pgex—6pn和kg的换算区别

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2014-12-19 14:53 标签： n和kg的换算
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pgex-6p1|p​g​e​x​-p​1
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【求助】pGEX-6p-1质粒是否由T7和SP6启动
【求助】pGEX-6p-1质粒是否由T7和SP6启动
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这个帖子发布于9年零124天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我拟制备pGEX-6p-1中目的基因的RNA探针，不知该质粒是否由T7和SP6启动。我网上找了几天，包括Amersham公司的网站，都未能找到有关信息。特此向各位战友求助。谢谢！
wayajaa edited on
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pGEXs的map上很清楚地标明是Tac启动子啊？trp-lac启动子，亦称tac启动于。这是一个双启动子，或称杂合启动子。tac启动子是一组由lac和trp启动子人工构建的杂合启动子。由trp启动子加上lac操纵子中的操纵基因、SD顺序融合而成。整个tac启动子受lac阻抑物调控，在lac阻抑物高水平表达的lacIq大肠杆菌苗株中，其转录可被抑制，加入异丙基硫代半乳糖苷(1PTG)可诱导其表达。常用的受体菌株有RB791、XL-1-blue、SB221、JMl09等。
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目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
我想要用大肠杆菌来表达目的蛋白，在构建到T载上并测序正确之后，想构建到表达载体pGEX-6p-1上，空载体和目的基因双酶切后电泳回收，条带位置都正确，我的目的基因是900bp。在连接转化DH5a后涂平板，菌斑也长出来了，但挑菌摇菌提质粒后进行双酶切鉴定时发现条带跑的乱七八糟的，无论是载体还是目的基因位置都不对，我做了3次都是这样，也找不出原因，想请教一下高人这是为什么啊？问题出在哪儿了啊？
我的连接体系是：载体：2ul； 目的基因：8ul；solutionI：10ul。连接过夜
在转化时20ul体系全部加入到50ulDH5a感受态中，摇菌2h后进行涂板。
在提完重组质粒后进行双酶切的体系是：重组质粒：8ul； EcoRI:0.5 XhoI: 0.5 10*H Buffer: 1ul.&&酶切1h.
希望各位帮助，感激不尽
楼主的重组质粒质粒质量是否确保没问题？ 应该没问题吧，我提取的其他重组质粒酶切鉴定挺好的，就是这个出不来呢 有先挑菌然后做PCR检测，确定阳性后再抽质粒验证吗？ 是不是目的基因加的太多？:tuzi28:，不是很懂，希望楼主尽早解决问题 原因可能很多，你可以看看连接酶有没有问题，还有就是你的连接比例，一般连接酶的说明书上都有说明，还有就是你的抗生素是不是失效了，最后还可以看看你的平板是不是放太久了，或许你自己还可以发现其他问题的，慢慢来 : Originally posted by 小七咯 at
有先挑菌然后做PCR检测，确定阳性后再抽质粒验证吗？ 这个倒是没有做，可以试试。谢谢提示了！ : Originally posted by liling77ll at
原因可能很多，你可以看看连接酶有没有问题，还有就是你的连接比例，一般连接酶的说明书上都有说明，还有就是你的抗生素是不是失效了，最后还可以看看你的平板是不是放太久了，或许你自己还可以发现其他问题的，慢 ... 这些原因应该都不存在，因为我们同时在做别的蛋白，用的都是一样的东西，都没有问题的~~~ 等待你的结果，希望找出原因:tiger09: 2个载体上的酶切位点呢 : Originally posted by missoulmate at
2个载体上的酶切位点呢 EcoRI和XhoI 可能载体上和目的片段上有没有多个你用的酶 楼主您好，我是南农的，也想用PGEX-6P-1做表达，但是我们实验室没有这个质粒，您能不能提供给我啊，我会付您一定的费用的。谢谢啦，急！ 换BL21作为宿主菌。 酶切两个小时感觉短了吧，时间长点看看效果呢
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