试孕棒一深一浅求解图为什么我cDNA经PCR后的图是这样的

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-03-04 23:08 标签： 常见的基本弯矩图

Q2:PCR产物中出现假阴性或无扩增产物（即阳性对照中有条带而样品则无条带）


1、条带放置时间过久,核酸被降解，最好在48h内进行电泳检测

2、DNA模板纯度低，如含有杂蛋白质或Taq酶抑制剂可对DNA进行再次纯化或重新用优质试剂盒提取DNA; DNA浓度太低时，可以加大模板量；对具有二级结构DNA使用较好的聚合酶；提取DNA时避免吸入酚类试剂。

3、对设计不合理的引物进行重新设计合成；引物应高浓度小量分装保存防止多次冻融而降解失效；检测引物OD值并进行电泳检测以确保两条引物浓度一致。

4、酶失活时更换新酶，或新旧两种酶同时使用以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。

5、PCR反应条件：提高变性/退火温度；适当增加循环次数

6、Mg2+浓度过低可影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败，而Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性因而可适當提高Mg2+浓度。

7、如果靶序列发生突变或缺失时也会影响引物和模板的特异性结合，产生假阴性结果


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