如何提高过表达两种质粒共转染步骤转染效率 plate

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-07-09 10:11 标签： 两种质粒共转染步骤
我现在在做共转染是两个两种質粒共转染步骤的共转染。
我认为将含目的基因的两种质粒共转染步骤和表达gfp的两种质粒共转染步骤共转染是用前者来表征一下转染的效率,但并不能保证所有转进去的细胞都是有两种两种质粒共转染步骤的.比如说两种两种质粒共转染步骤都是2微克,最后有80%细胞有绿色荧光,就说奣表达你目的基因的细胞也大概有80%.
这边我们也有人做三两种质粒共转染步骤共转染来产生病毒,只有三种两种质粒共转染步骤都进入一个细胞这个细胞才有产生病毒的能力在调整好转染条件的情况下，还是能达到很高的病毒滴度的
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【摘要】：目的构建S100A6基因重组慢疒毒两种质粒共转染步骤,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染A549细胞,实现在细胞中高效、稳定表达方法 PCR扩增S100A6基因序列,将目的基因与酶切线性化载体p Len O-DCE定向连接,转化E.Coli DH5α感受态细胞,对阳性重组子进行DNA测序及比对。将构建成功的目的两种质粒共转染步骤和辅助包装两种质粒共转染步驟共转染293T细胞生产病毒液,荧光显微镜观察报告基因在293T细胞中的荧光表达,判断重组慢病毒的感染效率用得到的病毒液转染人肺腺癌A549细胞,real-time PCR和Western blot檢测转染A549细胞后S100A6蛋白和S100A6 mRNA的表达。结果测序提示重组慢病毒两种质粒共转染步骤构建成功;荧光显微镜观察显示在包装细胞中获得较高的转染效率real-time PCR检测显示A549细胞中有S100A6 mRNA表达;Western blot显示S100A6蛋白在A549细胞中稳定表达。结论成功构建S100A6基因慢病毒表达载体,并成功感染A549细胞,实现在细胞中高效、稳定表達,为S100A6基因功能及特性的研究和探索提供了实验基础


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