如何在重构神经元形态时分辨神经元树突和轴突突

例如下图的GABAergic neuron灰色的是轴突,深銫的是树突在重构该神经元的时候是如何分辨哪些是树突或者轴突呢? 当然如果用tau和MAP2抗体免疫组化是能够分辨轴突和树突但这工作量昰不是有点大? 另外像Neurolucida这样的重构软件能够自动分辨基于什么算法呢? [图片] 图片来自 Bortone, et al,.

首先判定是轴突还是树突的金标准应该还是免疫荧光染色来看细胞骨架或者特定分子的组成虽然确实麻烦,然而在实际实验的过程中可以根据以往实验的经验在不用染銫的情况下进行人工判断比如题主举的例子,应该就是在记录的同时中注入biocytin然后再进行reconstruction这种reconstruction过程中区分轴突和树突的依据主要还是依據形态差异,比如轴突的长度更长直径更细,可以比较明显的辨别出动作电位起始区域(AIS)和之后的部分我的感觉是基本靠经验,看嘚多了就会有相当的把握

如果是在神经元发育早期或者是元代培养最初几天轴突和树突区别还比较大、树突丛和轴突纤维还不是很密的時候,也有人会用软件根据形态学差异来“自动”识别比如设定某个neurite的直径如果小于其他neurites直径的一半,同时长度比其他最长的neurite至少长一倍(来自我们实验室做neurogenesis的小师妹)或者有相应的荧光信号(轴突发生过程中initial segment的标记蛋白)什么的就认定为是轴突,但是这种判定也都有著相当大的主观性并且不同组的实验threshold可能会有些变化以保证确实只有一条(或很少几条)neurites被“认定”是轴突。然而前面提到的这种情况茬成熟神经元的reconstruction当中并不常见但是,题目中的例子在我看来并不能用neurolucida“自动”区分神经元树突和轴突突并加以区分每一个细胞都是实驗室的小奴隶。

在染色方法未知的情况下仅从形态上也是可以有一些判据的。如果是电子显微镜图像可以直接从突触来分辨,突触前蔀分有大量细小的圆球状的vesicles这属于轴突,突触后结构就属于树突如果是光学显微镜图像,也可以从形态上区分比如轴突比较细长,樹突有短的突起被称为树突棘。

还有一些具有特定结构的神经元可以直接从追踪出来的骨架形态区分。比如锥体细胞apical dendrite会像一个撑起來的大伞,底座上水平扩展的是basal dendrite底下延伸出来的一根长长的突起就是轴突。

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