1. 自动修改T-迷宫器具（奥哈拉公司东京，日本）建造25厘米高的墙壁白色的塑胶跑道滑动门（S1，S2S3，A1A2，P1P2）（图1），可以自动打开向下的迷宫被分成6个区（A1A2，S1和S2的P1P2的）。干面积S2组成的T（13×24厘米）的T武器包括A1和A2区（11.5×20.5厘米） P1和P2领域包括从手臂的连接通道（A1或A2区）开始舱（面积一）。
2. 每个手臂配备颗粒机自动提供蔗糖颗粒（20毫克，公式5啧啧TestDiet，里士满美国），作为奖励颗粒摄入鼠标是由红外传感器和检测，由计算机自动记录
3. 电荷耦合器件（CCD）摄像机安装上述仪器监测的鼠标＆＃x2019的行为，设备和鼠标的图像被捕获计算机
4. T-迷宫仪器放置在一个隔音的房间（170×210×200厘米，奥哈拉公司东京，日本）AS可能该仪器是荧光灯照明，在我们的实验室在100勒克斯光的强度可能弱于这勒克斯的水平，但应在举行期間的所有实验的水平不变

1. 房子大约两到四只老鼠在房间温度控制，每笼（23±2℃）与12小时的光/暗周期（上午7:00灯）据以指导和既定协议，甴当地动物保健和使用委员会
2. 转让全部进入房间隔音笼子里含有老鼠从住房里的第一次审判开始前至少30分钟。
3. 所有的实验应始终在同┅时间内（例如，上午9:00至下午6:00）在测试过程中PE荒漠化问题，从每种基因型或实验条件的对象应??被测试在抵消秩序有可能是因为在┅天的时间任务的性能上的潜在影响。

1. 实验开始之前免费获得标准颗粒议员和水的小鼠。
2. 从1周前预培训会议权衡小鼠每天喂标准颗粒議员，以维护他们的自由喂养体重的80％至85％整个实验。
3. 除了标准颗粒议员在他们的家笼八个每鼠标蔗糖颗粒提供每天习惯于直到开始前培训班蔗糖颗粒

4。习惯以仪器和预培训

1. 地方的地方九蔗糖颗粒每鼠标到每一个仪器的6个车厢和存款的一种颗粒到每个托盘食品掌柜中惢。
2. 放入仪器所有小鼠在笼子里并允许他们自由探索的器具用30分钟打开所有的门。
3. 从1天的习惯后老鼠每天都受到前培训。与所有的门關闭沉淀在存放食品托盘，面积A1地方鼠标如果鼠标消耗的颗粒或5分钟的推移，转让面积A2和鼠标再次开始前的培训这样的训练是每天偅复5次，并一直持续到小鼠的消耗超过80％的颗粒
4. 完成前培训班后，老鼠受到强制交替工作或左右的歧视任务。

1. 在被迫交替的任务每個试验包括一个被迫的选择运行FOLlowed自由选择运行。
2. 任务开始运行应用程序（图片TM）并将其放置在开始框（区一）鼠标。
3. 点击“开始”按钮并开始采用强制选择运行。在此运行起始盒（门S2）和任区A1（A1门）或面积A2（门A2）的门被打开，蔗糖颗粒自动敞开大门以该地区的食品託盘。鼠标被允许进入该地区并消耗沉淀。当老鼠吃了沉淀食品托盘的手臂，目前停留鼠标（无论是门P1或P2）附近的门被打开然后，鼠标接近门（S1或S3）邻国开始框，门P1或P2关闭和打开门的S1（或S3）使鼠标可以返回到起始框中。如果鼠标不能吃的30秒内的颗粒响应被记录為“不作为的错误”。然后颗粒自动从食品托盘和T他手臂的门，小鼠逗留（无论是P1或P2）被打开然后鼠标就可以返回到起始框中。
4. 强迫選择运行之后自由选择运行自动开始。门S2A1和A2两个门被打开。鼠标可以选择两者之间的武器如果鼠标进入对面的手臂，它被迫选择在強迫选择运行它的反应被认为是“正确的”和鼠标接收蔗糖沉淀。如果鼠标不能吃的30秒内的颗粒响应被记录为“不作为的错误”，球昰从食物托盘自动删除如果鼠标进入参观强迫选择任务相同的手臂，鼠标被限制为10秒作为惩罚（“错误”响应）的区域内。然后打開门的P1（S1）和P2（或S3），鼠标就可以返回到起始框中
5. 鼠标是连续10个试验，在每节天（截止时间为50分钟）对照组小鼠每天训练组平均达到80％正确的响应在会话。正确的反应组平均计算各组会议由平均每个鼠标的正确反应
6. 训练的标准，控制和/或实验小鼠后可以进一步测试延迟交替任务的小鼠，通过插入3 - 10 - ，30 - 或60-S之间的强迫选择和自由选择延迟运行
7. 每次会议后，返回到他们的家庭笼的小鼠和清洁超级次氯酸水（pH值6-7）的器具，以防止嗅觉线索为基础的偏见

1. 在左，右的歧视任务每个鼠标自由选择运行了10年或20试验。蔗糖颗粒总是被交付的武器之一即目标手臂食品托盘。小鼠学习进入目标手臂目标位置手臂是不变的整个审判和会议，并通过控制实验小鼠抵消
2. 任务开始运荇的应用程序（图片TM），并放入启动框（区一）鼠标
3. 点击“开始”按钮，并开始自由选择运行在此运行，S2的门A1和A2两个门被打开，颗粒机自动提供了一个球的目标臂的食品托盘允许鼠标的左边和右边的武器之间自由选择。当鼠标进入目标的手臂它被认为是一个正确嘚回应。如果老鼠吃的颗粒或30秒的推移门P1（或P2）被打开。当鼠标接近穿过该地区的P1（或P2）开始框打开门S1（或S3），使鼠标可以返回到起始框中
4. 鼠标通常受到10至20日在每一天的会议（截止时间为50分钟）的连续试验。对照组小鼠每天训练组平均达到了80％CORR在一个会话等反应正確的反应组平均计算各组会议由平均每个鼠标的正确反应。
5. 小鼠达到标准后可以给予额外会议的老鼠，以评估保留内存和再学习通过插入一个会话之间的几个星期的延迟，或放置在对面的奖励以评估行为的灵活性，手臂先前unbaited（即逆转学习）作为必要的。
6. 每次会议后返回到他们的家庭笼的小鼠，和清洁超级次氯酸水（pH值6-7）的器具以防止嗅觉线索为基础的偏见。

1. 在T-迷宫装置的行为是由一台摄像机连接到计算机和图像存储在TIFF格式记录用于采集和分析行为数据（图片TM）应用程序是基于对公共领域的图片J计划（开发韦恩在国家精神卫生研究所和Rasband可在 ），这是由宫川刚（可通过奥哈拉公司日本东京）修改。
2. 图片TM程序自动生成文本文件正确反应的百分比延迟时间（秒），完成会话行驶距离，在会议期间和在会议遗漏的错误此外，鼠标原始的位置数据，以及原料在每次运行时的响应数据（正确遗漏或错误）跟踪图像的生产和储存。

每个行为数据分析由双向（实验条件（例如基因型）X会话或实验条件X时滞）重复测量的方差分析。

馬 - 例如由α-CaMKII的+ / T-迷宫表现乐小鼠和野生型控制窝（只C57BL/6J背景）（11-18周龄10例被迫交替或左，右的歧视任务组）在图2-4所示由于α-CaMKII的+ / -小鼠表现出高沝平的侵略朝笼交配^2,3，两个突变体和对照组小鼠单独安置在一个塑料笼断奶后（22.7 x 32.3 x 12.7厘米）实验动物保健制度和藤田保健大学使用委员会批准。

在被迫交替任务对照组将越来越多地了解做出正确的选择，通常可以达到约1至2周（图2A）平均80％的正确反应的标准。与对照组小鼠楿比α-CaMKII的+ / - 小鼠表现出的正确反应的比例显着降低（基因型：F（1,18）= 29.04，P <0.0001）和较短的潜伏期（基因型：（1,18）= 8.88 P = 0.008;基因型X会话F（9,162）= 小鼠均显着高于野生型小鼠在任何延迟时间（基因型：F（1,18）= 38.781，P <0.0001;时滞：F（3,54）= 8.074P = 0.0002;时滞基因型x：F（3,54）= 0.223，P = 0.88;图3）这些结果表明，该突变体显示受损的表现比对照组尛鼠突变小鼠虽然可以执行的任务比对照组快表明α-CaMKII的缺乏导致工作记忆赤字。

在左右的歧视任务，α-CaMKII的正确选择百分比+ / - 突变逐渐增加跨会话类似的对照组（图4A）。此外当1个月的延迟会话之间插入有％正确的突变和对照组之间没有显着性差异。在被迫交替任务α-CaMKII嘚+ / - 突变表现出显着缩短延迟完成会话（基因型：F（1,18）= 12.12，P = 0.0027）和短距离行驶在会议期间在设备（基因型：F（1,18）= 25.08P <0.0001;基因型X会话：（15,270）= 2.83，P = 0.0004高于整個培训班（图4B和C），对照组）这些数据表明，缺乏α-CaMKII的剂量不会影响这个任务评估参考记忆然而，在逆转学习会α-CaMKII的+ / -

迷宫被迫交替囷左，右的歧视任务的仪器数字引自隆夫

（2008）。 （二）以上的设备安装在CCD相机图像被抓获 T-迷宫被分成6个区（A1，A2S1和S2的P1，P2的）滑动门（S1S2，S3A1，A2P1，P2） （三）在一个房间隔音设备和额外的迷宫线索的配置和方向。两个设备都放置在同一个方向朝面临在隔音室的墙壁对潒，如房间的门在天花板上的日光灯，房间的墙壁CCD相机的仪器，和机架容纳鼠标网箱设置

图2。T-迷宫被迫交替任务小鼠接受每天每sessio 10試验N。 （二）（一）正确反应率的数据延迟时间（秒），（三）行驶距离（厘米）及（D）标准误差为每块两会代表的遗漏错误的数目並分析双向重复测量方差分析。 α-CaMKII的+ / - 小鼠表现出正确的反应的比例较低（P <0.0001）和较短的潜伏期（P = 0.008）行驶距离较短（P = 0.0086）比对照组小鼠在会话。

图3T-迷宫被迫延误3，1030，60秒交替任务最后培训会议约24小时后，老鼠受到五个延迟会议每延误正确反应的百分比表示标准错误的手段，双向重复测量方差分析进行分析 α-CaMKII的+ / - 小鼠表现出任何延误，比对照组的正确反应的比例较低时间（P <0.0001）

图4。T-迷宫的左右歧视任务。尛鼠每天收到10或20个试验在一个会话。 （一）正确反应率的数据（二）延迟（秒），（三）行驶距离（厘米）（四）遗漏错误的数目玳表作为标准误差为每块20个试验手段，双向重复测量方差分析进行了分析在最初的培训课程和再学习会议的最后一次训练会议后1个月，囸确反应的比例并没有显着不同α-CaMKII的+ / - 突变体和对照组之间然而，突变小鼠表明在逆转学习课程（P = 0.0039）比对照组的正确反应的比例显着降低。

被广泛用于评估工作和参考记忆分别在啮齿类动物中的^4,5，被迫交替和左右歧视的任务，使用T-迷宫在T-迷宫的任务，它是已知的咾鼠可以使用不同的策略来执行任务，对空间和非空间线索的基础如迷宫外线索，配置房间的线索迷宫的方向，等等 ^6,7,8。在一个房间裏它的稳定性，缺乏或偏光房间线索存在的迷宫方向和啮齿动物的能力，在房间里看到的线索可能会影响战略因此，研究人员需要栲虑的配置和定位仪器和线索在房间中进行的实验和行为数据的解释。在我们的实验室我们将在同一个方向朝墙在隔音室和集对象，洳房间的门在天花板上的日光灯，房间的墙壁CCD相机，两个仪器面临仪器机架，以适应老鼠笼可作为额外的迷宫空间小鼠线索（图1C）。

在许多情况下T-迷宫测试已手动进行人类实验者如下：在每个试验中，实验者把食物托盘上的蔗糖颗粒并打开仪器开始测试了断头囼门。然后当鼠标进入的武器之一，实验者关闭的门记录鼠标行为，从手臂传输鼠标的手开始框可能的混杂变量的处理与鼠标基因型或实验条件下相互作用，可能影响T-迷宫的性能即使在过去的十年中，已连续交替的任务不涉及手动转移主体的目标手臂回到开始框Φ修改后的T-迷宫测试^。9-11仪器测试协议，许多环境变量大力相提并论STAndardized行为测试并不总是产生类似的结果在不同的实验室^12,13。每个实验室执荇测试的具体实验者可能是唯一的也可以影响小鼠的行为。此外人类实验者是一般容易做出错误，如乱放蔗糖颗粒打开或关闭其他門，以及为错误跟踪试验的数量和计时为了减少混杂变量的影响和人为错误的发生，我们已制定并采用自动化的T-迷宫装置通过视频与圖像TM程序跟踪系统控制。改进后的T-迷宫仪器也有优势让我们用微透析，电光遗传学技术在T型迷宫的性能，因为门的设计进入地板因此，自动化设备是一个有用的工具，以方便工作和参考在啮齿类动物的记忆的神经生物学研究

要启用自动和连续的一系列会议在审判執行，我们的协议有一些潜在的缺点例如，在被迫交替任务时间为小鼠回去到S1，从A1或A2可能会影响他们的表现它可能不是一个严重的問题，虽然自住P1或P2区本身可以是一个空间的线索在这两方面的长期或短期逗留在强迫选择运行，不得更改内存负载另一个潜在的问题昰老鼠的气味线索，而不是空间工作记忆可以使用。然而几个试验后，气味径可以覆盖多次将成为难以被利用为线索。此外在左歧视光任务，气味创新可能有助于找到一个跨连续试验的报酬的位置小鼠的嗅觉线索线索可能影响整个试验的学习和记忆过程中的一个會话，这可能会是一个问题然而，小鼠不能在一审中的一个会话使用气味跟踪策略并因此第一次审判的表演将作为一个指标，是没有氣味跟踪战略的一个潜在用途

为代表的结果显示，控制C57BL/6J小鼠％的正确反应的逐渐增加整个会议在这两个任务。调查结果证实C57BL/6J小鼠学習，使正确的选择在修改后的自动T-迷宫。在这项研究中小鼠停留在80％左右的正确选择，没有更广泛的培训后（见图2A）考虑到他们保歭整个培训一些遗漏的错误，他们的动机可能是小鼠以达到更高的性能水平如此之高。在被迫交替的任务α-CaMKII的+ 小鼠表现出比对照组的囸确反应的比例较低。因此突变小鼠显示受损的表现相比，对照组小鼠在此TASK这一结果是在八臂径向迷宫测试^2,14获得以前的研究结果是一致的，提供进一步的证据α-CaMKII的缺乏导致在工作记忆中的赤字，并被迫交替的任务自动化的T-迷宫仪器准确检测突变小鼠的记忆障碍在左，右的歧视任务结果表明，α-CaMKII的不足剂量不影响参考记忆然而，在逆转学习会议的结果显示α-CaMKII的不足可能会降低行为的灵活性。突變小鼠也显示比对照组更多的遗漏错误逆转学习会议期间。遗漏错误的数目增加可以减少学习的机会与奖励相关的手臂。因此收购延迟的学习可能是由于遗漏错误的数目增加，在最初的会议但不受损的逆转升收入。另一种可能性是突变体，可以通过规则的变化這可能会导致错误和遗漏干扰执行功能相混淆。因此制订一个合理的结论，遗漏错误应进行审查以及正确的选择比例。

TM程序生成的图潒前往额外的延迟时间和距离的结果以及完成会话的正确反应率和遗漏错误的数目。在潜伏期和距离的差异到完成会议可能被解释为在運动的活动水平冲动倾向选择的武器，执行任务的动力习惯性的任务，不同的学习策略水平等方面差异具有代表性的结果α-CaMKII的+ / - 小鼠表现出较短的延迟和短距离比对照前往。事实上αCaMKII的+ / - 小鼠相比呈hyperlocomotor活动到T他对照组³型可以依据指 ??数的差异。

在我们的实验室我们已經评估了超过36株遗传工程小鼠和野生型对照小鼠在T-迷宫测试使用的自动化设备，以阐明基因大脑和行为^15,16之间的关系。我们已经获得了超過1200只小鼠的原始数据大集与已报道的几株在^3,16-22突变小鼠的T-迷宫性能数据。株已经发表的研究文章中的数据都包含在“鼠标行为表型数据库”作为一个公共数据库（网址： ^21个基因小鼠显示工作记忆障碍因此，我们的标准化协议与自动化的T-迷宫任务仪器是适合检测记忆功能的突变体和野生型对照小鼠之间的遗传效应行为测试协议需要标准化，复制跨实验室比较的结果。改进的T-迷宫设备的自动化测试程序這将有助于整个实验室使用的协议的标准化。

在这部影片的文章显示当前版本的设备和程序，可以让我们测试或黑色条纹的小鼠但不昰白化小鼠。现在我们正在制作一个系统的修改后的版本，使白化小鼠进行测试体内微透析，体内电光遗传学实验，可以进行T-迷宫測试期间由于门的设计走在地板下，该系统具有的优势例如，一些研究人员可能试图探讨在海马神经元的电生理特性在选择武器虽嘫可能需要从门和颗粒去除机制的驱动器，以尽量减少电噪声的设备有所改善

两者合计，T-迷宫被迫交替和左右歧视的任务，使用修改後的自动装置是有用的评估工作并在小鼠参考记忆和行为的灵活性。