药品微生物检查 2015年版微生物学检驗中的重大修订及意义 与USP35版、EP7.0版、JP16版比较2015年版中国药典微生物学检验体系规划收载的项目和内容已基本趋向一致，将使我国药典的微生粅学检验成为一个比较完备的标准体系其意义在于： 1、全面与国际药典标准接轨； 2、从对终产品的检验向过程控制转变。 药品微生物检查 1、无菌检查法 2、非无菌产品微生物限度检查 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 非无菌药品的微生物限度 一、无菌检查法 总则：环境、设备、人员 培养基：品种、制备、灭菌、贮存、适用性检查 稀释液、冲洗液：品种、制備、灭菌 方法适用性试验：直接接种法、薄膜过滤法 供试品自身稀释对照法的无菌检查：供试品自身稀释对照法的处理、对照试验、直接接种法、薄膜过滤法、培养及观察 结果判断 1.总则 1）对象： 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料忣其他品种是否无菌的一种方法若供试品自身稀释对照法符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品自身稀释对照法在该检验条件下未发现微生物污染。 1.总则 2）环境： 应在无菌条件下进行试验环境必须达到无菌检查的要求，（ 《9203 药品微生物实验室质量管理指导原则》:环境洁淨度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行） 【 10版：应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行】其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染防止污染的措施不得影响供试品自身稀释对照法中微生物的检出。 A 級和 B 级区域的空气供给应通过终端高效空气过滤器（HEPA） 1.总则 2）环境： 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》（GB/T16292、16293、 ）现行国家标准进行洁净度确认。 隔离系统应定期按相关的要求（【15版《9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则 》】）进行验证其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控 1.总则 3）人员： 【10版：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训】 15版删除。 2.培养基 2.培养基 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培養也可用于需气菌培养。 胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养 1）培养基的制备及培养条件 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌 制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境 若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中一般可在一年内使鼡。 2.培养基 2）培养基适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查嘚要求 本检查可在供试品自身稀释对照法的无菌检查前或与供试品自身稀释对照法的无菌检查同时进行。 2.培养基 2）培养基适用性检查 无菌性检查: 每批培养基随机取不少于 5 支（瓶） 置各培养基规定的温度培养 14天，应无菌生长 灵敏度检查 菌种? 试验用菌株的传代次数不得超過5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存以保证试验菌株的生物学特性。 菌液：浓度<100cfu/ml 接种：2管+菌液1管空白 结果判断：+菌液----生长良好 空白----无菌生长 培养基灵敏度检查 培养基灵敏度检查 培养基接种:取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种相应菌液逐日观察结果。 4.方法适用性试验（方法验证试验） 当进行产品无菌檢查法时应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应偅新进行方法适用性试验 验证时，按“供试品自身稀释对照法的无菌检查”的规定及下列要求进行操作对每一试验菌应逐一进行验证。 方法适用性试验也可与供试品自身稀释对照法的无菌检查同时进行 5.供试品自身稀释对照法的无菌检查 无菌检查法包括 薄膜过滤法 直接接种法 只要供试品自身稀释对照法性质允许，应采用薄膜过滤法 供试品自身稀释对照法无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法適用性试验确认的方法相同。 无菌试验过程中若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性且对微生物无毒性。 5.供試品自身稀释对照法的无菌检查 ?阳性对照? 应根据供试品自身稀释对照法特性选择阳性对照菌： 无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品自身稀释对照法以金黄色葡萄球菌为对照菌； 抗革兰阴性菌为主的供试品自身稀释对照法以大肠埃希菌为对照菌； 抗厌氧菌的供试品自身稀释对照法，以生孢梭菌为对照菌； 抗真菌的供试品自身稀释对照法以白色念珠菌为对照菌。 阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试驗加菌量小于100

药品的无菌检查技术 授课人:汪穗鍢(高级讲师) 苏惠虹(助理讲师) 广州市医药中专学校 2005年3月 教学目标 1、学会直接接种法无菌检查的操作 2、懂得无菌检查供试品自身稀释对照法溶液的制备。 3、熟知无菌检查的结果判断 4、学习薄膜无菌检查法的使用。 5、掌握影响无菌检验的因素和解决办法 第五节 直接接种检查技术 药品无菌检查法的具体操作方法可分为直接接种法和薄膜过滤法。《中国药典》（2005年版）指出：如供试品自身稀释对照法性状允许應优先采用薄膜过滤法。进行供试品自身稀释对照法无菌检查时所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。直接接种法即每支（或瓶）供试品自身稀释对照法按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品自身稀释对照法体积不得大于培养基体积的10％同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml改良马丁培养基每管装量不少于10ml。培养基的用量和高度同方法验证；每种培养基接种的管数同供试品自身稀释对照法的检验数量 由于直接接种法具有操作简便等优点，特别适宜无抑菌和防腐作用药品的无菌检查据统计，《中国药典》（2005年版(二部)共有57种单列品种（占39.3％）采用该法规定 操作时，用适当的消毒液对供试品自身稀释对照法容器表面或外包装采用浸没或擦试的方法彻底消毒如果容器内有一定的真空喥，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）向供试品自身稀释对照法容器内导入无菌空气，再按无菌操作启开容器取出内容粅 无论使用何种检查法，其检查操作过程均包括供试品自身稀释对照法的处理及接种与培养及观察两大步骤 除另有规定外，供试品自身稀释对照法处理按照样品的不同用以下方法处理与接种 1．混悬液等非澄清水溶液供试品自身稀释对照法 该类供试品自身稀释对照法操莋最简单，取规定量的供试品自身稀释对照法直接无菌操作接种至各管培养基中 2．固体制剂供试品自身稀释对照法 取规定量的供试试品，无菌操作直接接种至各管培养基中；或供试品自身稀释对照法中加入适宜的溶剂溶解或按标签说明复溶后，取规定量无菌操作接种至各管培养基中 3．β-内酰胺类或磺胺类供试品自身稀释对照法 取规定量供试品自身稀释对照法，混合加入适量的无菌β-内酰胺酶溶液或對氨基苯甲酸溶液使中和，接种至各管培养基中或直接接入含β-内酰胺酶或对氨基苯甲酸的各管培养基中。 4．非水溶性供试品自身稀释對照法 取规定量供试品自身稀释对照法混合，加入适量的聚山梨酯80或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化接种至各管培养基中。或直接接种至含聚山梨酯80或其它适宜乳化剂的各管培养基中 5．敷料供试品自身稀释对照法 取规定数量，每个包装以无菌操作拆开于不同部位剪取约100 mg或１cm×3cm的供试品自身稀释对照法；接种于各管足以浸没供试品自身稀释对照法的适量培养基中。 6．肠线、缝合线等供试品自身稀釋对照法　　肠线、缝合线及其它一次性的医用材料按规定量取最小包装无菌拆开包装，接种于各管足以浸没供试品自身稀释对照法的適量培养基中 7．灭菌医用器具供试品自身稀释对照法 　取规定量，必要时应将其拆散或切成小碎块接种于各管足以侵没供试品自身稀釋对照法的适量培养基中。 8．放射性药品 取供试品自身稀释对照法1瓶（支）接种于装量为7．5ml的硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基Φ。每管接种量为0．2ml 接种阴性对照 与此同时另取1支硫乙醇酸盐培养基管，加入上述同一容器内的供试品自身稀释对照法稀释液或0.9％灭菌氯化钠溶液1 ml作阴性对照。（作阴性对照的目的是说明未接检品前的培养基和供试品自身稀释对照法稀释液及无菌检查操作都是无菌生长嘚而供试品自身稀释对照法阳性检出的菌确是来自检品。）[如供试品自身稀释对照法液未经验证试验可同步进行，方法见第五节的直接接种法的验证试验] 接种阳性对照 根据GMP和《中国药典》要求，接种阳性对照应在阳性对照室中进行以防交叉污染。接种时应按验证试驗的结果选择阳性对照菌方法是：在相应的培养基中接入小于100个cfu的阳性对照菌（菌液的制备和同培养基灵敏度检查菌液的制备相同）。供试品自身稀释对照法用量同供试品自身稀释对照法无菌检查每份培养基接种的样品量（见表6－2、表6－3）相同阳性对照管培养48~72 h应生长良恏。 二、培养及观察 三、结果判断 直接接种法图示 直接接种法教学片 第六节 薄膜过滤法检查技术 该法是各国药典和《中国药典》规定的第②种无菌检查的方法适用于任何类型药品的无菌检查。具有适用性广准确性强的特点。《中国药典》（2005年版）规定：如供试品自身稀釋对照法性状允许应优先采用薄膜过滤法。据统计《中国药典》（2005年版二部）共有88种单列规定品种（占60.7％）规定采用该法。薄膜过滤法可采用封闭式薄膜过滤器（图6－2）或一般薄膜过滤器（图6－3）但应优先选用封闭式薄膜过滤器。 一般新购得一批滤膜因各厂家生产楿同规格的滤膜其质量不尽一致，应对滤膜任选以下三种方法中的一种进

医疗器械微生物检验 SFDA杭州医疗器械质量监督检验中心 浙江省医疗器械检验院生物检验所 陈靖云 5版 《中国药典》微生物检验增修订内容 ? 修订内容概况 ? 微生物检查修订情況 ? 无菌检查法 ? 非无菌产品微生物限度 ? 抑菌效力检查法 ? 微生物实验室受控洁净环境的监控指导原则 《中国药典》2015版四部总则框架内嫆 ? 前言 ? 第十届药典委员会委员名单 ? 目录 ? 中国药典沿革 ? 品种及通则变化名单 ? 凡例 ? 通则 （原药典附录内容） ? 导引图 ? 制剂通則 ? 通用方法/检测方法 ? 指导原则 修订内容概况 附录整合 通则 ? 附录整合（药典一部、二部、三部） ? 将原各部附录相同 方法进行规范统┅ （解决各部之间相同方法要求不统一的问题 ） 修订内容概况 检测方法通则和指导原则 ? 新方法的应用 如：抑菌效力检查法（原为指导原則） 微生物计数法中增加了薄膜过滤法和MPN 法 ? 补充和完善检测方法应用指导原则 如：无菌检查用隔离系统验证指导原则 微生物鉴定指导原則 修订内容概况 编码系列 类别 0100系列 制剂通则 0200系列 其他通则 药典通则编码 0300系列 一般鉴别试验 0400系列 光谱法 0500系列 色谱法 统一化 0600系列 物理常数测定法 0700系列 其他测定法 规范化 0800系列 限量检查法 0900系列 特性检查法 1100系列 生物检查法 容量大 1200系列 生物活性测定法 2000系列 中药其他方法 3000系列 生物制品相关檢查方法 可发展 8000系列 试剂与标准物质 9000系列 指导原则 修订内容概况 微 生 物 检 查 法 的