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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2021-07-09 20:37 标签：

?可以从稀有转录本中获得单个特异性产物

?选择真信息的 5' 和/或 3' 端

?高效—对所有酶促反应进行优化以确保检测到极少的 mRNA

不受影响。然后用烟草酸焦磷酸酶 (TAP) 处理 RNA以去除全长 mRNA 中的帽结构，留下 5'-单磷酸一个合成 RNA 接头连接至 RNA 群—（仅含有 5'-磷酸盐的分子），未加帽的全长 mRNA 将接受接头然后，进行随机引物标記、逆转录反应和巢式 PCR 以扩增特定转录本的 5' 端

接头。还包括逆转录试剂每个试剂盒都包含用于测试试剂盒性能的对照 RNA 和引物以及详细嘚说明手册。SuperTaq? Thermostable Taq DNA 聚合酶可单独购买对于 ≥1 kb 片段的最佳扩增，请使用 SuperTaq-Plus还包括用于 3' RACE 的 3' RACE 接头和引物。

cDNA 文库和文库构建

以下组件应储存在 –20°C 丅：

可在任何温度下储存无核酸酶水


掌握合成双链cDNA的RLM-RACE技术可构建高質量的cDNA文库。

1. MDF-192型超低温冰箱日本三洋电机株式会社；

13. XK96-B微型旋涡混合仪，江苏省姜堰市新康仪器厂

















































以反转录第一链cDNA为模板，按以下组分建立PCR反应体系：









充分混匀，按以下程序进行PCR扩增：95℃热变性2 min迅速加入高保真酶，再94℃变性2 min进入循环94℃变性30  秒，65℃退火30秒68℃延伸2 min，25個循环后于68℃继续延伸10 min扩增产物以琼脂糖凝胶电泳检测，置于-20℃保存备用

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