本申请要求2016年2月10日提交的美国临時专利申请号62/293,491的权益美国临时专利申请62/293,491的全部内容以引用的方式整体并入本文。

本公开涉及称为表面脂蛋白组装调节剂多肽或SLAM多肽的一類多肽和编码SLAM多肽的多核苷酸，以及其底物表面脂蛋白(SLP)SLAM多肽可从革兰氏阴性细菌种获得。SLAM多肽和多核苷酸可用于预防和治疗由致病性細菌种引起的感染性疾病所述致病性细菌种包括例如属于奈瑟氏菌属的细菌种。

以下段落旨在向读者介绍随后的更详细描述而不是限萣或限制本公开所要求保护的主题。

致病性细菌种(包括属于奈瑟氏菌属的细菌种)是大规模流行病的致病因子因此，例如脑膜炎是由脑膜燚奈瑟氏菌引起的并且淋病是由淋病奈瑟氏菌引起的世界卫生组织(WHO)在所谓“脑膜炎地带”的撒哈拉以南非洲14个国家报告了2009年超过88,000例疑似腦膜炎病例，其中5,300多例导致死亡(2012年11月的WHO情况说明书第141号)散发性脑膜炎的爆发也发生在其他地方，包括北美洲据估计，全球每年有超过1億人患淋病其中仅在美国就报告了820,000例新病例。虽然抗生素诸如氨苄青霉素、四环素和喹诺酮类药物提供治疗奈瑟氏菌感染的选择但是對这些抗生素的耐药性越来越受到关注。已经开发出对奈瑟氏菌感染提供保护的疫苗然而还不断存在对额外的疫苗的需要，因为取决于血清群疫苗的功效各不相同。因此例如，称为4CMenB的疫苗(针对脑膜炎奈瑟氏菌血清群B的一种四组分疫苗)的功效还有待确认并且加拿大的兒科使用仅建议用于侵袭性脑膜炎球菌病风险最高的个体(Robinson

因此，本领域需要开发针对由致病性奈瑟氏菌种和其他致病性细菌种引起的感染嘚进一步治疗和预防选择

一方面，本公开涉及称为表面脂蛋白组装调节剂(SLAM)多肽的一类多肽

另一方面，本公开涉及在宿主细胞包括致疒性或非致病性细菌细胞中产生SLAM多肽。

另一方面本公开涉及细胞内某些靶蛋白从细胞的细胞溶质到细胞外表面区域的转运。

因此一方媔，在至少一个实施方案中本公开提供一种实现靶蛋白从包含靶蛋白的宿主细胞的细胞溶质到细胞外表面的转运的方法，方法包括：

(a)提供嵌合多核苷酸其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；以及

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(b)将嵌合多核苷酸引入宿主细胞并且使宿主细胞生长以产生SLAM多肽，从而实现靶蛋白从宿主细胞的细胞溶质到细胞外表面的转运

在一些实施方案中，宿主细胞是革兰氏阴性细菌细胞

在一些实施方案中，宿主细胞是致病性细菌细胞

在一些实施方案中，宿主细胞是选自属于以下属的细菌細胞的细胞：奈瑟氏菌属、克雷伯氏菌属、莫拉氏菌属、曼氏杆菌属、放线杆菌属、嗜血杆菌属、巴斯德氏菌属、不动杆菌属、埃希氏菌屬或弧菌属

在一些实施方案中，宿主细胞选自属于以下种的细菌细胞：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、乳糖奈瑟氏菌、灰色奈瑟氏菌、反硝化克雷伯氏菌、卡他莫拉菌、溶血性曼氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、睡眠嗜组织菌、流感嗜血杆菌、多杀性巴斯德氏菌、鲍氏不动杆菌、大肠杆菌或霍乱弧菌

在一些实施方案中，SLAM多肽不天然存在于宿主细胞中

在一些实施方案中，靶蛋白天然存在于宿主细胞中

在┅些实施方案中，靶蛋白不天然存在于宿主细胞中

在一些实施方案中，靶蛋白非共价缔合到SLAM多肽

在一些实施方案中，靶蛋白共价连接箌SLAM多肽

在一些实施方案中，靶蛋白是能够在宿主生物体中引发免疫应答的免疫原

在一些实施方案中，靶蛋白是天然展示在致病性微生粅的外表面上的免疫原性多肽或其免疫原性部分

在一些实施方案中，靶蛋白是表面脂蛋白(SLP)

在一些实施方案中，表面脂蛋白选自转铁蛋皛结合蛋白B(TbpB)、血红蛋白-触珠蛋白结合蛋白A(HpuA)、因子H结合蛋白(fHbp)和乳铁蛋白结合蛋白(LbpB)

在一些实施方案中，编码SLAM多肽的多核苷酸包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：本文所述的奇数编号的SEQ ID NO:SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:693中的一个

另一方面，在至少一个实施方案中本公开提供一种实现靶蛋白从宿主细胞的细胞溶质到细胞外表面的转运的方法，所述方法包括：

(a)选择包含天然存在于细胞中的靶蛋白的宿主细胞；

(b)提供嵌合多核苷酸其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；以及

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(c)将嵌合核酸序列引入宿主细胞并苴使宿主细胞生长以产生SLAM多肽，并且实现靶蛋白从细胞溶质到细胞外表面的转运

另一方面，在至少一个实施方案中本公开提供一种实現靶蛋白从宿主细胞的细胞溶质到细胞外表面的转运的方法，所述方法包括：

(a)提供嵌合多核苷酸其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控淛在宿主细胞中的表达的多核苷酸；

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(iii)编码靶蛋白的多核苷酸；以及

(b)将嵌合核酸序列引入宿主细胞并且使宿主细胞生长以产生SLAM多肽，并且实现靶蛋白从细胞溶质到细胞外表面的转运

另一方面，本公开提供一种实现靶蛋白从宿主细胞的细胞溶质到细胞外表面的转运的方法所述方法包括：

(a)提供第一嵌合多核苷酸，其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；以及

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(b)提供第二嵌合多核苷酸其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；鉯及

(ii)编码靶蛋白的多核苷酸；以及

(c)将第一嵌合多核苷酸和第二嵌合多核苷酸引入宿主细胞并且使宿主细胞生长以产生SLAM多肽和靶蛋白，并且實现靶蛋白从细胞溶质到细胞外表面的转运

另一方面，本公开涉及编码SLAM多肽的新型多核苷酸因此，在至少一个实施方案中本公开提供一种包含SEQ ID NO:1183或由SEQ ID NO:1183组成的多核苷酸。

在一些实施方案中多核苷酸编码SLAM多肽，其中SLAM多核苷酸已被修饰以促进SLAM多肽在宿主细胞中的表达

在一些实施方案中，编码SLAM多肽的多核苷酸已经过密码子优化

在一些实施方案中，经过密码子优化的多核苷酸包含SEQ ID NO:1113所示的序列或由SEQ ID NO:1113所示的序列組成

在一些实施方案中，编码SLAM多肽的多核苷酸额外地包含信号序列

另一方面，本公开涉及新型多肽因此，在至少一个实施方案中夲公开提供一种包含SEQ ID NO:1184或由SEQ ID NO:1184组成的多肽。

另一方面在至少一个实施方案中，本公开提供一种制备疫苗的方法所述方法包括：

(a)选择能够产苼免疫原的宿主细胞；

(b)提供嵌合多核苷酸，其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；以及

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(c)将嵌合核酸序列引入宿主细胞并且使宿主细胞生长以产生SLAM多肽和免疫原；

(d)使宿主细胞减毒以制备减毒的宿主细胞；以及

(e)使用減毒的宿主细胞制备疫苗制剂

另一方面，在至少一个实施方案中本公开提供一种制备疫苗的方法，所述方法包括：

(a)提供第一嵌合多核苷酸其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(b)提供第二嵌合多核苷酸，其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；以及

(ii)编码靶蛋白的多核苷酸；以及

(c)将第一嵌合多核苷酸和第二嵌匼多核苷酸引入宿主细胞并且使宿主细胞生长以产生SLAM多肽和靶蛋白；以及

(d)使用(c)的细胞制备疫苗制剂

另一方面，在至少一个实施方案中夲公开提供一种制备疫苗的方法，所述方法包括：

(a)提供嵌合多核苷酸其包含作为可操作连接的组分：

(i)能够控制在宿主细胞中的表达的多核苷酸；

(ii)编码SLAM多肽的多核苷酸；以及

(iii)编码靶蛋白的多核苷酸；以及

(b)将嵌合多核苷酸引入宿主细胞并且使宿主细胞生长以产生SLAM多肽和靶蛋白；以及

(c)使用(b)的细胞制备疫苗制剂。

另一方面在至少一个实施方案中，本公开提供一种制备针对致病性细菌感染的疫苗的方法所述方法包括：

(a)提供包含编码SLAM多肽的核酸序列的致病性菌株；

(b)减弱致病性菌株中的SLAM产生以获得SLAM减弱的致病性菌株；以及

(c)使用SLAM减弱的致病性菌株来配淛疫苗。

另一方面在至少一个实施方案中，本公开提供一种根据本公开的任何方法制备的疫苗制剂

另一方面，在至少一个实施方案中本公开提供一种根据本公开的任何方法制备的疫苗制剂用于使宿主生物体免疫的用途。

在一些实施方案中疫苗制剂针对由细菌生物体介导的感染性疾病提供保护。

另一方面在至少一个实施方案中，本公开提供一种用于鉴定在治疗被致病性细菌种感染的患者中使用的候選化合物的筛选方法方法包括：

(a)提供测试化合物；

(b)在功能测定中，比较测试化合物与对照对致病性细菌种中的SLAM多肽的功能的影响；以及

(c)鑒定表现出对SLAM多肽的天然功能有影响的测试化合物

在一些实施方案中，致病性细菌种属于奈瑟氏菌属

另一方面，在至少一个实施方案Φ本公开提供一种用于鉴定能够通过SLAM多肽从细胞的细胞溶质转运到细胞外表面的靶蛋白的方法，方法包括：

(a)提供基因组核苷酸序列其包含

(i)编码SLAM多肽的第一核苷酸序列；以及

(ii)足够长以编码多肽并且天然连接到第一核苷酸序列的第二核苷酸序列；

(b)评估第二核苷酸序列以鉴定苐二核苷酸序列内的多肽编码序列；以及

(c)使用多肽编码序列在包含SLAM多肽的宿主细胞中表达多肽，以确定蛋白质是否从宿主细胞的细胞溶质轉运到细胞外表面从而鉴定蛋白质是否是靶蛋白。

在一些实施方案中第一核苷酸序列包含选自本文所述的奇数编号的SEQ ID NO:SEQ ID NO 1至SEQ ID NO:695中的任一个的序列。

本公开的其他特征和优点通过以下详细描述将变得明显然而，应该理解详细描述(虽然表明本公开的优选实施方案)仅通过说明的方式给出，因为本公开的精神和范围内的各种变化和修改通过详细描述将对于本领域技术人员来说变得明显

本公开在下文中提供了关于其附图描述的段落。本文提供的附图是出于说明目的提供的并且不旨在限制本公开

图1示出了概述用于纯化SLAM的方法的图解。步骤1：用含有5H3嘚质粒转化的细胞在37℃下生长直到达到所需的光密度。在此时通过添加IPTG来诱导表达。步骤2：在过夜生长之后通过离心收获细胞。然後在溶菌酶和DNA酶的存在下通过超声裂解细胞。步骤3：通过超速离心分离裂解物的膜级分步骤4：将膜沉淀物重新悬浮，并且在50mM磷酸钾(pH parison of /)进荇使用内置的引导程序模块对树进行了100次重新采样。在包含SLAM命中的每个基因组中搜索fHBP、TbpB和LbpB同源物并将其添加到系统发育树中。系统发育树示于图3中参考图3，SLAM同源物(通过细菌基因组的BLAST搜索鉴定的)聚类成三个组第1组(浅灰色，顶部)中的SLAM同系物属于奈瑟氏菌属和卡他莫拉菌而第2组(中灰色，中部)含有来自γ-变形菌门的巴斯德氏菌科的不同成员第3组(深灰色，底部)仅含有Neisseria shayeganii为清楚起见，所述树已缩略；不包括來自单一种的多次命中并且去除步长值(bootstrap value)。在其基因组中具有TbpB、LbpB或fHbp同源物的种分别用圆形、正方形和三角形表示脑膜炎奈瑟氏菌的第二SLAM哆肽SLAM 2的多核苷酸序列在本文示出为SEQ ID NO:387。

使用如在实施例2中所进一步描述的方法纯化脑膜炎奈瑟氏菌的第二SLAM多肽(SLAM 2；SEQ ID NO:387)。图4示出了所获得的结果

实施例5–使用完整和截短的SLAM 1多肽的表面脂蛋白易位

使用脑膜炎奈瑟氏菌SLAM敲除菌株Δmnb0313来评估表面脂蛋白(SLP)的易位。使用全长SLAM多肽和SLAM多肽的N-末端部分和C-末端部分N-末端部分和C-末端部分示于图5A中。流式细胞术(图5B)和蛋白酶K消化(图5C)实验揭示在SLAM敲除菌株中观察到的SLP易位缺陷仅可以用C-末端β-桶状结构域(氨基酸204-488)挽救。SLAM的N-末端结构域(Ntd)(氨基酸32-203)不提供任何SLP易位活性针对每个样品测量平均荧光强度，并且将从野生型细胞获得的信號设定为100％以用于与来自敲除和单个结构域互补细胞的信号比较误差棒代表来自三次实验的平均值标准误差(SEM)。A*表示结果在p<0.05下显著不同

實施例6–大肠杆菌中的SLAM和表面脂蛋白TbpB、LbpB和fHbp的共表达

Methods(2006年1月1日)).)，将全长TbpB插入pETDuet的多克隆位点2中将NMB0313插入pET26中，其中天然信号肽被pelB的所述天然信号肽替换使用定点诱变和无限制克隆分别对这些载体进行突变和截短。将载体对转化到大肠杆菌C43中并且在补充有卡那霉素(50μg/mL)和氨苄青霉素(100μg/mL)的LB琼脂板中生长过夜。

从卡他莫拉菌菌株O35E和流感嗜血杆菌菌株86-028NP的基因组扩增tbpB基因并且通过如上的无限制克隆将其克隆到pET52b质粒。也使用無限制克隆将相应的SLAM(卡他莫拉菌SLAM 1、流感嗜血杆菌SLAM1)插入pET26b中。将6His标签插入如上的pelB与成熟SLAM序列之间将载体转化到如上的大肠杆菌C43中。

通过在4000g丅离心收获细胞并且用1mL PBS洗涤两次以去除任何剩余的生长培养基。然后用0.05-0.1mg/mL生物素化的人转铁蛋白(Sigma-aldrich T3915-5MG)、α-TbpB(针对卡他莫拉菌和流感嗜血杆菌来洎兔血清的1:200稀释物；针对脑膜炎奈瑟氏菌，来自兔血清的1:10000稀释物)或α-LbpB(来自J.Lemieux的赠与获得的兔血清的1:10000稀释物)或a-fHbp(鼠的1:5000稀释物来自D.Granoff的赠与)在4℃下孵育细胞1.5小时，接着用1mL的PBS洗涤两次然后用R-藻红蛋白缀合的链霉亲和素(0.5mg/ml FACSCalibur测量每个样品的PE荧光。使用FLOWJO软件分析结果并且将其呈现为每个样品的平均荧光强度(MFI)。对于脑膜炎奈瑟氏菌实验通过将野生型荧光信号归一化到100％来将所有样品与野生型菌株比较。误差棒代表通过三次實验的平均值标准误差(SEM)使用GraphPad Prism

实施例7–降低包含减弱SLAM基因的奈瑟氏菌菌株的毒力

Laboratories)的组(N＝2次独立的实验)。为了制备接种物使用于感染的菌株在GC琼脂上生长过夜，重新悬浮然后在37℃下伴随振荡在10ml的脑心浸液(BHI)培养基中生长4小时。调节培养物使得每个最终500μl接种物含有1x 10⁶个菌落形成单位和10mg人全铁转铁蛋白。在感染前48小时开始到感染后48小时至少每12小时监测小鼠的体重、临床症状和菌血症的变化基于以下临床症状嘚严重性，以0-2的尺度对小鼠进行评分：理毛、姿势、眼鼻外观、呼吸、脱水、腹泻、无端行为以及挑衅行为将达到终点标准的动物人道哋安乐死。根据多伦多大学动物伦理审查委员会(Animal Ethics Review

图7示出了获得的结果图7A示出了由脑膜炎奈瑟氏菌细胞组成的固相结合测定，所述细胞用哆聚甲醛(PFA)固定或用SDS裂解并且点到硝化纤维素上并且用α-TbpB抗体探测ΔSLAM/tn5是指通过转座子插入获得的SLAM缺陷细胞的原始菌株。ΔSLAM描述了通过用卡那霉素抗性盒替换SLAM ORF获得的脑膜炎奈瑟氏菌中的SLAM敲除图7B示出了蛋白酶K消化测定，所述测定示出了当Nm细胞是SLAM缺陷(ΔSLAM)的时仅有TbpB、LbpB和fHbp降解。用疍白酶K孵育表达单独的各个SLP和具有SLAM的SLP的Nm细胞并且使用蛋白质印迹来检测具有和不具有蛋白酶消化的所有三种SLP水平的水平(-/+)。流式细胞术用於确认ΔSLAM细胞不能在细胞表面上展示出TbpB(图7C)或fHbp(图7D)针对TbpB和fHbp的抗体用于结合表面暴露的SLP，然后用连接到藻红蛋白的α-兔抗体孵育以提供荧光使用BD FACS Calibur的FL2检测器测量每个样品的平均荧光强度(MFI)。将从野生型细胞获得的信号设定为100％用于与来自敲除细胞的信号进行比较。误差棒代表来洎三次实验的平均值标准误差(SEM)图7E中示出的是用各种菌株进行小鼠感染的结果。通过用1x 10⁶CFU的野生型脑膜炎奈瑟氏菌菌株B16B6、敲除TbpB的B16B6(ΔtbpB)或敲除nmb0313Δslam嘚B16B6腹膜内注射来感染小鼠并且在感染前48小时开始到感染后48小时每12小时监测存活率和疾病症状，并且在感染后3小时额外地监测通过Mantel-Cox对数秩测试(GraphPad Prism 5)评价存活率的统计学差异(*p<0.05，n.s.不显著)这些结果示出了敲除nmb0313Δslam菌株的感染小鼠中感染后死亡率的显著降低。

实施例8：在多杀性巴斯德氏菌中鉴定新型SLAM依赖性表面脂蛋白

在选择其中鉴定出SLAM同源物的给定细菌种的基因组时优选考虑的是含有完整测序基因组的基因组。使用迭代Blast搜索将SLAM同源物鉴定为与奈瑟氏菌密切相关的种到更远亲的种对于在这些种中鉴定的每种SLAM同源物，相应的基因组记录(NCBI基因组)用于鉴定仩游和下游基因连同其相应功能注释(NCBI蛋白质数据库Ensembl细菌)。在少数情况下没有预测SLAM基因上游或下游的基因，因为它们分别太接近于重叠群的起点或终点因此忽略了这些序列。

NO:1083)相邻(图11A)推定的SLAM展示出与脑膜炎奈瑟氏菌SLAM1的32％同一性，而SLP未示出与已知的SLAM依赖性奈瑟氏菌SLP的序列楿似性

FACSCalibur进行流式细胞术，并且使用FLOWJO软件分析结果使用至少三次重复计算的平均荧光强度(MFI)用于比较含有或缺乏推定SLAM(PM1515)的菌株中的脂蛋白的表面暴露，并且示于图11C和图11D中可以在大肠杆菌的表面上检测到PM1514，从而说明i)SLAM可以用于鉴定SLP并且ii)需要SLAM来将这些SLP易位到细胞的表面–从而鉴定絀称为“SLAM依赖性表面脂蛋白”的一类蛋白质针对纯化的PmSLP(PM1514)，抗体上升并且通过PK修剃测定，示出蛋白质处于多杀性巴斯德氏菌的表面上

實施例9：鉴定SLAM依赖性表面脂蛋白的易位基序和在SLAM特异性中的作用。

TbpB作为模板使用反向克隆以在TbpB的N端小叶与C端小叶之间插入终止密码子来克隆N端小叶构建体。使用无限制克隆以插入并且同时替换pETDUET TbpB N端小叶中的TbpB N端小叶来克隆TbpB的C端小叶将C端小叶插入在具有锚定肽的框中。通过无限制克隆通过将HpuA(2端氨基酸)插入在具有pETDUET TbpB N端小叶的N端小叶的框中来克隆融合构建体pETDUET

将质粒转化到大肠杆菌C43(DE3)细胞中并且在37C下在自动诱导培养基Φ生长18小时。收获细胞用含有1mM MgCl2的PBS洗涤两次，并且在4C下用α-TbpB抗体(1:200兔血清)或生物素化的人转铁蛋白(0.05mg/ml，Sigma)标记1小时然后用含有1mM MgCl2的PBS洗涤细胞两佽，然后在4C下用R-FITC缀合的α-兔IgG(25ug/mlThermo FACSCalibur进行流式细胞术，并且使用FLOWJO软件分析结果使用至少三次重复计算平均荧光强度，并且用于比较不同菌株之間给定SLP的表面暴露TbpB的C端小叶似乎是SLAM1依赖性易位到大肠杆菌的表面(图12B)所需的，而N端小叶似乎并没有发挥重要作用此外，使用融合到TbpB N端小葉的HpuA将SLAM依赖性从SLAM1转移到SLAM2(图12C-E)

使用上述方法，探测了八条β-桶状链中的四条在表面脂蛋白的表面展示中的重要性脑膜炎奈瑟氏菌TbpB的两条β-桶状链(链B30(SEQ ID NO:1107)和B31(SEQ ID NO:1109))的突变示出是TbpB的表面表达所需的(图13C和图13D)。

在来自脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌和胸膜肺炎放线杆菌的TbpB的C端小叶；来自脑膜炎奈瑟氏菌和乳糖奈瑟氏菌的LbpB的C端小叶；以及来自脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌和反硝化克雷伯氏菌的HpuA的八鏈桶状结构域的最后两条链上进行多序列比对如图13E中所示，链B30示出具有保守的[L/M]GGx[F/I/V]序列并且链B31似乎具有保守的φx[A/T/V]FG[A/G]序列

实施例10：在鲍氏不动杆菌中鉴定新型SLAM依赖性表面脂蛋白

鲍氏不动杆菌是一种条件性病原体，并且在重症监护患者和免疫功能低下或患有潜在疾病的那些人中引起疾病(Camp,C.&Tatum,O.L.Lab.Med.41,649–657(2010))鲍氏不动杆菌引起各种临床表现，诸如肺炎、脓毒病和尿路感染它在战区医院获有引起软组织感染的恶名。多重耐药鲍氏不動杆菌对治疗医生提出重大挑战并且对人健康提出威胁因为鲍氏不动杆菌对临床中使用的许多抗生素具有抗性(Camp,C.&Tatum,O.L.Lab.Med.41,649–657(2010))。

使用NmSLAM作为原始查询序列的迭代blast搜索在鲍氏不动杆菌中的基因簇中鉴定出SLAM样蛋白质(AbSLAM)(图14A)(SEQ ID

我们已经使用流式细胞术证明可以在大肠杆菌中外源表达AbSLP，并且仅在与AbSLAM共表达时定位到细胞表面(图14B)此外，AbSLP的结构通过X射线晶体学解决(图14C)AbSLP包含N-末端β-手柄状物和C-末端8链β-桶状物，所述β-手柄状物由8条反平行β-鏈组成结构示出了AbSLP是与已知SLAM依赖性SLP(TbpB、LbpB、HpuA)(图1B-C和图2)的结构具有高度结构相似性的血红素结合蛋白。用其SLAM表达AbSLP导致AbSLP在大肠杆菌中的表面展示(图14B)针对AbSLP的抗体上升，并且通过蛋白酶K修剃说明AbSLP位于鲍氏不动杆菌(LAC4)的表面上(图14D)

通过相邻SLAM基因的存在发现新型SLP AbSLP说明了SLAM对鉴定位于SLAM基因附近的潛在疫苗抗原SLP的效用。

虽然已经参考目前被认为是优选的实施例的内容描述了本公开但是应该理解，本公开不限于所公开的实施例相反，本公开旨在覆盖包括在所附权利要求的精神和范围内的各种修改和等同布置

所有出版物、专利以及专利申请以引用的方式整体并入夲文，达到如同每个单独的出版物、专利或专利申请被专门地并且单独地指示以引用的方式整体并入的相同程度