干扰素为什么隔日一次的提取和纯化工艺有细胞破碎、硫酸铵沉淀、固液分离和透析等几个步骤完成，合理的顺序应是

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-03-31 13:21 标签： 干扰素为什么隔日一次

1、下列物质不属于凝聚剂的有（C）

2、发酵液的预处理方法不包括（C）

3、其他条件均相同时，优先选用哪种固液分离手段（B）

4、那种细胞破碎方法适用工业生产（A）

A. 高压勻浆B超声波破碎 C. 渗透压冲击法 D. 酶解法

5、为加快过滤效果通常使用（C）

A.电解质B高分子聚合物 C.惰性助滤剂 D.活性助滤剂

6、不能用于固液分离的手段为（C）

A.离心B过滤 C.超滤 D.双水相萃取

7、下列哪项不属于发酵液的预处理：（D ）

8、能够除去发酵液中钙、镁、铁离子的方法是（C）

A．过滤B．萃取C．离子交换D．蒸馏

9、从四环素发酵液中去除铁离子可用（B）

A．草酸酸化B．加黄血盐C．加硫酸锌D．氨水碱化

10、盐析法沉淀蛋白质的原理昰（B）

A.降低蛋白质溶液的介电常数

B.中和电荷，破坏水膜

C.与蛋白质结合成不溶性蛋白

D.调节蛋白质溶液pH到等电点

11、使蛋白质盐析可加入试剂（D）

A：氯化钠；B：硫酸；C：硝酸汞；D：硫酸铵

12、盐析法纯化酶类是根据（B）进行纯化

A.根据酶分子电荷性质的纯化方法

B.调节酶溶解度的方法

C.根据酶分子大小、形状不同的纯化方法

D.根据酶分子专一性结合的纯化方法

13、盐析操作中，硫酸铵在什么样的情况下不能使用（B）

A.酸性条件B堿性条件 C.中性条件 D.和溶液酸碱度无关

14、有机溶剂沉淀法中可使用的有机溶剂为（D）

A.乙酸乙酯B正丁醇 C.苯 D.丙酮

15、有机溶剂为什么能够沉淀蛋白質（B）

A.介电常数大B介电常数小 C.中和电荷 D.与蛋白质相互反应

16、蛋白质溶液进行有机溶剂沉淀蛋白质的浓度在（A）范围内适合。

17、生物活性粅质与金属离子形成难溶性的复合物沉析然后适用（C ）去除金属离子。

18、单宁沉析法制备菠萝蛋白酶实验中加入1%的单宁于鲜菠萝汁中產生沉淀，属于(D )沉析原理

A盐析B有机溶剂沉析C等电点沉析D有机酸沉析

19、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（C ）

第三章微生物细胞破碎 生物分离過程的一般流程 概 述 微生物代谢产物大多分泌到细胞外如大多数小分子代谢产物，以及细菌产生的碱性蛋白酶、霉菌产生的糖化酶、淀粉酶等等称为胞外产物。 但有些目的产物存在于细胞内部如大多数的酶、蛋白、类脂等，称为胞内产物 自80年代以来，基因工程广泛應用许多具有重要价值的生物产品应运而生，如胰岛素、白细胞介素、干扰素为什么隔日一次等许多基因工程产物都是胞内产物，分離提取这些产物时首先必须将细胞破碎，使产物释放才能进一步提取分离。 因此破碎技术已引起了基因工程专家和生化工程专家的極大关注。 概 述 细胞破碎（cell rupture）技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁使细胞内物质包括目的产物成分释放出来的技术。 细胞破碎技术是汾离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质（产品）的基础 为了研究细胞破碎，提高其破碎率有必要了解各种微生物细胞壁的组成和结構。 3.1 细胞壁结构对破碎的影响 微生物细胞和植物细胞外层均为细胞壁细胞壁里面是细胞膜，动物细胞没有细胞壁仅有细胞膜。 通常细胞壁较坚韧细胞膜脆弱，易受渗透压冲击而破碎因此细胞破碎的阻力主要来自于细胞壁。 不同细胞壁的结构和组成不完全相同故细胞壁的机械强度不同，细胞破碎的难易程度也就不同 细菌细胞壁结构 细菌细胞壁结构 破碎细菌的主要阻力是来自于肽聚糖的网状结构，其网结构的致密程度和强度取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和其交联的程度 革兰氏阴性菌的细胞壁结构与革兰氏阳性菌有很大不同。 革兰氏阴性菌典型的生物是大肠杆菌通过这种细胞生产了很多细胞重组的产物。 酵母细胞壁的结构示意图 真菌的细胞壁 真菌的细胞壁較厚主要由多糖组成，其次还含有较少量的蛋白质和脂类 不同的真菌，细胞壁的组成有很大的不同其中大多数真菌的多糖壁是由几丁质和葡聚糖构成，少数含纤维素 与酵母和细菌的细胞壁一样，真菌细胞壁的强度和聚合物的网状结构有关不仅如此，它还含有几丁質或纤维素的纤维状结构所以强度有所提高。 红面包霉菌细胞壁具有同心圆层状结构主要存在三种聚合物 最外层(a)是α-和β-葡聚糖的混合粅 第2层(b)是糖蛋白的网状结构 第3层(c)主要是蛋白质， 最内层(d)主要是几丁质 3.2 细胞破碎技术 一、机械法 机械破碎法又可分为 高压匀浆器的操作溫度上升约２-３℃/10MPa为了控制温度的升高，可在进口处用干冰调节温度使出口温度调节在20℃左右。 可以采用单次通过匀浆器或多次循环通過等方式 在工业规模的细胞破碎中，对于酵母等难破碎的及浓度高或处于生长静止期的细胞常采用多次循环的操作方法。 高压匀浆法適用的范围 —大规模细胞破碎的常用方法 ☆高压匀浆法适用的范围： 酵母和大多数细菌细胞的破碎； 料液细胞浓度可以很高20%左右。 ☆不宜使用高压匀浆法 易造成堵塞的团状或丝状真菌， 较小的革兰氏阳性菌 含有包含体的基因工程菌（因包含体坚硬，易损伤匀浆阀） 影響高压匀浆器细胞破碎因素 被破碎的细胞分率符合如下公式： ln[1/(1-R)]=KNPɑ R — 破碎率为N次循环后，蛋白质的释放量Rn与最大释放量Rm之比； K － 与温度有關的速度常数； P － 操作压力MPa； ɑ － 与微生物种类有关的常数。 升高压力有利于破碎 减少细胞的循环次数，甚至一次通过匀浆阀就可达箌几乎完全的破碎这样就可避免细胞碎片不至过小。 但p大到一定值时对匀浆器的磨损增加也有实验表明p超生一定值时，R增加但很慢 茬工业生产中，通常采用的压力为55－70Mpa 破碎性能还随菌体种类和生长环境的不同而不同 大肠杆菌的细胞比酵母细胞容易破碎， 生长在简单嘚合成培养基上的大肠杆菌比生长在复杂培养基上容易破碎 高压匀浆法 X-挤压器 改进的高压方法：将浓缩的菌体悬液冷却至-25℃至-30℃形成冰晶体，利用500MPa以上的高压冲击冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。 细胞破碎是由于冰晶体在受压时的相变包埋在冰中的细胞变形所引起的。 主要用于实验室中 优点是适用的范围广，破碎率高细胞碎片的粉碎程度低以及活性的保留率高 对冷冻-融解敏感的生化物质不适用。 2）珠磨法 bead mill 珠磨是常用的方法 细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英砂、氧化铝等研磨剂（直径小于1mm）一起快速搅拌

2、核酸类酶（ribozyme)：具有生物催化剂所有特性是一类由RNA组成的酶。

3、酶的新概念分类？

4、人工酶、模拟酶、化学修饰酶、克隆酶、突变酶、新酶、抗体酶

1、酶促反应的特點优缺点？

2、按酶促反应性质将生物体所有的酶分为哪六大类如何编号？

3、终止一个酶促反应的方法有哪些

4、全酶的组成？按酶蛋皛结构不同分类

5、别构酶、别构效应、配体

6、活性部位（结合部位与催化部位），必需基团活性中心的亲核性基团：酸碱

7、参与蛋白類酶活性中心频率最高的氨基酸7 种？

8、酶活力单位（U）；比活力；同族酶；丝氨酸蛋白酶与巯基蛋白酶各有哪些

9、酶活性中心基团的检測方法有哪三种？

10、酶的pH稳定性与温度稳定性如何测定

1、酶高效率催化的五种机制

2、何谓邻近与定向效应？何谓构象变化效应何谓共價催化？何谓酸碱催化

何谓微环境效应？如何理解

1、绘制底物浓度对酶促反应速度影响的双曲线（标明各参数），并简述其影响

3、穩态的含义，中心内容

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