免疫组织化学和动物组织免疫细胞化学技术的区别

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-09 07:39 标签： 动物组织免疫细胞化学技术

双重染色法免疫荧光组织化学染銫步骤

    若在同一标本中有A和B两种抗原需要同时显示A抗原的

用FITC标记，B抗原的抗体用TRITC标记可采用以下染色方法：

免疫荧光细胞化学双重染魚法

原代培养胚胎14天大鼠端脑细胞：在骨发生形态蛋白―{诱导下，乙酰胆碱转移酶(呈绿色荧光)和同源域蛋白Islet―1(呈红色荧光)共存于细胞质内(噭光扫描共聚焦显微镜观察)

    1．一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B)按直接法进行染色。

2．二步双染色法先用TRITC标记的A抗体進行免疫荧光染色再用FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作為两种不同的特异性一抗相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后滴加SABC-Cy3复合物，经荧光显微镜下观察已出现特异性荧光再进行FITC―抗小鼠IgG(二抗)的孵育，最后封片观察其结果A抗原呈现绿色荧光，B抗原呈现红色荧光此法应注意两种一抗在混合稀釋时，抗体的终浓度应为每一种抗体的工作浓度换言之，混合后的液体要同时满足两种一抗的工作浓度若两种一抗种属来源相同，必須分两次进行双重染色即先用第一种一抗和第一种荧光二抗对A抗原进行染色，洗涤后用第二种一抗和第二种荧光二抗对B抗原进行染色，否则会出现交叉反应而使染色无特异性

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