请教一下怎么以这两种方法求IL

想请教刺激前是否要用无的液饥餓细胞 或者是将IL-1溶解在PBS里

用PBS来刺激细胞 细胞是否不能培养在5%的血清培养液中呢

转染NF-kB-luc报告基因24小时以后,换成无血清的

继续培养2-10个小时,需要看伱的细胞状态了,细胞状态好的化就可以适当延长去掉血清饥饿细胞的时间.

然后用一定浓度的IL-1beta刺激细胞,8-12个小时之后收获细胞,测定NF-kB-luc的荧光值.

去掉血清是为了避免和排除血清里未知复杂成分的干扰.

哦 谢谢 请问你做过后的结果如何 变化明显吗

还有就是换成无血清的培养基继续培养2-10个尛时后 在用IL-1刺激的时候是否是在血清培养液中还是在无血清的环境下呢

当然是在无血清的情况下,如果这时候再加血清前面的不是白做了吗,呵呵
我做的基因变化很明显.

谢谢 还有一个问题 我用的是脂质体转染

是不是把含脂质体的培养液换成含血清培养液 还是从转染后就不能用含血清培养液了呢

你这有是另外一个问题了.

做任何转染实验,无论什么细胞,都需要在转染前把培养液换成不含血清不含的,否则细胞会死很多.

也嘟是有细胞毒性的,因此转染4-6小时后就必须换液,换成含血清的培养液,让细胞继续生长.,直到你做下面的处理实验.

嗯 我明白了 非常感谢螺旋你这兩天的热心帮助!

对panzerking:我想用LPS刺激THP-1细胞 用NF-kB-luc报告基因来检测nfkb的激活 ,这个试验费事吗大概需花费多钱,我是学临床的问这个问题可能比较弱智,请予回答不胜感激!

怎么没人理我呢?自己顶一下!

这是个非常简单的实验,对分子细胞实验室来说是常规实验,如果有各中硬件设備,做起来是很快的,开销也不大

请教螺旋前辈:我购买的il-1beta 是2微克的但我要用的是2纳克/毫升的浓度刺激细胞,请教一下应该如何稀释是直接用无血清培养基稀释吗?还有就是我的IL-1一次用不完但说明书上说在含,非常感谢!

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