ANAT REC 美国 4 J OROFAC 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回答时间： 19:17:36
两位专家的回答都很详细啊~！
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