提取胃蛋白酶原离心时温度是多少

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-01-07 02:48 标签： 胃蛋白酶原
丁香客App是丁香园社区的官方应用，聚合了丁香园论坛和丁香客的精彩内容。医生可通过丁香客App浏览论坛，也可以在这个医生群集的关系网络中分享和互动，建立更广泛的学术圈子。
扫描二维码下载
今日：26 | 主题：277648 | & 收藏本版
每发1个新帖可以获得0.5个丁当奖励
【求助】基因组提取过程中溶菌酶和蛋白酶K的最佳作用温度？
【求助】基因组提取过程中溶菌酶和蛋白酶K的最佳作用温度？
分享到哪里？
这个帖子发布于10年零6天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我参看了一些研究论文和版面上面的Protocols，其中关于基因组提取的方法中，凡是用到溶菌酶和蛋白酶K的时候，作用温度大都是37度，为什么溶菌酶不在30度或者28度条件下作用呢？为什么蛋白酶K不在65度条件下作用呢？
heliwowo edited on
回复：【求助】基因组提取过程中溶菌酶和蛋白酶K的最佳作用温度？
分享到哪里？
溶菌酶最佳作用温度是37度，而蛋白酶K在55度-
回复：【求助】基因组提取过程中溶菌酶和蛋白酶K的最佳作用温度？
分享到哪里？
溶菌酶最佳作用温度是30度，37度都是可以的，我个人认为在这之间都没有什么关系，倒是浓度不要太高，否则会对你的DNA有影响。因为我就有过！一般G＋的话，2omg/ml就已经足够了！而蛋白酶K一般在55度。当然如果你用不同试剂盒，譬如Qigen的，它要求在70度消化。其实我觉得55度，65度，70度都可以的。希望各位大侠批评指正！
回复：【求助】基因组提取过程中溶菌酶和蛋白酶K的最佳作用温度？
分享到哪里？
溶菌酶最佳作用温度是37度？溶菌酶最佳作用温度是30度？我感觉是28度。蛋白酶K的活性温度是65度，高于65度活性会降低。
heliwowo edited on
关于丁香园生姜蛋白酶提取工艺- 副本_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
3页1下载券3页1下载券29页4下载券3页¥2.005页1下载券10页7下载券6页1下载券5页免费29页1下载券4页2下载券
喜欢此文档的还喜欢4页2下载券5页免费3页1下载券15页1下载券5页免费
生姜蛋白酶提取工艺- 副本|生​姜​蛋​白​酶​提​取​纯​化​工​艺​研​究​,​采​用​多​种​分​离​纯​化​手​段​对​生​姜​蛋​白​酶​的​提​取​工​艺​进​行​分​析​,​给​从​事​这​一​方​面​研​究​提​供​一​些​数​据​和​经​验​。
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
你可能喜欢 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
生姜蛋白酶的提取
下载积分：2498
内容提示：生姜蛋白酶的提取——均是精品资料，值得下载！,提取,生姜蛋白酶提取,生姜蛋白酶的,生姜蛋白酶,酶的提取,蛋白酶提取,提取蛋白,蛋白酶提取分离,蛋白酶,生姜蛋白酶制备,提取蛋白酶,提取蛋白酶的,蛋白酶的,木瓜蛋白酶提取,生姜提取物,胰蛋白酶,胰蛋白酶的作用,胃蛋白酶,菠萝蛋白酶,糜蛋白酶
文档格式：PDF|
浏览次数：1|
上传日期： 17:12:50|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
下载文档:生姜蛋白酶的提取.PDF
官方公共微信 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
生姜蛋白酶的提取
下载积分：1280
内容提示：生姜蛋白酶的提取——均是精品资料，值得珍藏！
文档格式：PDF|
浏览次数：1|
上传日期： 12:15:45|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
下载文档:生姜蛋白酶的提取.PDF
官方公共微信碧云天的ＲＩＰＡ裂解液提取组织蛋白时需要另外加蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)吗？
01:20:29&&&来源：&&&评论：&&
[碧云天的ＲＩＰＡ裂解液提取组织蛋白时需要另外加蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)吗？] 我准备提取大鼠睾丸，胸腺，肝脏，肾脏等组织的蛋白，打算订碧云天的组织裂解液，有哪位战友用过吗？据说明书上说本身就含有蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)了，但听其他战友说，用的时候还是需要自备蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)PMSF,还请用过的战友赐教！或者推荐其他的裂解液，不胜感激！ 关键词:[蛋白酶抑制剂 裂解液 大鼠 睾丸 肝脏 胸腺 肾脏]…
我准备提取大鼠睾丸，胸腺，肝脏，肾脏等组织的蛋白，打算订碧云天的组织裂解液，有哪位朋友用过吗？据说明书上说本身就含有(protease inhibitor)了，但听其他朋友说，用的时候还是需要自备(protease inhibitor)PMSF,还请用过的朋友赐教！或者推荐其他的裂解液，不胜感激！
我在WB之前还有加PMSF和抑制剂(protease inhibitor)的，如果做磷酸化的蛋白，还要加抑制剂
哦，好的，谢谢，那就是还要另外买PMSF了
来自碧云天网站，呵呵对于组织样品：1.把组织剪切成细小的碎片。 2.融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 3.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度 的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5.充分裂解后，g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用 于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组等的复合物。在不检测和基因组结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
在裂解前3-4分钟加入PMSF,效果不错
恩，好的，谢谢各位朋友，就决定买这个了！
将本文分享到下面的网站：
相关热词搜索：
[碧云天的ＲＩＰＡ裂解液提取组织蛋白时需要另外加蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)吗？]延伸阅读：
频道总排行
频道本月排行

我要回帖

更多关于 胃蛋白酶原 的文章

 

随机推荐