【论文】心力衰竭患者血浆脑钠肽和血清基质金属蛋白酶-9的变化_百度文库
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心力衰竭患者血浆脑钠肽和血清基质金属蛋白酶-9的变化
目​的​探​讨​心​力​衰​竭​患​者​血​浆​脑​钠​肽​(​B​N​P​)​和​血​清​基​质​金​属​蛋​白​酶​(​M​M​P​-)​的​变​化​及​其​临​床​意​义​。​方​法​采​用​E​L​I​S​A​法​测​定0​例​心​力​衰​竭​患​者​八​院​第日​清​晨​血​浆​B​N​P​、​M​M​P​-水​平​,​用​心​脏​彩​色​多​普​勒​诊​断​仪​测​定​其​左​室​射​血​分​数​(​L​V​E​F​)​。​测​定0​例​同​期​健​康​体​检​者​作​为​对​照​。​结​果​心​力​衰​竭​患​者​血​中​B​N​P​、​M​M​P​-水​平​明​显​高​于​正​常​对​照​组​,​与​心​功​能​纽​约​分​级​(​N​Y​H​A​)​程​度​呈​正​相​关​,​与​左​室​射​血​分​数​(​L​V​E​F​)
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你可能喜欢血浆/血清中肝癌相关蛋白的比较蛋白质组学研究--《重庆医科大学》2007年博士论文
血浆/血清中肝癌相关蛋白的比较蛋白质组学研究
【摘要】：
我国肝癌患者死亡率位居恶性肿瘤患者死亡率第二位,死于肝癌者占全球肝癌死亡人数的53%。几十年来,肝癌的临床诊治及基础研究均取得了丰硕成果,但其总体预后并未得到显著改善,难以早期诊断而失去手术时机是重要原因之一。血液组分变化可充分反映机体生理、病理过程,容易获取并易于监测,故一直是筛选疾病诊断标记物的最佳研究对象。目前常用的肝癌血清标记物主要为甲胎蛋白、异常凝血酶原及一些酶类,但其仍未能完全满足临床需求,因此,从血浆/血清中筛选新的肝癌标记物受到医学研究人员和临床医生的高度关注。
当前蛋白质组学(Proteomics)己成为后基因组时代生命科学研究新的热点,其定义为:研究一个细胞、组织或完整机体在某一特定时、空条件下全部蛋白质的表达、功能及其相互作用方式。其特点是以系统生物学的研究思路,采用高分辨率的蛋白分离手段和高通量的蛋白鉴定技术,全景式地研究各种特定情况下的蛋白表达谱。不断发展、完善的蛋白质组学研究策略与技术正逐渐成为现代生物医学研究新的强有力工具。
从血液中寻找特异性生物标记物用于肝癌等诊断是目前临床急需解决的难题,由于血浆/血清中蛋白质的种类很多,其含量的动力学范围很广,采用单一的分离技术很难达到研究目的。本课题采用蛋白质组学中的双向电泳-质谱技术(2-DE MALDI-TOF MS)与高效液相色谱-质谱技术( HPLC MALDI-TOF MS)相结合的策略,分别筛选肝癌患者血浆/血清中的差异蛋白,获得了比较满意的结果。
第一部分肝癌血浆/血清样品的处理
参照人类蛋白质组研究组织( Human Proteome Organization,HUPO)的血浆蛋白质组计划(Plasma Proteome Project,PPP)所推荐的方法采集血液标本,利用PPP推荐使用的多种蛋白质亲和清除系统(Multiple Affinity Removal System, MARS)同时去除血液中六种高丰度蛋白质,结果表明,血液样品中的低丰度蛋白质得到了很好分离、富集和浓缩。
第二部分双向电泳策略识别血浆/血清中的肝癌相关蛋白质
建立了血浆/血清蛋白质组双向电泳分离技术。对2-DE的各种条件进行调整、优化,建立了稳定的血液蛋白质2-DE技术。结果:血液中高丰度蛋白质的去除提高了2-DE图谱的斑点数和斑点的分辨率;pH范围为4-7的IPG胶条分辨率高于pH范围为3-10的IPG胶条;尿素9M,硫脲2M,CHAPS:2%,两性电解质1:1(pH=4~6,pH=5~7)作为上样缓冲液更有利于血液蛋白质的分离;300μg蛋白质为实验的最佳加样量;10%的胶浓度和SDS-PAGE电泳的设置条件(5μA 30min,30μA 2h,20μA至结束6h)均能很好地分离血液蛋白质,银染能较好地检测目标蛋白质中的低丰度蛋白。
利用已经建立的2-DE条件,分别分离和识别了正常人同肝癌患者血浆、正常人和肝癌患者血清低丰度蛋白质组,用PDQuest(7.4.0)软件进行比较分析、寻找差异表达蛋白,差异表达蛋白的酶解产物再经MALDI-TOF-MS分析,所得到的PMF(Peptide mass fingerprinting)数据以MS-Fit搜索引擎在SwissProt数据库中鉴定蛋白质。结果:在肝癌患者血浆组中共鉴定出20种差异蛋白质,其中18种蛋白质表达上调,2种蛋白质表达下调。(它们分别是:RING finger protein 34,Wilms' tumor 1-associating protein,CD147 antigen,Tumor necrosis factor-inducible protein TSG-14 , PRAD1 oncogene ,Melanoma-associated antigen 12,Cell growth regulator with RING finger domain 1,Vacuolar ATP synthase subunit d,IgM-associated peptide,Zinc finger protein 306,Fibrinogen gamma chain precursor , MRG-binding protein , B and T lymphocyte-associated protein,Mitogen-activated protein kinase 14 , C-reactive protein precursor ,1,2-dihydroxy-3-keto-5-methylthiopentene dioxygenase ,Regulating synaptic membrane exocytosis protein 4,IgG Fc receptor II-c,Follistatin precursor,FADD protein)。10例样品对20种总差异蛋白的平均识别率为52%,每种蛋白质在10例样品中的平均重复识别率为52%。在肝癌患者血清组中共鉴定出23种差异蛋白质,其中17种蛋白质表达上调,6种蛋白质表达下调。(它们分别是: Serpin B10 , Keratin ,Alpha-1-antitrypsin,Protein kinase NYD-SP9,Tumor necrosis factor receptor superfamily member 19 precursor,Histone-binding protein RBBP4 , HNF-4a coactivator , Galectin-2 , Metastsis suppressor protein 1,Heat shock 70 kDa protein 8,Zinc finger protein 202,Serum albumin precursor,Apolipoprotein A-IV,Melanoma-associated antigen C3,Myc box dependent-interacting protein 1,Zinc finger CCHC domain-containing protein 5,Histone deacetylase 1 (HD1),FADD protein,26S proteasome regulatory subunit p28,CD82 antigen,Autophagy protein 5)。8例样品对23种总差异蛋白的平均识别率为54.59%,每种蛋白质在8例样品中的平均重复识别率为53.80%。在肝癌患者血浆和血清组中共同识别到2种差异蛋白质。
第三部分HPLC/MS识别血浆肝癌差异蛋白血浆样品除去白蛋白等高丰度蛋白质后,采用RP-HPLC法分离分析,得到的差异蛋白质组分利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定其相对分子质量。结果:肝癌患者血浆和正常人血浆的RP-HPLC图谱中存在3组差异蛋白质,分子量在15kD~50 kD范围的蛋白质在正常人中有较高表达,而分子量为50 kD ~90 kD范围的蛋白质在肝癌患者中有较高表达。实验结果表明,HPLC-MS技术可以成为筛选疾病血液相关蛋白质、特别是强疏水性蛋白质的工具,成为2-DE技术筛选疾病血液相关蛋白质的有力补充。该部分蛋白质的进一步分离、鉴定以及相关蛋白质的生物学功能,有待于更进一步的研究。
总之,本文利用先进的血液样品处理技术,结合2-DE/MS和HPLC/MS的蛋白质组学策略,识别到一定数量的肝癌血液相关蛋白,对这些蛋白的进一步研究,将有助于肝癌机制的阐释,并将为肝癌的诊断和治疗奠定一定的基础。
【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2007【分类号】：R735.7【目录】：
符号说明6-7
中文摘要7-12
英文摘要12-18
论文正文：血浆/血清中肝癌相关蛋白的比较蛋白质组学研究18-111
第一部分 肝癌血浆/血清样品的处理24-37
1 材料26-28
2 方法28-31
3 结果31-34
参考文献34-37
第二部分 基于双向电泳-质谱策略识别血浆/血清中肝癌相关蛋白质37-101
第一章 血液蛋白质组双向电泳技术的建立及对肝癌血液样品的分析40-53
1 材料40-41
2 方法41-44
3 结果44-48
4 讨论48-51
参考文献51-53
第二章 肝癌患者血液差异蛋白质的 MALDI-TOF MS 分析53-101
2 方法54-57
3 结果57-92
4 讨论92-97
参考文献97-101
第三部分 基于高效液相色谱-质谱策略识别血浆中肝癌相关蛋白质101-111
2 方法102-103
3 结果103-109
4 讨论109-110
参考文献110-111
全文总结111-114
文献综述114-133
博士期间发表的论文及主持的科研课题133-134
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