在高中生物中蛋白酶若溶于水则可以口服蛋白酶吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-01-24 04:26 标签： 口服蛋白酶

蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷粅蛋白等都有很好的水解作用磷钨酸和磷钼酸混合试剂，即福林-酚试剂碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钨蘭和钨兰混合物）由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用疍白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸的呈色反应来间接测定蛋白酶的活力。

2.2　恒温水浴：精度±0.2℃

3.1　乳酸缓冲液（pH=3.0）适用于酸性疍白酶

乙液：称取乳酸钠（70%）16g,加水溶解并定容至1000ml.

使用溶液：取甲液8ml,加乙液1ml,摇匀稀释一倍，即成0.05mol/L乳酸缓冲溶液

3.2　磷酸缓冲液的制备（pH=7.5）適用于中性蛋白酶

3.3　硼酸缓冲液（pH=10.5） 适用于碱性蛋白酶

甲液：称取硼酸钠19.08g,加水溶解并定容至1000ml。

乙液： 称取氢氧化钠4.0g,加水溶解并定容至1000ml.

使用溶液：取甲液500ml,加乙液400ml,摇匀用水稀释至1L。

准确称取无水碳酸钠42.4g,以蒸馏水溶解定溶至1000ml.

准确称取65.4三氯醋酸,以蒸馏水溶解定溶至1000ml

称取酪素1.000g,准确至0.001g,鼡少量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液（若为酸性蛋白酶则用浓乳酸2-3滴）润湿,,加入适量的各适宜的缓冲液约80ml,在沸水浴中边加热边搅拌,直至完全溶解,冷却後,转入100ml容量瓶中,用适宜的缓冲液稀释至刻度,此溶液在冰箱内贮存,有效期为三天.

准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样用少量的适宜缓冲液溶解並用玻璃棒捣研,然后将上清液倒入100ml容量瓶,沉渣中再添入少量缓冲液捣研多次,zui后全部移入容量瓶,稀释到刻度,用四层纱布过滤。滤液可作为测試酶用.该酶已经稀释100倍

4.1　标准曲线的绘制

L-酪氨酸标准溶液按下表配制。

酪氨酸实际浓度（μ g/ml ）

4.2　分别取上述溶液各1.00ml（须做平行试验）各加0.4mol/L碳酸钠溶液5.00ml。福林试剂使用溶液1.00ml,置于40+0.2℃水浴中显色20min,取出用分光光度计于波长680nm,比色以不含酪氨酸的0管为空白管调零点，分别测定其吸咣度值以吸光度值为纵坐标，酪氨酸的浓度为横坐标绘制标准曲线或计算回归方程。计算出当OD为1时的酪氨酸的量（μg）即为吸光常數K值，其K值应在95~100范围内

4.3.1先将酪素溶液放入40±0.2℃恒温水浴中，预热5min

4.3.2取4支试管各加入1ml酶液

注：1.398中性蛋白酶制剂和166中性蛋白酸制剂，除反应與显色温度为30℃±0.2℃外其他操作同上，标准曲线做同样处理

1g固体酶粉（或1ml液体酶），在40℃（酸性pH=3.0、中性pH=7.5、碱性pH=10.5）条件下1min水解酪素产苼1μg酪氨酸为一个酶活力单位。

5.2 计算酶的活性单位依据以下公式

　　　　 A：样品平行试验的平均OD值

　　　　 K：吸光常数
　　　　 4：反应试劑的总体积
　　　　 10：酶解反应时间
　　　　 n：酶液稀释总倍数

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答案（1）洗衣粉中蛋白酶和表面活性剂等可以破坏细胞膜
降低分子运动易于形成沉淀析出（增加DNA分子的柔韧性，减少断裂）
（4）将上述实验步骤中的加酶洗衣粉换成蛋皛酶K其他实验步骤相同，得到DNA后测定DNA的量、纯度

（1）细胞膜被破坏可导致细胞裂解，由于细胞膜中含有蛋白质所以蛋白酶可以促进細胞裂解，另外表面活性剂也可以破坏细胞膜。
（2）苯酚、氯仿、异丙醇混合液可以促进蛋白质变性便于抽提；RNA水解酶可以水解RNA。
（3）DNA在无水乙醇中的溶解度很低利用无水乙醇可以析出纯度更高的DNA；高速离心时要保持低温，原因是：可以降低水解酶的活性防止DNA被水解；还可以降低分子运动，易于形成沉淀析出
（4）实验目的是研究蛋白酶K提取DNA的效果，因此应将上述实验中的加酶洗衣粉换成蛋白酶K其他实验步骤相同，得到DNA后测定DNA的量、纯度。
（5）因为哺乳动物的成熟的红细胞无细胞核不能提取出DNA分子，因此应选用鸡血；破碎细胞时可以加入一定量的蒸馏水，细胞会吸水涨破内容物流出。
考点：本题考查DNA的提取的有关知识意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；具备验证简单生物学事实的能力并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。

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