病理技术中的特殊然色法网染步骤及中国试剂网

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2014-10-22 04:09 标签： 学法网
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巴氏染色的步骤
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&请教各位老师巴氏染色的步骤及染液，购买哪家的好。
在学习中进步，在实践中升华。
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巴氏染色法1．试剂配制
（1）Harris苏木素液（同常规组织染色）&&& （2）橙黄-G6液：取橙黄-G6&0.5g，溶于95%酒精100ml中，加磷钨酸15mg。
（3）EA36液：
先配制原液（贮备液）：
①亮绿液：亮绿0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加无水酒精至100ml。
②俾士麦棕液：俾士麦棕0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加无水酒精至100ml。
③伊红Y液：伊红Y0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水酒精至100ml。
临用前，将上述亮绿液45ml，伊红Y液45ml，俾士麦棕液10ml混合后，再加入磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。
也可配制EA50液：
3%亮绿水溶液10ml&纯甲醛250ml
20%伊红Y水溶液20ml&&冰醋酸20ml
磷钨酸2g（水溶后加入）&95%酒精700ml
2．染色步骤
（1）将固定后的涂片入水、苏木素染核、盐酸酒精分化、返蓝同HE染色。&& （2）70%、80%、95%酒精逐级脱水各1分钟。&& （3）橙黄G6&3-5分钟。&& （4）95%酒精Ⅰ、Ⅱ缸洗各1分钟。&& （5）EA36或EA50液5分钟。&& （6）95%酒精Ⅰ、Ⅱ缸洗各1分钟。&& （7）无水酒精Ⅰ、Ⅱ缸洗各1分钟。&& （8）二甲苯Ⅰ、Ⅱ缸透明各1分钟。&& （9）中性树胶封固。3．染色结果：细胞核为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质为绿色；表层不全角化细胞胞质为粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色；高分化鳞癌细胞为粉红色或桔黄色；腺癌细胞质呈灰蓝色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞为粉红色，粘液为淡蓝色或粉红色。
（本观点纯属本人意见！仅供参考！本人QQ:）
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2 楼 &&&发表于 13:21:00|
上述为手工配制，如果购买，可以和试剂厂家联系买现成的染液，其实都差不多！
（本观点纯属本人意见！仅供参考！本人QQ:）
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受益非浅，谢谢分享
互相学习，望多多指教
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　　【摘要】随着基础医学、影像学、生物学以及临床诊疗技术的发展，人们对肝脏病的认识越来越深入，肝脏病理学的作用日益突出，它在肝脏病理检测、诊疗方面起到积极作用。迄今为止，特殊染色在肝脏活检病理中的作用越来越突出，是最为重要的创伤性检测手段，对肝脏疾病的诊断以及诊疗有着重要意义。本文回顾性的分析了某医院肝脏活检病理诊断中特殊染色的应用方法，阐述了特殊染色发的适应症与用途。
　　【关键词】肝脏疾病& 特殊染色& 免疫组化技术& 分子生物学
　　【中图分类号】R446&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文献标识码】A&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文章编号】（8-02
　　近几年来，免疫组化技术和分子病理学技术越来越成熟，特殊染色技术在日常病理诊断中的作用日益突出。许多的特殊染色被广泛的应用在肝组织染色，如活检、肝移植、肝切除等手术中对于特殊染色的要求十分严格，采用这种诊断技术能有效的提高诊疗准确性，为治疗工作的开展提供可靠的理论基础。
　　1、肝组织标本特殊染色的选择
　　免疫技术、分子生物学技术在基础医学和临床诊疗中的作用日益明显，在各种基础疾病的诊断、治疗中的地位不断提高。但是传统的诊断及时和诊疗方法仍然占据着重要地位，在日常病例诊断中的作用十分明显，其中以特殊染色检验的效果最为明显。
　　在某医院肝胆外科的医疗工作中，肝活检工作以常规染色为主，是以石蜡切片和HE染色共同组成的。在选择中，除了选用肝活检标本之外，还对肝脏移植、部分肝切除标本也进行了研究，用特殊然色谱进行肝活检标本的病理诊断。
　　在肝移植中，常用的移植肝脏为肝硬化肝脏，这种肝脏诊断通常使用一系列染色进行分析，不仅对肝硬化的外在特征做简单分析，还要明确肝硬化特征、病因。此外，利用一系列染色诊断法还能检查出肝脏的其他病症以及病理变化。如果肿瘤因为肝细胞癌而引起的，则网状纤维色不仅能够显示出这些硬化部位，也能造成肿瘤缺乏网状纤维的特点。对于以肝脏标本诊断中所采用的尺检技术，在应用的时候通常都是在特定病例的基础上，根据染色体的数量来明确分析相关控制理念，并且对其中的肝硬化、肝病变情况进行深入研究，深入统计了各种病症的变异情况，从而给肝功能异常变化做出明确的记录，为临床医师提供科学、可靠的治疗依据。
　　2、特殊染色在诊断中的应用情况
　　通过多年的工作实践分析总结得出，在工作的过程中，特殊染色的应用至关重要，是解决肝脏日常诊断问题的关键。目前，常见的特殊染色诊断技术主要包含了三色染色技术和网状纤维结缔组织技术，在组织应用中明确肝脏功能，并且将其中发生变异的部位加以表明。
　　2.1三色染色技术的应用
　　三色染色技术是最为常见的特殊染色诊断技术，它在应用的过程中，是将原纤维染色成为蓝色或者绿色，将肌纤维染成红色，上皮组织染成淡红色，从而根据这些颜色分布规律来分析整个肝脏变异情况。对于慢性肝炎以及肝硬化患者而言，在诊断中，纤维化程度的探讨十分明确，它对动脉结构的研究也有着至关重要的意义。在目前的研究当中，我们可以通过分析纤维病变、纤维化解程度、细胞质浸润程度来分析整个染色技术的应用效果，从而将这些效果进行科学统计，详细分析其中的相关问题。
　　根据多年实践总结得出，这些染色问题的出现不仅存在着暗灰色和蓝色，甚至在多数情况下还可能以淡红色出现。因此在工作的时候我们要明确抗原体的包涵体，并细胞蛋白酶颗粒、酒精等情况进行详细的归纳和总结。在这种染色体条件下，我们可以将神经束给予前期分析和控制，从这些环节中分析出染色技术的优势。
　　2.2网状染色技术的应用
　　网状纤维是非常细而短的纤维，大量堆积时则形成致密的网状，故有网状纤维之称。疏松组织中网状纤维比较少，它多分布在结缔组织与其它组织交界处，如在上皮组织与结缔组织交界处的基膜内，毛细血管周围以及造血器官，内分泌腺的腺细胞团索和外分泌腺的腺末房周围等处均有丰富的网状纤维。
　　网状纤维的变化，反映了疾病的发生和发展的不同过程，对疾病的诊断有极大意义。网状纤维的多少、粗细紧密、疏松或断裂，都是病理检验的重要指标，尤其是在临床病理诊断中，可根据其存在和分布来鉴别癌与肉瘤。而在HE染色标本上，网状纤维不易显色。所以网状纤维的组织化学染色，在临床病理诊断上占着相当重要的位置。网状纤维是正常肝细胞与肝窦的主要支架，其变化能反映肝病变的网状支架形态，根据网状纤维分布特点和破坏情况，可以判断病变性质、程度和转归、 特别是增生病变、肿瘤及纤维化程度。肝网状纤维的塌陷和浓缩可预示肝实质的丢失，在急性肝炎、长时间缺血辕再灌注损伤或肝中央带药物毒性可出现在小叶中央区。显著塌陷常是融合性坏死，如肝桥接坏死、 多小叶坏死和亚大块坏死的特征。肝硬化针刺活检标本的圆形或结节成分仅见少量网状纤维。
　　网状纤维染色也可定期评估非肝硬化门脉高压症的进程，证明先天性门脉高压已经存在的纤维化或结节再生性增生中无纤维的再生结节，区分间质胶原和炎细胞，也可勾画出门管区和门管周胆管的轮廓。网状纤维染色在区别癌和肉瘤以及血管源性肿瘤中亦有很大帮助，在上皮性肿瘤中网状纤维围绕癌巢分布；在肉瘤中网状纤维围绕单个瘤细胞分布；在血管肉瘤和上皮样血管肉瘤中，瘤细胞位于网状纤维包绕的血管腔内，而瘤细胞之间无网状纤维；在血管外皮瘤中，瘤细胞位于网状纤维包绕的血管外侧，网状纤维在瘤细胞之间呈放射状分布。
　　3、其他组织化学染色的应用
　　在日常肝脏病理诊断中也可能偶然需要应用一些其他的特殊染色。显示胆色素常用Hall染色法，将胆色素染成墨绿色，在慢性病毒性肝炎、 慢性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎以及药物性肝损伤等情况下，肝细胞或毛细胆管内的胆色素增多，胆汁淤积的范围反映了病变严重程度。肝细胞腺瘤和HCC通常含有胆色素，而肝内胆管癌和非肝细胞性肿瘤则无，据此可以通过胆汁染色帮助鉴别。
　　4、 结语
　　综上所述，自19世纪70年代末期免疫组化和随后的分子病理学技术的发展，大部分特殊染色被其他相关免疫染色技术所替代，但仍有一些染色方法在原来基础上经过不断改良、创新和完善后逐渐形成其他技术难以替代的染色方法。可以说，无论现代病理学技术发展和应用程度如何，但特殊染色具有定性准确、方法简单、结果可靠的特点，仍占有其他技术不可替代的重要地位，应选择性的加以应用并不断完善。
　　参考文献
　　[1] 龙卫国,吴建农.纤维板层型肝细胞癌的临床及病理研究进展[J]. 临床与实验病理学杂志. 2011(07)
　　[2] 张红雷,王跃,王泰龄.网状纤维和Masson三色套染法在肝病理诊断中的应用[J]. 诊断病理学杂志. 2011(02)
　　[3] 张晶,李美蓉,王泰龄.& 肝组织学检查常用的特殊染色及免疫组化染色[J]. 诊断病理学杂志. 2001(03)
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