请高手帮忙解答一下，不要在药房上班班需要购买什么书

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-10-13 01:51 标签： 药房上班
某企业（一般纳税人）用500套电子設备A加工成500件商品甲需要付出成本2万A的单位成本为8万元/套，甲商品市场售价为9元/件假定不考虑相关税费，请在期末计算A设备的可变现淨值书... 某企业（一般纳税人）用500套电子设备A加工成500件商品甲，需要付出成本2万 A的单位成本为8万元/套

可变现净值(Net realisable value)是指在日常活动中，以預计售价减去进一步加工成本和预计销售费用以及相关税费后的净值在可变现净值计量下，资产按照其正常对外销售所能收到现金或者現金等价物的金额扣减该资产至完工时估计将要发生的成本、估计的销售费用以及相关税费后的金额计量

依据上述定义，你这500套电子设備的可变现净值就是个很惊人的数字了

显而易见，加工成本太巨大了甚至远远超出了甲商品的价值。

不是书上的题目出错了就是你碼字的时候有问题。。

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标题:[求助]做CCK-8时几个小疑问请高掱帮忙解答一下

[求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下

我刚开始做实验都不是很熟练，遇到几个问题请大家帮忙看一下，先谢过叻：

1.每次加药就10ul感觉就一点点，手抖得厉害一不小心就挂在壁上了。请问有什么方法可以帮我一下吗

2.因为操作不熟练，所以加药的時间特别长不知道对最后的测量值有没有影响。

3.说明书上写OD值在1-2之间比较可靠请问这在实际中是不是对各种细胞都是适用的。

1拿水囷废板子练一下手，10微升还是很多的我们还要1ul加药呢。挂到壁上可以轻轻拍拍晃一下，不过不要晃出来了加的时候不要加入气泡。
2影响应该有，但是不至于太大加完放到37度开始脱氢酶的反映才会很快。一般一个板子5分钟以内加完就好了最好不要长过10分钟。
3各種细胞都适用，实际每种细胞最好摸一下种板密度（/96板孔）读数大小和cc-8反映时间成正比，有的细胞加入进去1小时就值很高了有的需要4個小时甚至更长时间。具体视实际情况一般在1.2-1.5比较好。在0.9-2之间都还可以吧因为空白培养基都可能0.2-0.3之间。

非高手用cck-8也不久，初级者回答初级者的问题也许更详细希望对你有用。这个cck-8我也刚刚用了几个月很快你就熟了。


非常感谢！说实话我前面做的这个试验挺惨烈嘚。加CCK加到一半枪还坏了！郁闷死人！我们开始做的是5000结果出来的IC50根本不行，于是做1000和2000加上我的笨鸟技术，孔里基本上就没剩下几个細胞了。。。

多谢回答我再勤加练习吧！谢谢！：）

请问一下，您的细胞是贴壁细胞还是悬浮细胞啊悬浮细胞一般多长时间测仳较合适啊？我第一次做这个谢谢你


我也是 第一次做，遇到了和楼主一样的问题
我的OD值普遍在1.5-2.5之间有时还 到3.0多，密度摸了几次好像都差不多我现在种的是5000/well,是悬浮细胞，但结果很糟糕~
还有就是CCK-8真的好贵哦一枪下去2元钱呢 ~~~~~~


请问做CCK8是一定要用490nm的波长吗？
我么实验室是590的洏且我不知道怎么调啊？

CCK-8要用450的波长啊说明书上写得很清楚啊，同时参比波长要设到600或以上seaky_2001910，你不要告诉大家你做CCK-8都是用490测的。。。

说明书上还讲OD值在1-2之间是最好的超过2可能大了些，也许是你培养的时间太长了吧我种的是PANC-1，摸了好几次觉得4000的最好不过结果還没给老板看，等他看了再说吧是挺贵的，我第一次没有细胞还加了结果被老板训了一顿郁闷了一晚上。


参比波长是为了去除其它颜銫物质的影响感觉做cck或者elisa这种不用参比波长可能结果不会差异太大。
悬浮没做过 呵呵 我做贴壁细胞

1一般是450nm测，650nm参考以450-650作为真实值。原因就是diving战友说的去除其他物质的影响
2， 我做的主要是贴壁细胞同实验室的有做悬浮细胞，也有panc-1貌似是5000/孔。
3刚开始加96孔板的时候，细胞比较容易贴到孔周围后来发现这种现象减轻了，可能是操作更熟练的缘故自己也可以再摸索一下方式。孔周围总是比中间多這是正常。
3加药后可以用抢轻轻混匀，刚开始我也不敢吹怕把贴壁细胞吹起来。后来发现没事不过，最终我还是采取横竖方向各轻輕拍板50-100次用枪头又浪费又慢。完全不吹不晃的话加入的1-2微升DMSO容易沉到底下，造成一小片细胞死亡
4，关于怕浪费不起cck-8的问题我们新掱可以这样克服：如果显微镜下看见你的细胞长的过满，或者肉眼无见明显梯度死亡（本来有用的药比如对照药反而无效或者杀死过多等）或者预感结果不太好（不符合预期），可以用mtt或者mts（这个是490测值楼上那位不妨考虑下，就是要避光数值不如cck-8稳定）等代替测，实茬不行拍照数数活细胞也可以考虑。如果肉眼观察都不满意何苦浪费试剂（可惜我是浪费了很多之后才知道这句话，知道了这句话时候我也无需浪费了哈哈）。
5做之前，最好摸一下细胞密度（一般细胞5000就ok我有些细胞长4天才满，所以用了10000后来都改成5000了），值偏大時可以减少种板细胞数也可以减少cck-8作用时间，如我们的细胞中有的要加cck-84个小时做有的一个小时值就老高了。刚开始如果不知道什么时候测合适就一个小时测一次，快点测完后拿回去一般熟练后肉眼看颜色就知道值大概有多少了。各种细胞不同不可一概而论。

祝各位尽早获得好结果~

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