为什么对正常组织细胞的原代培养传代次数有限？_百度知道细胞培养瓶
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细胞培养瓶
　细胞培养瓶株的选购一要注意细胞活性，另外还应注意培养基血清的选购，最好是同一品牌产品，有利细胞生长。细胞培养瓶复苏注意：1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。
细胞培养瓶商品描述
细胞培养瓶
细胞冻存和复苏可以：（1）用于生物学保种；（2）用于医学上干细胞研究；（3）用于传代培养。
输尿管，输尿管上皮
培养基和添加剂
F12K培养基(SIGMA,货号N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
A。仅供研究之用。
Reznikoff CA and Christian BJ. Human uroepithelial cell. U.S. Pat. 4,980,290 dated Dec. 25, 1990 Hay, R. J., Caputo, J. L., and Macy, M. L., Eds. (1992), ATCC Quality Control Methods for Cell Lines. 2nd edition, Published by ATCC. Caputo, J. L., Biosafety procedures in cell culture. J. Tissue Culture Methods 11:223-227, 1988. Fleming, D.O., Richardson, J. H., Tulis, J.J. and Vesley, D., (1995) Laboratory Safety: Principles and Practice. Second edition, ASM press, Washington, DC. Centers for Disease Control (1993), Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Human Health Service Publication No. (CDC) 93-8395. U.S. Dept. of Health and Human S 3rd Edition U.S. Government Printing Office Washington D.C.
细胞培养瓶
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人胚成骨细胞体外原代培养和鉴定
【摘要】：目的：针对成骨细胞原代分离培养常用方法——酶消化法的优缺点，探讨组织块法应用的可行性和应用价值。方法：取材于６个月引产胎儿头盖骨，以含５０ｍｇ／ＬＬ－抗坏血酸的ＤＭＥＭ培养液进行培养，细胞以碱性磷酸酶组化染色、骨钙素免疫组化染色、钙化结节ｖｏｎＫｏｓｓａ染色以及细胞形态观察进行起源鉴定。结果：原代培养第５天即有三角形或短梭形细胞自骨块游出，同时亦可见骨块逐渐碎裂。至第７天，碎裂的组织块下有三角形或方形细胞出现。至第１２天，细胞长满。所得细胞经碱性磷酸酶、骨钙素、钙化结节等指标的鉴定，证实为成骨细胞。结论：对成骨细胞而言，组织块法是一种可靠、简便、快速的细胞原代分离培养方法。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：Q343.6,【正文快照】：
人胚成骨细胞体外原代培养和鉴定李德华刘宝林吴军正陈建元摘要目的：针对成骨细胞原代分离培养常用方法——酶消化法的优缺点，探讨组织块法应用的可行性和应用价值。方法：取材于６个月引产胎儿头盖骨，以含５０ｍｇ／ＬＬ－抗坏血酸的ＤＭＥＭ培养液进行培养，细胞以碱性
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正常人骨膜内成骨细胞原代培养
正常人骨膜内成骨细胞原代培养
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实验材料：
1. 骨组织来源：手术切除之骨组织；
2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100&g/ml链霉素，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶溶液，1mg/mlⅠ型胶原酶溶液；
4. 培养液：RPMI 1640培养基，配制培养液时加入15%的小牛血清，并用5.6% NaHCO3 调节至pH 7.2.
实验方法：
1. 取人手术切除之骨膜，放入盛有缓冲液的培养皿中，去除附于骨膜上的结缔组织；
2. 将骨膜剪碎成1—2mm2大小的组织块（膜片）；
3. 加入0.1%EDTA与0.25%胰蛋白酶（1：1，V/V）混合消化液，在37℃下消化20—30min。以1000r/min离心1—2min，沉淀骨膜组织块，除去上清液；
4. 用缓冲液洗沉淀骨膜组织块2—3次，重复上述离心过程；
5. 在37℃下再用1mg/mlⅠ型胶原酶消化骨膜组织块约90min。离心（1000r/min，5—10min）以沉淀细胞，弃去消化液。再用培养液洗1—2次，离心收集细胞；
6. 加培养液于离心管中分散细胞，调成细胞密度1×106 —5×106 个/ml的悬液。将细胞悬液种植于培养瓶中。也可不使用消化酶而行植块培养法种植培养，培养条件同前；
7. 待细胞长满培养瓶壁后进行传代培养.
相关实验方法
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