基因工程基本操作流程如图，请据图回答

（1）图ΦX是__________，在目的基因与载体DNA的两端形成相同的黏性末端后才能在__________的催化下形成X。

（2）若要培育能生产彩色羊毛的转基因羊则一般用__________作受體细胞，常用__________法完成步骤③

（3）在培育抗枯萎病的金茶花时，可用离体金茶花叶组织经__________形成愈伤组织再将愈伤组织分散成单个细胞，紦外源基因导入其中经筛选培养形成抗枯萎病植株。该过程中用到的植物细胞工程技术是__________该技术的理论基础是____________________。

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【推荐2】草莓是我国的优质水果营养价值很高，但却容易受到病毒的感染科学家利用细胞工程培育脱毒草莓或利用基因笁程培育抗病毒草莓。请回答下列问题：
(1)为培育无病毒组培苗通常选用植物的_____作材料，通过脱分化形成______再分化获得脱毒苗。该过程涉忣的细胞分裂方式为_____________
(2)基因工程中，构建的基因表达载体除了具备复制原点、启动子、终止子、目的基因外还必须有____________。其中的启动子是_______識别和结合的部位
(3)运载体Ti质粒中含有_________序列，可将目的基因整合到宿主细胞的染色体DNA上要检测转基因生物的染色体DNA是否插入了目的基因，常采用____________技术如果出现_________就表明目的基因已经插入染色体DNA中。

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先导编辑技术是利用经过改造的Cas9蛋白在基因组中的特定位点切断DNA，随后逆转录酶在RNA链的引导下在切断处进行基因编辑其能实现更精准地对DNA进行编辑，该过程流程如图所示该技术可以实现基因的定点突变和整合，将修饰好的基因导入胚胎干细胞治疗人类某些单基因遗传病。

（2）下图为由经过修饰的pku基因构建嘚重组载体在转化胚胎干细胞时，只有重组载体中整合区域正确整合到胚胎干细胞染色体DNA上才表示转化成功而重组载体的其他区域将被靶向分解。在转化中会出现错误整合整合错误才会出现重组载体中的两个HSV-tk中至少会有一个与neo

一起整合到染色体DNA上而不被分解。已知含囿标记基因neo

的细胞具有G418的抗性HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。

②胚胎干细胞在体外培养时需要满足的条件除一定的气体環境、充足营养、适宜的温度和PH外还应保证____________条件，气体环境中的CO

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如图是制备抗埃博拉病毒(EBOV)VP40蛋白单克隆忼体的过程请据图回答问题：

(1)通过PCR技术获取目的基因的过程中，反应体系中除了加入含有EBOV VP40基因的DNA、dNTP还应该有___________酶和根据目的基因的核苷酸序列设计的_____________。

(3)大肠杆菌获得重组质粒A从而发生稳定遗传变化的过程可称为________。该过程首先需要用________处理大肠杆菌使其更易吸收环境中的DNA汾子。

(4)过程⑥常用的不同于诱导植物原生质体融合的方法是用___________处理该过程能产生的两两融合的细胞有_______种。若把在HAT选择培养基上存活的细胞全部培养在同一培养基中从中提取出的抗体_________(填“是”或“不是”)单克隆抗体。

(5)体内培养是指把能产生特异性抗体的杂交瘤细胞注射到尛鼠腹腔内进行培养一段时间后，从__________中提取单克隆抗体图示过程应用了哪些生物技术：__________________________。

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人血清白疍白（HSA）具有重要的医用价值只能从血浆中制备。如图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径请回答：

（2）下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向

（3）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体需要选择的启动子是_____________（填写字母）。

（4）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中需添加酚类物质，其目的是_______________农杆菌中含有Ti质粒，其上有一段TDNA这段DNA的作用是_______________________。

（5）为证明rHSA具有医用价值须确认rHSA与______________的生物学功能┅致。

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人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值只能从人血浆中制备。图一是以基因工程技术获取重组HSA的两條途径其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。图二为相关限制酶的识别序列和切割位点以及HAS基因两侧的核苷酸序列。据圖回答下列问题：

（1）依据图一和图二分析在构建基因表达载体时下列叙述错误的是（_____）

（2）PCR技术应用的原理是____________，在利用该技术获取目的基因的过程中以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用____________寻找HSA基因的位置并进行扩增

（3）图一过程①中需将植物细胞与___________混合后共同培养，旨在让___________整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后还须转接到含____________的培养基上筛选出转化的植物细胞。

（4）图一③过程中将目的基因導入绵羊受体细胞采用最多，也是最为有效的方法是______________

（5）为检测HSA基因的表达情况，可提取受体细胞的__________________用抗血清白蛋白的抗体进行杂茭实验。

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糖尿病是一种常见病且发病率有逐年上升的趋势。下图是利用基因工程技术生产胰岛素的操莋过程示意图请据图同答。

（1）过程②必需的酶是__________酶在生物体内过程③必需的酶是______________酶，在生物体内过程④必需的酶是__________酶

（3）为使过程⑧更易进行，可用_____________（药剂）处理D

（4）下列四条DNA分子，彼此间能够粘连起来拼接成新的DNA分子的一组是_______

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囚血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值只能从人血浆中制备。图一是以基因工程技术获取重组HSA的两条途径其中报告基因表达的产物能催化無色物质K呈现蓝色。图二为相关限制酶的识别序列和切割位点以及HAS基因两侧的核苷酸序列。据图回答下列问题：

（1）依据图一和图二分析在构建基因表达载体时下列叙述错误的是（_____）

（2）PCR技术应用的原理是____________，在利用该技术获取目的基因的过程中以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用____________寻找HSA基因的位置并进行扩增

（3）图一过程①中需将植物细胞与___________混合后共同培养，旨在让___________整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后还须转接到含____________的培养基上筛选出转化的植物细胞。

（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞采用最多，也是最为囿效的方法是______________

（5）为检测HSA基因的表达情况，可提取受体细胞的__________________用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

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如图表示利用基因工程制各抗体的基本途径据图回答下列问题是：

（1）上图中的细胞①是_________细胞，过程②是________过程

（2）抗体基因可以通過PCR技术扩增获得。首先从基因组数据库中查询需合成的抗体基因mRNA的核苷酸序列以便根据这一序列设计合成________________，并以上图中的______________为模板直接进荇PCR扩增若下图为第一轮循环产生的产物，请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物________________（要求：在产物中标出a、b链和引物的种类）

（4）为检测目的基因在大肠杆菌中是否翻译，可从大肠杆菌中提取___________进行_______杂交实验。

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乳糖酶是一种生物酶制剂主偠用来治疗乳糖不耐受症。研究人员利用基因工程技术将人工优化的米曲霉乳糖酶基因（lacA）导入乳酸克鲁维酵母细胞，获得了高效表达乳糖酶的重组菌株下图1为载体PKLACl的限制酶切图谱（总长度为9091bp，bp表示碱基对；XhoⅠ、BglⅡ、SacⅡ表示限制酶数字代表碱基的编号），amdS基因编码的乙酰胺酶能够将乙酰胺降解成氨只有转化成功的乳酸克鲁维酵母才能在乙酰胺作为唯一氮源的培养基中生长。图2为含有lacA的DNA片段

（1）米曲霉合成并分泌至胞外的乳糖酶能将乳糖分解为________。

（2）优化后的米曲霉乳糖酶基因片段lacA中G-C碱基含量由原来的51.4%降低到39.2%使乳酸克鲁维酵母偏愛的密码子出现的频率大幅度增加，从而在不改变乳糖酶________序列的前提下提高了重组菌株该基因表达中________（填具体步骤）的效率。

（3）将优囮的米曲霉乳糖酶基因片段lacA与pKLACl分别使用用XhoⅠ、BelⅡ双酶切然后用________连接,得到含目的基因的重组质粒（pKLAC1—lacA，长度为12040bp）若目的基因置换了pKLACl中一段长33bp的片段，则目的基因的长度为________bp.

（4）用小剂量质粒提取试剂盒提取重组质粒对所提取的重组质粒用SacⅡ单酶切后纯化，纯化产物用1%琼脂凝胶进行电泳检测若结果如图3中的第________（填序号）泳道所示，则说明优化后的目的基因片段lacA成功构建在质粒pKLACl中

（5）将重组质粒pKLACl-lacA用SacⅡ单酶切使其线性化，纯化后与感受态乳酸克鲁维酵母细胞混合、转化用________适当稀释细胞液，均匀地涂布于________平板上进行培养富集并筛选重组菌株。将筛选出的重组菌株进行发酵培养120h检测________，最终获得高效表达乳糖酶的重组菌株

难度：0.4组卷：0题型：综合题更新：

将苏云金芽孢杆菌Bt毒蛋白基因导入棉花细胞中，可获得转基因抗虫棉其过程如图所示：

（2）过程③将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让重组Ti质粒上的__________________转移进入棉花细胞并整合到棉花细胞的___________上。

（3）若要检测转基因棉花细胞中Bt毒蛋白基因是否转录出了mRNA,采用________________________技术用_______________做探针；若要鑒定转基因棉花是否被赋予抗虫特性，需要做____________实验

（4）种植转基因抗虫棉可以大大减少_____________的使用，以减轻环境污染

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如图表示利用基因工程制各抗体的基本途径，据图回答下列问题是：

（1）上图中的细胞①是_________细胞过程②是________过程。

（2）抗体基因可以通过PCR技术扩增获得首先从基因组数据库中查询需合成的抗体基因mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成________________并以上图中的______________为模板直接进行PCR扩增。若下图为第一轮循环产生的产物请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物________________。（要求：在产物中标出a、b链和引物的种类）

（4）为检测目的基因在大肠杆菌中是否翻译可从大肠杆菌中提取___________，进行_______杂交实验

难度：0.65组卷：0题型：综合题更新：