甲醛滴定法为什么不能测定多种邻氨基苯甲醛酸的邻氨基苯甲醛氮

甲醛滴定法测定氨基酸含量_百度文库
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甲醛滴定法测定氨基酸含量|甲​醛​滴​定​法​测​定​氨​基​酸​含​量
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在某一PH的溶液中氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等成为兼性离子呈电中性此时的溶液ph称该氨基酸的等电点
isoeletric point pI
2氨基酸静电荷为零时的pH值
3是在碱性溶液中表现出带在酸性溶液中表现出带在某一定pH溶液中所带的和相等时的pH,称为该的1对于侧链R基不解离得中性氨基酸来说pI=1/2pKa1+PKa2
2对于有多个解离基团的氨基酸来说只要写出它的解离公式然后取等电兼性离子两边的pKa的平均值则得出其pI值pI=1/2pKa左+PKa右
注pI值与该离子浓度基本无关只取决于等电中性离子A0两侧的pK值1氨基酸的甲醛滴定formal titration氨基酸虽然是一种两性电解质即是酸性又是碱性但它却不能直接用酸碱滴定来进行测量这是因为氨基酸的酸碱滴定的等电点pH过高12-13或是过低1-2没有适合的指示剂可备选用而向氨基酸中加入过量的甲醛用氢氧化钠滴定时由于甲醛可与氨基酸上的N+H3结合形成NHCH2OHN(CH2OH)2等羟甲基衍生物而降低了氨基酸的碱性相对增强了N+H3的解离使滴定终点移到了pH9附近在酚酞指示剂的变色区域内能够用酚酞作为指示剂进行滴定
以上出自生物化学 2006.5王镜岩等主编甲醛滴定法测定氨基酸含量
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
水溶液中的氨基酸为兼性离子因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基甲醛可与氨基酸上的N+H3结合形成NHCH2OHN(CH2OH)2 等羟甲基衍生物使N+H3上的H+游离出来这样就可以用碱滴定N+H3放出H+测出氨基氮从而计算氨基酸的含量
若样品中只含有单一的已知氨基酸则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量若样品中含有多种氨基酸如蛋白质水解液测不能由此法算出氨基酸的含量
脯氨酸与甲醛作用后生成的化合物不稳定导致滴定后结果偏低酪氨酸含酚基结构导致滴定结果偏高
材料试剂与器具
10.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中
20.05%溴麝香草酚蓝溶液
取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中
31%甘氨酸溶液
取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水
4标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液
5中性甲本醛溶液
取甲醛溶液50ml加0.5%酚酞指示剂约3ml滴加0.1mol/LnaOH溶液使溶液呈微粉红色临用前中和
二实验器具
2碱式滴定管
移液管洗耳球
8玻棒与烧杯1取3只100ml锥形瓶按下表加入试剂
锥形瓶编号
1%甘氨酸溶液或样品ml
中性甲醛溶液ml
0.05%溴麝香草酚蓝溶液滴
0.5%酚酞乙醇溶液滴
2混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色pH8.7~9.0
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积ml
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积ml
1.4008 为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量mg利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度随着蛋白质水解度的增加滴定值也增加当蛋白质水解完成后滴定值不再增加甘氨酸5.97
丙氨酸6.00
缬氨酸5.96
亮氨酸5.98
异亮氨酸6.02
苯丙氨酸5.48
丝氨酸5.68
苏氨酸6.16
酪氨酸5.68
半胱氨酸5.05
蛋氨酸5.74
脯氨酸6.30
色氨酸5.89
赖氨酸9.74
精氨酸10.76
组氨酸7.59
门冬氨酸2.77
谷氨酸3.22
门冬酰胺5.41
谷氨酰胺5.65
出自有机化学 2004.11主编
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