土壤中分解尿素的细菌的分离计数导学案_图文_百度文库
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土壤中分解尿素的细菌的分离计数导学案
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&&土壤中分解尿素的细菌的分离计数导学案
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
知识点总结
知识点总结
&&&&& 该知识点包括研究思路（筛选菌株、统计菌落数目、设置对照）、实验设计及操作提示几个要点知识。
&&&&& 1.&&尿素分解菌的分离与计数：
&&& （1）土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它们体内能合成脲酶。这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。
&&& （2）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
&&&&& 2. 实验设计：
&&&&& 土壤取样&样品稀释&取样涂布&微生物培养&观察并记录结果&细菌计数。 &&&&& 3. 操作提示：
&&& （1）选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长，目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。
&&& （2）选择培养基应用实例：
&&&&& ①培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
&&&&& ②培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
&&&&& ③培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。
&&&&& ④当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。
&&&&& ⑤改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。
&&&&& 本知识点主要考点集中在对尿素分解菌的鉴定方法上，其次是微生物计数的方法也是常见考点，但本部分多以选择题形式出现在考题中，以非选择的形式考查不常见。
&&&&& 1.显微镜直接计数法
&&&&& ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
&&&&& ②方法：用计数板计数。
&&&&& ③缺点：不能区分死菌与活菌。
&&&&& 2.间接计数法（活菌计数法）
&&&&& ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
&&&&& ②操作
&&&&& a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
&&&&& b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
&&&&& ③计算公式：每克样品中的菌株数＝（C/V）&M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
&&&&& 3. 分离分解尿素的细菌的培养基应为选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。其配方如下：
&&& KH2PO4　　　　　　&& 1.4g
&&& Na2HPO4& &&&&&&&&&&&&&&&& 2.1g
&&& MgSO4&7H2O& &&&&&&&&&& 0.2g
&&& 葡萄糖& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 10.0g
&&& 尿素（唯一氮源）& &&&&& 1.0g
&&& 琼脂& &&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&& 15.0g
&&& 将上述物质溶解后，用自来水定容到1 000 mL。
&&&& 【典型例题】可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是（　　）
&&&&& A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂
&&&&& B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂
&&&&& C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂
&&&&& D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
&&&&& 答案：A
&&&&& 解析：在以尿素为唯一氮源的培养基中，不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长，而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源，将尿素分解为氨，使pH升高。若培养基中加入酚红指示剂，指示剂将变红。此培养基既属于选择培养基，又属于鉴别培养基。
知识点精练
练习题一　难易度：易
练习题二　难易度：中
[高二生物]已解答
提问学生：
题型:单选题
德智币:4.0德智币
提问时间: 22:12
问题症结：请老师解释一下A B
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『碎片时间快速学，提分更轻松』细菌分解尿素是ph为什么升高_中华文本库
3.2 在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的 脲酶 将尿素分解成了 氨 。氨会使 培养基的碱性 增强 ,PH 升高 。因此,我们可以通过检测培养基 pH 变化来判断...
培养某种细菌后,如果PH升高,指 示剂将变红,说明该细菌能够分解尿素。 CO(NH2)+ 2 H 2O 脲酶 2NH3 +CO2 纤维素是地球上含量最丰富 的多糖类物质,植物每年...
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教案 - 课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、课题背景 尿素是一种重要的氮肥,农作物不能(能,不能)直接吸收利用...
该细菌产生脲酶是受基因控制的,而不是环境中的尿素诱导的,C 项错 误;细菌合成的脲酶将尿素分解成的氨会使培养基的碱性增强,pH 升高,所以在以尿 素为唯一氮源...
培养某种细菌后, 如果PH升高,指示剂将 变红 ,说明该细菌能 够分解尿素。 2、鉴定大肠杆菌的方法:在培养基中添加 伊红-美蓝 培 养该细菌,如果出现菌落呈现 ...
适于 计数的平板 点此播放教学视频 思考:为什么分离不同的微生物要采用不同的...培养某种细菌后,如果 PH升高,指示剂将变红,说明该细菌能 够分解尿素。测定饮水...
分解尿素的细菌 - 课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌...
基属于 若培养基中存在有分解尿素的细菌,其菌落周围会出现红色环带,这是由于尿素被分解产生的 使 pH 升高,酚红指示剂产生的颜色变化,从而证明这一菌株可以尿素为...脲酶能够将尿素分解为氨和C02，其活性位点上含有两个镍离子，在大豆、刀豆种子中含量较高，土壤中的某些细菌也能够分泌脲酶．实验室从土壤中分离得到了能够分解尿素的细菌M，并分别研究了培养液中Ni2+、Mn2+和尿素浓度对细菌M脲酶产量的影响（说明：研究某一项时其他条件相同且适宜），结果如下表．下列说法正确的是（　　）离子浓度（%）00..00-学库宝
脲酶能够将尿素分解为氨和C02，其活性位点上含有两个镍离子，在大豆、刀豆种子中含量较高，土壤中的某些细菌也能够分泌脲酶．实验室从土壤中分离得到了能够分解尿素的细菌M，并分别研究了培养液中Ni2+、Mn2+和尿素浓度对细菌M脲酶产量的影响（说明：研究某一项时其他条件相同且适宜），结果如下表．下列说法正确的是（　　）离子浓度（%）00.00050.0010.0050.010.05脲酶产量（u/mL）Ni2+0.020.0560.0670.280.360.08Mn2+0.0310.210.280.310.370.085尿素浓度（%）00.20.40.60.81.0脲酶产量（u/mL）01.151.601.731.450.28
A、所有脲酶都在核糖体上合成且在内质网上加工使其与镍结合才具有活性B、实验表明培养液中Ni2+和Mn2+对脲酶的影响为低浓度促进，高浓度抑制C、细菌M合成脲酶需要尿素诱导，尿素的最适诱导浓度在0.4%-0.8%之间D、凝胶色谱法分离脲酶时，脲酶比其他小分子蛋白质在凝胶柱中移动更慢
酶在代谢中的作用的综合尿素酶（Urease）试验/尿素酶试验
　　有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。
　　试验方法：18~24h待试菌培养物大量接种于基管中，摇均，于36&1℃培养10，60和120min，分别观察结果。或涂布并穿刺接种于，不要到达底部，留底部作变色对照。培养2，4和24h分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。快速尿素酶试验　　临床上用以测定胃部（通常为胃窦、胃体）活检组织中的尿素酶的定性试验。是诊断消化道幽门螺杆菌感染的重要诊断指标。需要在胃镜下取胃粘膜组织后进行，是侵入性检测幽门螺杆菌的首选方法，具有操作简便、费用低的优点。　
　　1984年科学家发现幽门螺杆菌一个重要特征是能够产生释放大量的尿素酶，其尿素酶的酶活性是目前已知细菌所产尿素酶活性中最高的。尿素酶对幽门螺杆菌自身具有保护作用，它能水解尿素，生成氨气和二氧化碳，氨气能在幽门螺杆菌体周围形成保护性“氨云”，中和胃酸，是局部的pH升高，便于细菌定植致病。根据这一原理，Marshall等人设计了快速尿素酶试验用于诊断幽门螺杆菌感染。　检验试剂中含尿素、pH指示剂、防腐剂和缓冲剂，可制成试液、琼脂和纸片等。活检取样通常在胃窦，为提高敏感性亦可在胃体夹取一块组织，标本放置于世纪后观察颜色变化，判断结果，时间在30分钟至24小时之间，视试剂性能而定。pH指示剂在酸性条件下，酚红呈黄褐色，若试剂颜色由黄褐色变成红色或紫红色，判为阳性，若不变则判为阴性。此法特别适合在基层单位开展，准确定达90%以上，是目前临床上最常用的诊断方法。
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