潮霉素筛选浓度 b 筛选肿瘤细胞浓度一般是多少

潮霉素筛选浓度B(液体)怎么配置

潮霉素筛选浓度B(HygromycinB )是由吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素筛选浓度B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成目前常用于筛选和维持培养含潮霉素筛选浓度抗性基因的原核或真核细胞。  

    1)筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞);

    3)抗病毒剂由于潮霉素筛选浓度B选择性滲透进入毒感染增强通透性的细胞,而且具有抑制翻译的功效;

    4)作为驱虫药加入动物饲料;哺乳动物细胞选择的有效浓度通常是50μg/ml-1 mg/ml之间;对于植物细胞其有效浓度是20–200μg/ml;对于细菌,有效浓度是20–200μg/ml;对于真菌有效浓度是200μg–1 mg/ml。

   潮霉素筛选浓度B是微黄褐色无定形粉末有特殊气味,熔点160-180℃为弱碱,易溶于水、甲醇、乙醇易与许多有机酸和无机酸生成盐。

保存方法:溶液直接存放在2℃~8℃至少存放1年。

    蛋白质合成抑制剂可用于植物细胞培养等生化研究。


    潮霉素筛选浓度B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
    大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素筛选浓度抗性基因(hyg或hph)编码潮霉素筛选浓度B磷酸转移酶,将潮霉素筛选浓度B转化成不具有生物活性的磷酸化产物从而起到解毒作用。针对这一原理潮霉素筛选浓度B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素筛選浓度抗性基因的原核或者真核细胞另外,由于作用模式的差异常与G418 (Cat:G8161), (Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择潮黴素筛选浓度B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因为病毒感染增强通透性的细胞且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能

    注意:潮霉素筛选浓度B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用濃度为50-1000μg/mL对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线来确定佳筛选浓度。

    注意:为了筛选得到稳定表达目嘚蛋白的细胞株需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现至少选择5个浓度。

    1)  *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上37℃,CO2培养过一夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞可增加接种量。

    2)  根据细胞类型设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例可设定50,100250,500750,1000μg/mL先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液

     3)  第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基每个浓度做三个平荇孔。

     5)  按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死絕大多数细胞的低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

     1)  转染48h后用含有适当浓度的潮霉素筛选浓度B筛选培养基来传代细胞(直接传玳或者稀释后传代)。

    注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果好则当细胞过于稠密,其效率会降低为了得到较好的筛选效果,好将细胞稀释至丰度不超过25%

    3)  筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间这取决于宿主细胞类型,转染以及筛选效果。

    4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

   2) 本品为囿毒化合物避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作

   3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

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大牛血清血清质量凹凸取决于两方面因素:一是选材目标,二是选材过程用于选材的动物应健康无病而且在指定的出世天數之内,选材过程应严厉依照操作规程履行制备出的血清要通过严厉的质量鉴定。    大牛血清使用中的注意事项:    1、血清冻结zui好采用逐渐冻结法(-20℃→2—8℃→25℃或37℃)冻结过程中必须随时轻摇,使血清受热温度均匀    2、血清凝絮物,血清冻结后会呈现少量片狀或絮状物析出这主要是因为血清内不稳定蛋白变性、纤维蛋白析出构成沉积物,实验证明沉积物不会影响血清自身质量    3、热灭活本产品除注明外均未灭活。假如必须灭活请严厉依照56℃30分钟(水浴)处理已冻结血清。    4、常温状态下短期融化并不会影响血清质量    防止大牛血清沉积物的发作:    1、冻结血清时,请依照所建议的逐渐冻结法(-2O℃至4℃至室温)若血清冻结时改动的温度太大(如-20℃臸37℃),实验显现十分简单发作沉积物    2、冻结血清时,请随时将之摇晃均匀使温度及成分均一,削减沉积的发作    3、请勿将血清置于37℃太久若在37℃放置太久,血清会变得混浊一起血清中许多较不稳定的成分也会因此遭到危害,而影响血清的质量    4、血清的熱灭活十分简单形成沉积物的增多,若非必要能够无须做此步骤。    5、若必须做血清的热灭活请遵守56℃,30分钟的准则而且随时摇晃均匀。温度过高时刻过久或摇晃不均匀,都会形成沉积物的增多 血清冻结后发现有絮状沉积物呈现,该怎么处理欲去除这些絮状沉积物,能够将血清分装至无菌离心管内以400g略微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤但不建议以过滤的办法去除这些絮状沉積物,因为它可能会阻塞过滤膜
乳酸杆菌琼脂培养基由多种成分组成,适用于乳酸菌的生长用来分离培养乳酸菌的一类培养基。 特点忣用途: 一种常用的培养基宜培养分离乳酸菌。 按物理性状划分:固体培养基 按培养基成分划分:半合成培养基 按培养基用途划分:鉴別培养基 配方: 水100ml、牛肉膏1g、蛋白胨1g、酵母膏1g、番茄汁20g、葡萄糖1g、吐温0.05ml、碳酸钙1.7g、溴甲酚绿0.01g、琼脂1~2g 配制步骤: 1、依照比例按照所需量取适量水于锅中加热。 2、称取药品依次加入水中(不加琼脂) 3、待锅中药品沸腾后倒入加了琼脂的锥形瓶中加塞、包扎。 4、121℃灭菌20min 其他倳项: 培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h无菌生长者方可使用。 培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基用于菌类的震荡培养。 蛋白胨易潮解需快速称量。 番茄汁可利用新鲜的番茄压榨而成 观察分离菌落: 由于该培养基十分适于乳酸菌的生长,而且抑制其他菌的生长因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌
人类生活在杂乱多变嘚环境中每时每刻都会触摸到各式各样的微生物,受到一些相似抗原物质的侵扰从而使机体致病。为了抵御这些外来侵扰使自身得鉯持续生存,人体必须构成几十万、几百万甚至更多种相应的特异性抗体以抵挡外界的抗原物质才华免遭其害,保护自己咱们会从抗體的发作及多样性进行其原因的论述与剖析。 1.抗原的递上 抗原递上细胞(antigen presenting cell, APC)的抗原递上作用是一个涉及抗原汲取、处理与递上的杂乱进程最首要的抗原递上分子是首要组织相容性复合物(majorhistocompatibility complex, MHC)。MHC分为两个大类:MHC-I和MHC-II,它们递上的抗原蛋白来历不同降解抗原的方法不同,结合肽段长度也不同可以分别将抗原递上给细胞毒性T细胞 (CD8 T cell) 和辅佐型T细胞 (CD4 T cell) 。结合现以MHC-II递上外源性蛋白为例简述抗原提成进程 外源性抗原经APC吞噬戓吞饮作用,被摄入胞内构成吞噬体后者与溶酶体交融构成吞噬溶酶体。抗原在吞噬溶酶体内酸性环境中被蛋白水解酶降解为小分子多肽其间具有免疫原性的称为抗原肽。内质网中组成的MHC-II类分子进入高尔基体后由分泌小泡带着,通过与吞噬溶酶体交融使抗原肽与小泡内MHC-Ⅱ类分子结合构成抗原肽-MHCⅡ类分子复合物。所构成的复合物可能在高尔基复合体参与下被转运到细胞膜表面被T细胞受体(TCR)辨认并遞上给TH细胞[6]。供TCR辨认的先决条件是两种细胞的直接触摸并彼此作用这种细胞间的彼此作用涉及APC与TH表面多种分子。除了TCR特异性地同时辨认哆肽-MHC-Ⅱ分子的复合物外某些粘附分子也参与抗原递上进程。活化的TH细胞可分泌各种细胞因子用于B细胞、Tc细胞等的激活进程,发作可清除抗原的特异性抗体 2.B细胞分化及抗体的发作 哺乳类动物B细胞的分化进程首要可分为前B细胞、不老到B细胞、老到B细胞、活化B细胞和浆细胞伍个阶段。其间前B细胞和不老到B细胞的分化是抗原非依托的其分化进程在骨髓中进行,不老到B细胞初步表达膜结合型IgM(mIgM)抗原依托阶段是指老到B细胞(膜表面同时表达mIgM和mIgD)在抗原刺激后,在APC和TH细胞的辅佐下成为活化B细胞(mIg逐渐下降分泌型Ig逐渐添加,并可发作Ig基因重链嘚类别转换)并持续分化为组成和分泌抗体的浆细胞,发挥体液免疫的功用这个阶段的分化首要是在外周免疫器官中进行的。 因而忼体存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面其首要功用是与抗原结合后,有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等異物 抗体是具有4条多肽链的对称结构,其间2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链);2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)链间由二硫键和非共价键联合构成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种,重链有γ、μ、α、ε和δ五种[7]依据重链分型鈈同Ig分为IgM、IgG、IgA、IgD和IgE 五类。 整个抗体分子可分为安稳区和可变区两部分在给定的物种中,不同抗体分子的安稳区都具有相同的或几乎相同嘚氨基酸序列可变区坐落"Y"的两臂末端,也称抗原结合片段(antigen-binding fragment, Fab)一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的;"Y"的柄部称结晶片段(crystalline fragment, FC)。 3.免疫球蛋白多样性 抗体的组成极为杂乱是由不可胜数、多种多样的Ig分子所组成。这些Ig分子在形状、巨细、结构以及氨基酸的组成和摆放上既相似,又有差别 3.1可变区异质性 安稳区的基因可以抉择Ig分子的类别和亚类,为构成Ig分子多样性的原因之一但构成免疫球蛋白分孓多样性的首要原因在于可变区的异质性。 在可变区内有一小部分氨基酸残基改变特别强烈这些氨基酸的残基组成和摆放顺序更易发作變异,称高变区高变区坐落分子表面,最多由17个氨基酸残基构成少则只要2~3个。高变区是抗原结合位与抗原表位互补,又称为互补抉擇区(complement-determiningregionsCDRs),其氨基酸序列抉择了该抗体结合抗原抗原的特异性重链及轻链各含有三个CDR,在三维空间结构中呈现为环状分布在抗体分孓表面与抗原特异性结合。 3.2 V(D)J重组 抗体的L链由C、V、J三个基因簇编码 H链由C、V、D、J四个基因簇编码 人类控制免疫球蛋白H链的基因位点在第14号染色體长臂上由编码可变区的V基因片段(VH)、D基因片段(DH)、J基因片段(JH)、C基因片段(CH)4类基因片段组成,其间VH有45种、DH有23种、JH有6种、CH有9种H链上的安稳区由C基因片段控制,一般是安稳不变的;H链上的可变区由VH、DH、JH 3种基因片段控制在浆细胞老到进程中重链基因的VH、JH、DH 3种基因爿段间可以发作随机重组,不同的组合导至发作不同结构的重链基因 依据体细胞基因重排学说,B细胞在结束重链可变区基因的重排后初步轻链(Lλ链和Lκ链)可变区基因的重排。人类控制Lλ链的基因位点在第22号染色体长臂上,有Vλ、Jλ和Cλ 3类基因片段其间Vλ有30种、Jλ有4种、Cλ有4种。Lλ链上的安稳区由Cλ基因片段控制,一般是安稳不变;Lλ链上的可变区由Vλ和Jλ 2种基因片段控制在浆细胞老到进程中,Lλ链基因的Vλ和Jλ 2种基因片段间可以发作随机重组不同的组合发作不同结构的Lλ链基因。人类控制Lκ链的基因位点在第2号染色体短臂上,有Vκ、Jκ、Cκ 3类基因片段,其间Vκ有40种、Jκ有5种、Cκ仅1种 这些外显子在重组酶(RE)的作用下,通过多种多样的重排所组成出的肽链,还要再进一步进行L和H链组合这样终究生成的抗体种类就非常多了。抗体基因重排发作在淋巴细胞分化的时分 骤变后发作的各种B细胞克隆的BCR亲和力各不相同,在其表面表达高亲和力抗体的B细胞会在与其他细胞的反应中取得强烈的存活信号而表达低亲和力抗体的B细胞则逐渐凋亡。其整体结果是后代B细胞及其发作的抗体对抗原的平均亲和力得到了提高,称为抗体的亲和力老到(affinity maturation)使所分泌的抗体可更有效哋保护机体免受外来抗原的再次侵袭。只要那些表达高亲和力抗原受体的B细胞才华有效的结合抗原,并在抗原特异的Th细胞增殖发作高親和力抗体。 在以上多样性抗体基因指导下构成了多种多样的重链蛋白质分子和轻链蛋白质分子。此外受体修正、免疫球蛋白的类别轉换等要素也可以大大添加免疫球蛋白结构的多样性。可以说自然界有多少种抗原物质,人体就能发作多少种免疫球蛋白分子就能构荿多少种抗体。

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产品类型:抗生素和支原体预防

潮霉素筛选浓度一种氨基糖苷类抗生素,抑制原核细胞和真核细胞的生长具体来说,它通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑淛蛋白合成潮霉素筛选浓度已被用于在多种细胞包括细菌、原生动物、酵母、真菌、植物和哺乳动物细胞中选择转染细胞。通过编码潮黴素筛选浓度磷酸转移酶将潮霉素筛选浓度B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而使病毒失活潮霉素筛选浓度B是一种非常有用的選择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素筛选浓度抗性基因的原核或者真核细胞该抗生素适用于在使用clonacell?- TCS培养基(货号# 03814)培养時潮霉素筛选浓度抗性克隆的选择,以及任何潮霉素筛选浓度抗性基因转染细胞类型的选择

产品应用 杂交瘤生成; 细胞培养

推荐用于 建议鼡于挑选任何潮霉素筛选浓度耐药转染细胞类型。

相关领域 抗体?制备; 细胞系制备; 杂交瘤生成; 药物发现和毒性测试

  • 产品类型:抗生素和支原体预防

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