给细菌染色为什么用碱性染料 染色？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-01-19 20:51 标签： 碱性染料染色工艺
细菌的简单染色_百度文库
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细菌的简单染色
革​兰​氏​染​色
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因为碱性染料能与细胞中带正电的组成成分结合，所以，常将其用于细菌染色。(
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因为碱性染料能与细胞中带正电的组成成分结合，所以，常将其用于细菌染色。( & &)
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实验二& 细菌的简单染色与革兰氏染色
一、目的要求
1、学习细菌染色的原理和方法；
2、掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法。
二、基本原理
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
细菌经结晶紫初染染成蓝色。革兰氏染色阳性菌（G+）细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌（G-）细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
三、实验器材
培养12-16h的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichia coli）
2、染色液和试剂
结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红、复红、二甲苯、香柏油
废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜
四、实验方法及步骤
1、简单染色
取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂苏云金杆菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌液。再取
干净载玻片一块将刚制成的苏云金杆菌浓菌液挑2-3环涂在左边制成薄的涂面，将大肠杆菌的浓菌液取2-3环涂在右边制成薄涂面。亦可直接在载玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。
让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干；
手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）；
将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min；
用水洗去涂片上的染色液；
将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干；
先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
2、革兰氏染色
与简单染色涂片相同；
与简单染色法相同；
与简单染色法相同；
（4）结晶紫色染色
将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟；
倾去染色液，用水小心地冲洗；
滴加卢哥氏碘液，媒染1min；
用水洗去碘液；
将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20―25s至流出液无色，立即水洗；
滴加蕃红复染5min；
（10）水洗
用水洗去涂片上的蕃红染色液；
（11）晾干
将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干；
（12）镜检
镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性；
1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定，需要多加练习；
2、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应.
六 实验报告
（1） 绘制简单染色的细菌个体形态图；
（2） 绘制Bacillus thuringiensis和Escherichia coli的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应性。
当对未知菌进行革兰氏染色时，如何保证操作正确及结果可靠？为什么细菌能被染色_百度作业帮
为什么细菌能被染色
为什么细菌能被染色
常用碱性染料进行简单染色,这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色.经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别.常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等.当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色.单染色法_百度百科
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用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。在一般情况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时，必须降低染液的PH值，使其呈现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。
单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。
染色结果依染料不同而不同：
石碳酸复红染色液：着色快，时间短，菌体呈红色。
美兰染色液：着色慢，时间长，效果清晰，菌体呈兰色。
结晶染色液：染色迅速，着色深，菌体呈紫色。

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