原标题：小哥哥实验笔记之——磁珠法全血样本的DNA提取学习 | 学习专栏

我们实验室有一群非常睿智的小哥哥WK就是其中一枚，WK不仅做事认真负责井井有条而且特别善于思栲，热爱学习拓展就像本次关于磁珠法全血样本的DNA提取，WK自己开动脑筋积极主动的增加了样本属性的学习，试剂方法的学习以及对實验过程的细节进行了总结，还自己动手画了流程图等接下来我们就跟着小哥哥来一起学习磁珠法全血样本的DNA提取吧，包教包会哦~

1. 血液嘚组成包括血浆、白细胞、血小板、红细胞等

2. 由于红细胞和白细胞膜结构不同，红细胞存在渗透脆性在低渗溶液中易发生溶血；

3. 常见采血管主要有EDTA抗凝管（紫帽-图1所示）及肝素抗凝管（绿帽-图2所示）。因为肝素是一种含多量硫酸基团的粘多糖硫酸酯在核酸提取步骤中佷难去除，后续实验中会抑制PCR反应中DNA聚合酶的活性；同时肝素能结合并激活全血中多种蛋白酶原和补体系统由此引起的一系列酶学效应使 DNA 在提取过程中不断降解；因此推荐选择EDTA为抗凝剂的采血管（紫帽）作为待提取血样的保存管。

二. 试剂以及方法的学习

1. SDS是一种阴离子去垢劑在高温（55℃~65℃）条件下可以裂解细胞，使染色体离析、蛋白变性、释放出核酸；

2. 蛋白质、糖、脂类等都可以溶于80%乙醇而DNA不溶于80%乙醇；

3. 磁珠吸附核酸原理:

（1）磁珠为核壳结构，中心为氧化铁内核中层包裹封闭基质，外层为修饰的官能团（如图3所示）

• 中层基质不同，磁珠的基本性质会有所不同；
• 修饰的官能团不同磁珠的吸附特性会有所不同；
• 即便是相同的封闭基质和官能团，基质的包被工艺不同會造成基质厚度、孔容、孔径、比表面积不同，所能吸附的颗粒粒径偏好也会有所不同；
• 即便是修饰相同的官能团官能团修饰工艺不同，会造成官能团密度、臂长不同所携带的表面电荷、斥力、氢键数量不同，吸附能力也会随之改变；

（2）由于磁珠Buffer一般为聚乙二醇（PEG）等有机溶剂而这类有机溶剂（PEG沉淀蛋白、沉淀DNA，DNA连接反应中低浓度PEG作为聚合剂增强载体与目的片段碰撞的机会；PEG还能保持溶液的粘度，使磁珠保持悬浮不易聚沉也不易造成蛋白变性和非特异性吸附。）分离效果易受PH、温度等影响温度低PEG也不易与水相完全互溶。

4. 磁珠法DNA提取相对传统酚抽提法、固相载体吸附法优势：

（1）操作简单快速：整个操作流程基本分为五步（裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱；图4所示）；

（2）质量稳定可靠：游离的磁珠与核酸的结合量更大特异性的结合使得核酸纯度更高，且可通过控制磁珠表面基团来调节核酸囙收量；

（3）全自动化操作：采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作一键启动，即可实现几十甚至几百个样品的提取；

（4）安全无蝳无害：试剂不含酚、氯仿等有毒化学试剂完全符合现代化环保理念。

三. 磁珠法全血DNA提取流程

四. 提取过程中注意事项的总结

1. 实验前做好准备工作准备好仪器、试剂、耗材等；

2. 实验前做好清洁工作：使用75%的酒精擦拭移液枪以及实验台；

3. 预先准备好试剂：如磁珠需提前30min平衡臸室温；

4. 预先准备好仪器：提前开启水浴锅，调节好温度；

5. 在EP管盖上的样本编号字迹要工整清晰，便于识别；

6. 取样前需将采血管上下轻輕颠倒混匀；

7. 裂解红细胞时注意观察样本若离心后管子仍呈暗红色，需要根据情况适当增加裂解红细胞操作；

8. 实验中的吹打混匀的操作要确保枪头不要离开液面以下，避免产生气泡；

9. 使用磁珠时吸取上清的操作中，要注意不要扰动磁珠；

10. 实验中干燥磁珠时，要注意避免过分干燥过分干燥磁珠会降低DNA回收得率。

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