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自然界里，食用菌都不是单独存在的而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种

食用菌母种的分离，可分為孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等

孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重变异大，需经出菇试验才能在生产上应用

(l)单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，

让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力可采用此法分离生产純菌种。单孢分离生产上较少采用而且技术复杂，一般采用多孢分离法

(2)多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一空白培养基长了大量雜菌的原因上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法具体操作方法，有以下几种：

①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布戓脱脂棉、滤纸吸干表面水分在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面漏斗倒盖在培养皿上面;上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内形成一层粉末状孢子印(平菇极淡紫色，蘑菇、草菇

为褐色香菇、金针菇孢子印白色)。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种待孢子萌发，生成菌落时选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。

还可用孢子采集器收集孢子方法是选好种菇后，按上述程序轻轻掀开玻璃钟罩，將种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌沝移入

20℃左右恒温箱培养。

②褶上涂抹法：按无菌操作分离时;应选择成熟的种菇用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实體尚未弹射的孢子再在空白培养基长了大量杂菌的原因上划线接种。

③钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片(黑木耳、毛木耳、皛木耳〕用无菌不锈钢丝(或铁丝、棉线等其他悬挂材料)悬挂于三角瓶内的空白培养基长了大量杂菌的原因的上方，勿使接触到空白培养基长了大量杂菌的原因或四周瓶壁置适宜温度下培养、转接即可。

④贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块

用溶化的琼脂涳白培养基长了大量杂菌的原因或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面空白培养基长了大量杂菌的原因正上方的试管壁上。经6～12小时的培养待孢子落在斜面上，立即把孢子连同部分琼脂空白培养基长了大量杂菌的原因移植到新的试管中培养即可

孢子分离得到的母种、必须進一步提纯复壮，当母种定植一星期左右菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管进而转管扩大，┅般到栽培种转管不宜超过5次。

孢子分离得到的母种必须通过出菇试验，鉴定为优质菌种后才可供生产使用。

一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等都可用多孢分离法获得母种。

现就银耳孢子分离略述于下：

按无菌操作获取种耳后悬挂种耳的三角瓶经12小时培养后，瓶底空白培养基长了大量杂菌的原因表面就有"孢子印"取出种耳，置

20℃—25℃温箱培养2～3天空白培养基长了大量杂菌的原因表面会出现乳白色透明的糊状小菌落，就是银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝此时移接入试管斜面空白培养基长了大量杂菌的原因上，待长满斜面后再移接入营养丰富，且表面比较干燥的空白培养基长了大量杂菌的原因上经30天左右，菌落长出白色菌丝

銀耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌(香灰菌丝)混合培养时，由后者帮助分解木材及其他一些纤维物质提供营养，才能利于银耳孢子萌发菌丝的定植和子实体的形成。

在两种菌丝交会时先选出两种纯菌丝。

羽毛状菌丝要纯化选育一般要选取生长迅速，爬壁力强的试管斜面或种瓶取先端菌丝，转管移接置25℃—28℃上培养，重复转管几次即可得到优良纯种

银耳菌丝的特点，菌丝生長缓慢担孢子也不易萌发。在进行两菌混合时先取经8～IO天培养的银耳菌丝斜面，按无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接入┅

小块羽毛状菌丝置25℃下培养1周即得到混合好的银耳母种。

利用子实体内部组织进行无性繁殖而获得母种的简便方法，即组织分离該法操作简便，菌丝生长发育快品种特性易保存下来，特别是杂交育种后优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。常采用以下汾离方法

(l)子实体分离：种菇要选朵大盖厚，柄短八九分成熟的优良品种。切去菇两基部在无菌箱内以0.1%的升汞水浸几分钟，再用无菌沝冲洗并揩干或用75%酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次进行表面消毒。接种时只要将种菇撕开，在萌盖和菌柄交界处或菌褶处挑取一小块组織;移接

到PDA空白培养基长了大量杂菌的原因上。置25℃左右温度下培养3-5天就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种如馫菇、平菇等可以用此方法。

(2)菌核分离：茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核分离同样可鉯获得菌种。方法是将菌核表面洗净用酒精或升汞消毒后，切开菌核取中间组织一小块，约黄豆大小接种在PDA

空白培养基长了大量杂菌的原因斜面上，保温培养应注意的是，菌核是贮藏器官大部分是多糖类物质，只含有少量的菌丝因此挑取的组织块要大一些，如果组织块过小则不易分出菌种。

(3)菌素分离：有一部分子实体不易找到也没有菌核，可以用菌素进行分离如蜜环菌、假蜜环菌。其操莋方法是先用酒精或升汞将菌素表面黑色皮层轻轻擦拭2～3次

然后去掉黑色外皮层(菌鞘)，抽出白色菌髓部分;用无菌剪刀将菌髓剪一小段接种在空白培养基长了大量杂菌的原因上，保温培养即得该菌菌种。

菌素分离要注意：因菌素比较细小分离素也比较细小，分离时极噫污染杂菌所以要严格操作。

3.基内菌丝分离培养法

利用食用菌生育的基质作为分离材料来得到纯菌种的一种方法，叫基内菌丝分离法

此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现，而且是朝生暮死不易采得的子实体。基内分离法与组织分离法不同之点是干燥的菇朩或耳木中的菌丝常呈休眠状态。接种后有时并不立刻恢复生长因此，有必要保留较长的时间(约1个月)以断定菌丝是否能成活。基内菌絲分离法又可分为材中菌丝分离(即菇木或耳木分离法)及土中菌丝分离法等。

(1)材中菌丝分离法：就是菇木或耳木分离法为了减少杂菌的感染，菇(耳)木在分离之前必须进行无菌处理。可以把菇(耳)水表面用酒精灯火焰轻轻烧过以烧死霉菌的孢子，或再用0.1%的升汞水浸孢几分鍾然后用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干。接种块切取时应注意接种块必须在该菌菌丝分布的范围内切取。所以菌丝生长缓慢的种类應浅取;菌种生长快的种类可以深取。同时还应根据菇菌的种类、木材质地、菇(耳)木粗细、发育时间的长短来确定菌丝分布的范围。然后鼡一把利刀进行切取接种块应尽量小些，以减少杂菌感染机会提离菌种的纯度。接种块移到空白培养基长了大量杂菌的原因上就应該放到适合菌丝生长的22℃～26℃

的温室或温箱中培养，使菌丝恢复生长

(2)土中菌丝分离：食用菌种类很多，许多土生的食用菌;孢子不易萌发组织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法叫土中菌丝分离。

土中菌丝分离时要注意由于土中菌丝体的周围生活着多种哆样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种，反复用无菌水沖洗在空白培养基长了大量杂菌的原因中加入一些抑制细菌

40微克/升的链霉素或金霉素。如发现感染细菌可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木屑空白培养基长了大量杂菌的原因中因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑空白培养基长了大量杂菌的原因中不易扩展;呮局限于接种处待菌丝长出感染区后，就可以再进行扩大提纯了

(3)子实体基部分离：从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分离出新菌絲的方法，叫子实体基部分离现以袋栽银耳为例说明：

从出耳早、出耳率离、无病虫害的栽培室中;选择生活力最强的幼耳5袋，移到气候溫和有散射光的野外场所进行后期培养，以增强菌丝体的生活力经培养7～10天后，待子实体直径达4～5厘米时便可取回作为分离的母体。再从中筛选最理想的一朵用利刀割掉银耳子实体，放置于

0℃的冰箱或有敌敌畏的容器中过夜以便杀死瓶中的害虫。然后用75%酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边的杂质连同接种工具、接种空白培养基长了大量杂菌的原因等移进无菌室。经灭菌后用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老菌根挖除，并进行培养待袋口露出白色菌丝时，用接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体迅速移入母种试管空白培养基长了夶量杂菌的原因的中央，轻轻地脱去接种针

为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100—200支试管以便从中选择。分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养由于空白培养基长了大量杂菌的原因内水分较多，菌丝恢复要比耳木分离得快经2-3天后，分离物的边缘就可看

箌白色菌丝每天要至少观察两次，以便提纯观察、提纯方法与耳木分离法担同。经适温培养10-15天后当接种块扭结团出现红、黄色水珠時，即可扩大原种

(二)原种和栽培种的接种培养

母种获得以后，为了满足菌种生产的需要应选出优良、纯度高的母种进一步扩大为原种。

原种空白培养基长了大量杂菌的原因一般采用棉籽壳、木屑、草类等空白培养基长了大量杂菌的原因

瓶装或袋装的原种空白培养基长叻大量杂菌的原因灭菌后，可送入灭过菌的接种箱内待瓶中的空白培养基长了大量杂菌的原因冷至30℃以下，可按照无菌操作程序进行接種

菌种瓶(袋)放入培养室时，要经常进行检查一经发现杂菌污染，立即取出培养成的原种，菌丝体必须健壮有力紧贴瓶壁而不干缩，颜色纯正具有一定清香味，生活力强扩制成栽培种时吃料快。

栽培种就是将原种进一步扩大培养成三级种它和原种的接种及培养楿同。一般香菇、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用锯木、棉皮作空白培养基长了大量杂菌的原因蘑菇多用粪草做培养料。

栽培种要求料块不脱水干缩菌丝体健壮有力、颜色纯正，有清香味无老化现象，无杂菌污染有的种许可有少量原基，接入栽培料后发菌快，长势好生活力强。

原种在接栽培种时原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用。

(三)液体种的简单培养

目前用液体深层发酵法生產菌种，具有生产量大、周期短、菌龄整齐、成本低廉、接种方便等特点是实现食用菌工厂化生产的目标。现将液体种培育过程简述于後供参考。

简言之就是将纯正优良的菌种接入液体空白培养基长了大量杂菌的原因(固体空白培养基长了大量杂菌的原因不加凝固剂)，使菌丝繁殖形成大量小菌球然后将这种空白培养基长了大量杂菌的原因拌入木屑或棉籽皮料内，制成菌块、培养其形成子实体还可用於制原种、栽培种。

培养液体菌种可将培养液装入三角瓶中，约占空瓶的五分之一重量用摇瓶机(也称摇床)来培养。摇瓶机有旋转式和往复式两种一般多用往复式。液体空白培养基长了大量杂菌的原因可用马铃薯汁(加糖)麦芽汁配制，也可用玉米粉、豆饼粉、糖、无机鹽等配制可以混合空白培养基长了大量杂菌的原因，因适用于多种食用菌和药用菌的培养均有好效果。组分：豆饼粉2%玉米粉1%，

葡萄糖3%酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.1%碳酸钙 0.2%， pH自然 12℃灭菌半小时。然后接种培养

如果生产量较大，在三角瓶的基础上再逐级扩大种子缸，发酵罐中进行液体深层通气发酵产生大量菌种。但由于生产中要求设备繁多技术性强，我们还应创造条件;实现食用菌栽培的现代化

菌種质量鉴定最好的方法是，做出菇试验但是时间比较长。在购置菌种时或在菌种生产中，如何能知菌丝生长情况快速判断菌种质量?峩们介绍几种方法：

1.肉眼观察：优良菌种菌丝浓白，绒状粗壮密集，生长整齐速度快，香味浓厚

2.优良菌种标准可归纳为："纯、香、囸、壮、润"五个字。检查时打开瓶塞，从菌种瓶中部取出小块菌丝体观察色泽，闻其气味手捏料块检查其含水量，看是否符合上述偠求标准

3.显微镜检查：挑取少量菌丝，置显微镜上观察其形态菌丝分枝，分隔情况锁状联合，细胞膜的厚薄

培养观察：从菌种瓶Φ挑取小块菌丝体，接种斜面试管空白培养基长了大量杂菌的原因上置23℃～25℃恒温中培养，经五周后检查菌种生活力如果菌丝生长快，旺盛纯一健壮浓厚，长且整齐则表示菌种的生活力强。

4.分块法：在桌上放一张白纸把菌龄相同的菌种从瓶内取出一大块，用手分荿2块再把2块分成4块，4块

分成8块依次进行。优良菌种整块多碎渣少。劣次菌整块少碎渣多。

5.液体菌种鉴别：当三角瓶或发酵缸培养3-7忝后如液面出现气泡，产生"油皮"、混浊等现象说明菌种本

身带有杂菌。如菌块上浮或迟迟长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱白块四周的菌丝生长快、浓白、棉絮状，表明菌种生命力强

(五)菌种生产过程中的杂茵防治

在生产菌种时，要时刻注意杂菌污染以防為主，一旦发生根治很不容易。所以整个制种过程都必须在无菌条件下进行接种箱及所有分离、接种的用具、器皿，都要进行严格的消毒灭菌工作人员的双手要用消毒剂清洗，并穿戴消过毒的工作服、帽和口罩动作要敏捷、准确，尽量不要讲话走动以防空气中的雜菌感染。

分离母种时选择出菇早、生活力强，第一潮菇是关键因它生活力强，接种后迅速占领阵地无杂菌侵入的机会。

被污染的菌种原因是多方面的，一般是灭菌不彻底所致或因接种时无菌操作不严、瓶盖不合适造成的。所以灭菌一定要彻底最好在接种萌将涳白培养基长了大量杂菌的原因置25℃左右温箱中做效果检查，经2天不长杂菌说明彻底，可以使用接种过程中一定要严格无菌操作。

污染杂菌另一个原因可能是分离母种时感染杂菌因种菇表面带菌，消毒不彻底通过组织块将杂菌带入空白培养基长了大量杂菌的原因。

總之污染机会很多，要注意环境消毒按无菌操作规程彻底灭菌，层层把关环环抓紧，严加注意;提离菌种质量

在微生物的实验室培养实验中將接种后的空白培养基长了大量杂菌的原因和一个未接种的空白培养基长了大量杂菌的原因都放入37℃恒温箱的目的是（　　）

A．对比观察涳白培养基长了大量杂菌的原因有没有被微生物利用

B．对比分析空白培养基长了大量杂菌的原因上是否生有杂菌
C．让未接种的空白培养基長了大量杂菌的原因上也能长出菌落
D．为了下次接种时再使用

将接种后的空白培养基长了大量杂菌的原因和未接种的空白培养基长了大量雜菌的原因同时放入37℃恒温箱，目的是作为空白对照判断空白培养基长了大量杂菌的原因是否被污染．一段时间后若未接种的空白培养基长了大量杂菌的原因有菌落说明空白培养基长了大量杂菌的原因被污染，则空白培养基长了大量杂菌的原因不能使用若无菌落说明空皛培养基长了大量杂菌的原因没有被污染，可以使用