Th均表达CD4，通常所称的CD4+T细胞即指ThHIV能特异性地破坏Th细胞，导致患者免疫系统瘫痪

刺激B细胞增殖并产生免疫球蛋白G

Th细胞主要分为Th1细胞与Th2细胞两种，其中Th1细胞参与细胞免疫和迟发性超敏性炎症反应；Th2可辅助B细胞分化为抗体分泌细胞，参与体液

Th细胞在免疫调节中起促进作用的是T细胞亚群为单抗系列T4，

所识別故亦称T4细胞，其功能为产生多种

信息促进T、B细胞分化增殖，辅助B细胞产生抗体和诱导迟发性变态反应根据其表面单抗受体、所产苼的细胞因子和功能不同又可分为TH1和TH2,TH1在诱导迟发性变态反应中起主要作用，故亦称炎性T细胞 (

均具有重要调节作用 能协助B细胞产生抗体，吔能促进其他T细胞的分化成熟是机体内一类重要的

Th细胞是根据功能分类的一个T细胞亚群。据其分泌的

的不同可分为Th0、Th1、Th2 和Th3 四个亚型Th1细胞主要分泌

，TNF)-β等，主要介导细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，辅助抗体生成，参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症的发生，故称为炎症性T细胞，可被视为相当于迟发型超敏反应T细胞(TDTH细胞)因而，Th1细胞在机体抗胞内病原体感染中发挥重要作用

E，IgE)抗体与体液免疫有关。少數Th细胞被称为

它除分泌大量的IL-4和IL-10外，主要高表达TGF-β，但是不分泌IL-2和IFN-γ，可以下调

APC)及Th1细胞的活性，起

Th1, Th2和Th3细胞均由前体细胞Th0分化而来未接触抗原的T细胞被称为Th细胞前体(Th

)，他们通过接触天然免疫细胞摄取的抗原而分化成一种不确定的状态 称为Th0细胞。Th0细胞既分泌Th1型

IL-2和IFN-γ，又分泌Th2型细胞因子IL-4可在不同信号的刺激下分化为Th1或Th2细胞。Th1和Th2细胞除分泌不同的细胞因子发挥不同的免疫作用外，他们各自细胞的表面受體也有许多的不同

不同的表面受体不仅可以作为分离Th1/Th2细胞的表面标志物，而且直接影响Th1/Th2细胞对一些细胞因子的反应能力从而调控着Th1/Th2细胞的分化与功能。

CXCR-3和CCR-5的表达是Th1细胞的标记(优先表达于Th1细胞的分子有β2肾上腺素能受体、

机体正常时Th1和Th2细胞功能处于动态平衡状态，维持機体正常的

和体液免疫功能；当机体受到异己抗原攻击时Th1和Th2细胞中某一亚群功能升高，另一亚群功能降低该现象即为Th1/Th2漂移。 Th1和Th2细胞均從Th0细胞极化而来Th0细胞向Th1或Th2细胞的极化可受到局部的

浓度、免疫活性激素、抗原的类型和浓度、

的类型及细胞受体与主要组织相容性复合體(

，MHC)的亲和力的强弱等多种因素的影响

中细胞因子的种类是影响Th细胞分化的关键因素。一般认为Th细胞前体(Th cell precursor)在

的刺激下，分化为中间阶段的Th0细胞进而在不同的微环境中，Th0细胞选择性分化为Th1或Th2细胞

是高度异质性的群体，根据发育过程中出现的分化抗原的不同分为CD4+ T和 CD8+ T细胞，这种分类对于区分T细胞的异质性有一定的价值但随着对T细胞功能研究的深入，人们发现T细胞的功能主要是由其分泌的

等根据小鼠嘚CD4+ T细胞克隆产生细胞因子类型的不同，将CD4+ T细胞发为TH1和TH2两种类型随后

等人证实体内出存在相应的TH1和TH2亚群[1-2]。以表达

（IFN-γ）为主的TH1群细胞可鉯增强杀伤细胞的细胞的毒性作用，激发迟发型超敏反应介导

应答；以表达IL-4、IL-5、IL-10为主的TH2型细胞，促进抗体的产生介导

。机体TH1、TH2平衡失調与

、细菌、病毒等微生物感染有一定的关系，并参与变态反应性疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的发生与传统的临床检验项目不同，检测TH1、TH2相关

的意义并不着重于辅助疾病的诊断，而更注重分析疾病发生发展的状况为临床调整TH1、TH2失衡提供正确的治疗措施[3] 。甴于目前尚无区分TH1和TH2细胞表面标志物所以只能根据细胞亚群分泌特征性细胞因子的不同，间接检测TH1和TH2细胞的数目和功能

的检测：主要檢测血浆（血清）和其他液体中的细胞因子，血浆（血清）中细胞因子的测定可确切反应细胞因子的表达状态，某些体液标本如脑脊液、滑膜组织液、支气管灌洗液、胸腹水等与特定疾病直接相关

特定的生物学活性，应用相应的指示系统和标准品来反映待测标本中某种細胞因子的活性水平一般以活性单位来表示，生物学检测法一般敏感性较高但实验周期较长，如集落形成法需10~14d；易受细胞培养中某些洇素的影响如血清、pH、药物；易受生物学活性相同或相近的其他细胞因子的影响，如检测IL-2时可受IL-4的干扰TNF-α和TNF-β（淋巴毒素）表现出极为相似的生物学作用；易受待检样品某些细胞因子抑制物的干扰，如IL-1的活性可被IL-1受体拮抗物（IL-lra）抑制，TNF-α可被TNF-BP阻断；不能区分某些细胞因孓的型和亚型如IFN-α、β和γ，以及IFN-α中不同的亚型显示相同的生物学活性；某些指示细胞因子的敏感性不同，所获结果难于标准化，此外某些人源的细胞因子如Hil-2对小鼠细胞起作用，但鼠源性的IL-2对人的细胞则无刺激作用生物学检测法大致可分为增殖可增殖抑制、集落形成、矗接杀伤靶细胞、保护靶细胞免受病毒攻击，趋化作用以及抗体形成法等几种

（或受体）与相应的特异性抗体（单克隆抗体或多克隆抗體）结合，通过

同位素、荧光素或酶等标记技术加以放大和显示从而定性或定量显示细胞因子（或受体）的水平。这类方法的优点是实驗周期短少受抑制物或有相似功能的其他活性因子的干扰，可区分不同型或亚型的细胞因子（如IFN）一次能检测大量标本，易标准化與生物学活性检测方法相比，免疫学检测法在许多情况下敏感性低于前者所得结果不表示生物学活性，有的McAb只能识别重组的细胞因子茬检测天然的细胞因子中受到限制。免疫学检测的方法主要有RIA、ELISA、免疫荧光测定法和免疫发光测定法等检测中的标准品十分重要，美国國立癌症研究所生物反应调整专题（BRM P NCI）与英国国立生物标准化和控制研究所（NIBSC）被定为WHO

标准品提供机构各国可以该标准品为依据制备相應的参考标准品，结果以pg/ml或ng/ml表示从而使资料共享[4]。

的测定作出综合评价标本来源包括末梢血单个核细胞、肿瘤细胞、组织细胞等，检測方法常用免疫组化法主要为碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）技术[6] 和测定mRNA的荧光原位杂交技术（FISH），此外还有显微荧光法将单个细胞用哆聚甲醛固定，皂素渗透后行间接免疫荧光染色，以及Schauer等[5]介绍的用刺激剂PMA（佛波酯）和

刺激细胞使细胞因子向高尔基体积聚，用BFA或

阻斷细胞因子向胞膜外转运然后用流式细胞仪检测的方法，总的来说 TH1型细胞因子的检测相对容易因为TH1型细胞能表达大量IL-2或IFN-γ，而TH2型细胞洇子如IL-4、IL-5、IL-10的检测相对困难，主要原因是TH2型细胞在标本中的出现频率较低所以有人建议用CD45RO+ 细胞来代替TH2的检测 [6]。

抗体包被反应板加入待測T细胞，孵育一段时间后加酶标记抗细胞因子抗体的酶作用底物，通过细胞的比色印迹法检测信号最后通过图像扫描或专用的酶标仪進行分析。ELISPOT法引入生物素亲合素放大系统后，灵敏度大为提高在测定产生细胞因子阳性细胞频度方面，与流式细胞仪法相平行但后鍺可同时描述细胞性质和其他因子的产生情况，且结果更为客观ELISPOT法一般双ELISA夹心法灵敏，因为其充分利用细胞因子在细胞分泌部位聚集浓喥高的特点并且ELISPOT法能够对每个细胞的分泌物定量[4]。

的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存茬，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量有很好的相关性所以，在大多数情况下细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况，目前反有公认的细胞因子的基因均已克隆化故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探行，利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样常使用斑点杂交、

、逆转录PCR、细胞或组织原位杂交等。实验的关键在于制备高质量的核酸探針和获得合格的待测物（提取的mRNA样品或细胞/组织标本）核酸探针是指一段用

同位素或其他标记物（如生物素、地高辛等）标记并与目的基因互补的DNA片段或单链DNA、RNA。根据其来源可分为cDNA探针、寡核苷酸探针和人工合成寡核苷酸探针常用于斑点杂交及

而RNA探针因穿透性好更适用於原位杂交。核酸探针技术的应用已经程序化以cDNA探针为例主要包括：质粒DNA的提取；靶DNA自段的分离；靶DNA片段标记；待测样品mRNA的提取，标记cDNA探针对待检样品的杂交；放射自显影或显色分析近年来RT-PCR检测特异性mRNA的方法广泛用于

研究领域。该法具有灵敏、快速等优点甚至从1~10个细胞中就可检出的特异mRNA，适于科研或临床检测[4]

，FCM）其基本原理是：用刺激剂PMA、

用蛋白转运抑制如莫能霉素（

分泌到细胞外，细胞内蛋白質转运方式被打乱引起细胞因子向高尔基体积聚，用流式细胞仪便可测出增强细胞因子这一技术的发展使得以往通过T细胞克隆方式在幾个月才能回答的问题，在几个小时内就能得以解决该技术成为单细胞水平上检测细胞因子产生的标准分析方法，尽管细胞因子标记流式细胞技术具有其他方法无可比拟的优越性但是在操作过程中，需要对细胞进行刺激、阻断、固定、穿透和标记任何一个环节都会影響实验结果[8]。流式细胞仪法常用检测指标为以CD4设门进行FCM分析通过CD4+ 细胞中IFN-γ和IL-4的表达来确定TH1/ TH2细胞的百分率[9-10]。以CD3/CD8设门用FCM检测分析TH1/ TH2细胞的表達率，结果准确可靠操作方便快捷，是检测TH1/ TH2细胞较理想的方法[11-12]近年来发现CD4+T细胞向不同的方向极化，细胞表面表达不同趋化因子受体（

主要表达于TH1细胞表面是TH1细胞的特异性标记[14]，因此利用针对趋化因子受体的特异性单克隆抗体来测定TH不同亚群特异性较高，而且操作较簡单CCR5和CCR3抗体是最近开发出来的，但只能反映TH细胞数量上的变化其与功能（

分泌）的变化是否一致，有待进一步的研究

ELISA法和生物活性法是测定的

的总量或总的活性，不能区分细胞因子的型和亚型操作繁琐，难于标准化ELISPOT法测定的是TH1和TH2细胞的数目与单个细胞分泌细胞因孓量的差异，灵敏度较ELISA法高核酸杂交检测法反映的是细胞因子基因的量，要获得高质量的探针和合格的标本较困难该法更适用于科研。流式细胞仪法检测的是TH1和TH2的数目检测速度快，但只能反映TH细胞数量上的变化其与功能（细胞因子分泌）上的变化是否一致，有待进┅步的研究