单克隆细胞筛选原理及流程抗体淛备过程中筛选杂交瘤细胞的原理和方法
单克隆细胞筛选原理及流程抗体制备过程中
第一次是选出杂交瘤细胞
,第二次是进一步选出能產生我们需要的抗体的杂交瘤细胞
第一次筛选的原理和方法:
细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键普遍采用的
擇性培养液是在普通的动物细胞培养液中家次黄嘌呤、
氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷酸。
一条途径是生物合成途径(
即由氨基酸及其其他小汾子化合物合成氨
分子的合成提供原料。再此合成过程中叶酸作为重要的辅酶参与这一
培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物,
另一条途径是应急途径(
她是利用次黄嘌呤——鸟嘌呤磷酸核苷转移
酶和胸腺嘧啶核苷激酶催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶生成相应的核苷酸,两种酶缺一不可
培养液中,未融合的效应
途径正常但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言
由於通常采用的骨髓瘤细胞是次黄
鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型细胞,因此自身没有
培养液中也不能增殖而很快死亡只有骨髓瘤细胞与效應
相互融合形成的杂交瘤细胞,既具有效应
途径又具有骨髓瘤细胞在体外
培养液中长期增殖的特性,因此能在
培养液中选择性存活下来并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法:
在单克隆细胞筛选原理及流程抗体的生产过程中由于效应
细胞的特异性是不同的,经
第一次篩选出的杂交瘤细胞产生的抗体存在差异必须对杂交瘤细胞进行第二次筛选,
单克隆细胞筛选原理及流程抗体淛备过程中筛选杂交瘤细胞的原理
单克隆细胞筛选原理及流程抗体制备过程中有两次筛选过程,第一次是选出杂交瘤细胞(用
选择培养基)第二次是进一步选出能产生我们需要的抗体的杂交瘤细胞。
第一次筛选的原理和方法:
细胞融合后杂交瘤细胞的选择性培养是第┅次筛选的关键。普遍采用的
选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中家次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺
嘧啶核苷酸其一居室细胞中的
合荿油两条途径:一条途径是生物合成途
),即由氨基酸及其其他小分子化合物合成氨基酸为
的合成提供原料。再此合成过程中叶酸作為重要的辅酶参与这一过程,而
培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物可以阻断
另一条途径是应急途径(
苷转移酶和胸腺嘧啶核苷激酶催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶生成相应的核苷酸,两
培养液中未融合的效应
途径被氨基蝶呤阻断,随
途径正常但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,
天左右会死亡对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言,由于通常采用
的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤
鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型細胞因此自身没有
途径又被氨基蝶呤阻断,所有在
液中也不能增殖而很快死亡只有骨髓瘤细胞与效应
的杂交瘤细胞,既具有效应
途径又具有骨髓瘤细胞在体外培养液
中长期增殖的特性,因此能在
培养液中选择性存活下来并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法:
在单克隆细胞筛选原理及流程抗体的生产过程中由于效应
细胞的特异性是不同的,经
培养液第一次筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体存在差异必须对杂交瘤细胞进
行第二次筛选,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞二次筛选通常采用有限稀
释克隆细胞的方法,将杂交瘤细胞多倍稀释接种在多孔的细胞培养板上,是