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离体培养时真菌对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响
摘 要：目的 研究离体培养时瘤菌根菌属（Epulorhiza sp.)真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响。方法 采用琼脂作支持物，考察真菌对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响；采用蛭石作支持物，考
【题　名】离体培养时真菌对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响
【作　者】宋经元 郭顺星
【机　构】中国医学科学院,北京100094
【刊　名】《中国医学科学院学报》 2001年第23卷第6期,547-551页
【关键词】铁皮石斛 金钗石斛 真菌 离体培养 中药材 兰科植物 野生植物
【文　摘】目的 研究离体培养时瘤菌根菌属（Epulorhiza sp.)真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响。方法 采用琼脂作支持物，考察真菌对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响；采用蛭石作支持物，考察真菌和营养液对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响。结果 在琼脂培养基上，真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的增加均没有显著性影响（P&0.05)。在蛭 石基质上，真菌AR-18对金钗石斛鲜重的增加具有显著促进作用（P&0.05)。接菌的金钗石斛的鲜重较不接菌提高16%；真菌AR-18对金钗石斛干重的增加具有极显著促进作用（P&0.01)。接菌的金钗石斛鲜重的增加（P&0.01)。接菌的金钗石斛的鲜重较不接菌提高47%，真菌AR-18配合使用营养液对金钗石斛鲜重的增加没有显著性影响（P&0.05)；真菌配合使用营养液或配合使用蒸馏水对金钗石斛干物质的积累没有显著性影响（P&0.05)。所以最佳处理组合为真菌AR-18配合使用蒸馏水。在蛭石基质上，真菌AR-18和营养液对铁皮石斛的鲜重和干重的增加没有显著性影响（P&0.05)。结论 在离体培养条件下选择合适的基质和控制真菌的适度生长是建立稳定的共生平衡系统和促进金钗石斛生长的重要条件。在人工栽培金钗石斛的过程中，使用真菌AR-18作为菌肥，有可能取得较好的效果。
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铁皮石斛,金钗石斛,真菌,离体培养,中药材,兰科植物,野生植物
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3秒自动关闭窗口含有植物病原真菌提取物交链孢酸的农药制剂的制作方法
专利名称含有植物病原真菌提取物交链孢酸的农药制剂的制作方法
技术领域本发明涉及一种含有植物病原真菌提取物的杀生剂，具体说是一种含有植物病原真菌提取物交链孢酸的农药制剂。
近年来，伴随人类对生态环境的日益关注，化学合成农药的负面效应越来越引起人们的不安。因此科技工作者纷纷探索开发新的、对生态环境无污染破坏的新型农药，其中包括生物农药，特别是从微生物代谢物中发现农药活性物质，并以此作为新型农药开发源泉的研究得到重视。例如JP89-47703A报道一种含有以镰刀菌分泌的萎蔫酸毒素为主要成分的可湿性粉剂，其500ppm对瓜果腐霉有100％的防治效果。1984年Howell C.(phytopathology74(11)84))报告，由Gliocladiurn Virens产生的Viridiol毒素具有除草活性，有可能成为棉田除草的有效的生物控制剂。US pat.Appl 201143报道了由青霉菌(Penicilimm)、曲霉菌(Aspergillus)和麦角菌(Glaviceps)产生的毒素-Tremorgenic对棉铃虫和草地贪夜蛾具有杀虫活性。虽然，当前对含微生物及其提取物的农药制剂的研制有一定的发展，但距用它们来完全取代现正在使用的化学合成农药的目标尚远，还必须不断开发新成分和新用途的含微生物真菌及其提取物的农药制剂。
交链孢酸(Alternaric acid)是植物病原菌-茄链格孢菌(Altemaria Solanr)分泌的一种毒素，它是引起蕃茄早疫病的致病因子。历来，人们只是在研究该毒素的产毒规律、致病机理及如何消除它的有害作用，从未有人研究过将交链孢酸用作为有利于人类的农药制剂。
本发明的目的是提供一种新型的含植物病原菌提取物的农药制剂，即含有植物病原真菌-茄链格孢菌的提取物交链孢酸为主要成分的可湿性粉剂农药，可用来抑制和杀灭黄瓜灰霉病菌(Botrytis Cinerea)、油菜菌核病菌(Solerotinia sclerotiorum)，也可用它来防除单子叶稗草及双子叶苋菜、油菜等杂草。
本发明的目的是这样实现的本发明含有植物病原真菌提取物的农药制剂是由以下配方组成交链孢酸50％(重量百分比，下同)、农药载体(如陶土、或膨润上、或硅藻土)35％、分散剂(如木质素磺酸钠、或木质素磺酸钙或烷基萘甲醛缩合物磺酸盐)5％、湿润剂或湿润渗透剂(如二丁基萘磺酸钠，或皂角粉，或月桂醇聚氧乙烯基醚)10％。
本发明是将计量的交链孢酸、载体、分散剂和湿润剂均匀混合，用球磨机研磨粉碎，使其颗粒通过325目筛，封存备用。
本发明含交链孢酸的农制剂药作为杀菌剂，可以用于抑制黄瓜灰霉病菌、或油菜菌核病菌的生长；作为除草剂，可以用于防除单子叶稗草、双子叶油菜或苋菜等杂草。它在自然界容易降解，不会污染环境和农作物。
本发明对黄瓜灰霉病菌、油菜菌核病菌有十分明显的抑制杀灭作用。剪取黄瓜子叶或真叶叶片，在由本发明农药制剂配制的500ppm的交链孢酸药液中浸泡2分钟，或者用上述药液喷施在黄瓜幼苗上，然后分别接种黄瓜灰霉病菌及油菜菌核病菌，再将各个处理样品放置在22±1℃的光照培养箱内保湿培养48小时，计量各样品接种叶片病斑扩展直径，并与不施本发明药液的空白对照组相比、以此计算防治效果，结果表明，本发明药液对这两种病害的防治效果幅度为81.6～91.7％。当所用本发明农药制剂中的交链孢酸浓度按有效成分计为100ppm时，可以100％抑制上述两种植物病原菌菌丝的生长；当该浓度≥5ppm时，就可以明显地抑制黄瓜灰霉菌芽管的生长；当该浓度≥10ppm时，可以100％抑制油菜菌核菌菌核的萌发。
本发明对单子叶稗草、双子叶油菜、苋菜等杂草有明显的防除效果。用本发明的可湿性粉剂农药，以100克/亩(按有效成分计，下同)进行土壤处理，对上述杂草有100％的防除效果，进行茎叶喷雾处理的防除效果分别为稗草81.8％、油菜91.2％、苋菜100％；在25克/亩的低剂量下，对稗草的防除效果均下降至20％左右，对双子叶油菜和苋菜，进行土壤处理仍有100％的防除效果，进行茎叶喷雾处理则防除效果分别为51.5％和47.4％。
本发明是一种微生物提取的农药制剂，与同样用途的化学合成农药相比不仅杀菌和除草的效果明显，更突出的优点在于它容易在自然环境中降解，不污染环境和农作物本身，同时也将毒素变害为利。
本发明的突出的实质性特点和显著的有益效果可从下述实施例中得以体现，应当指出它们并不是对本发明作任何限制。
用Bartels-Keith方法提取、分离交链孢酸先从1000ml茄链格孢菌培养滤液制备交链孢酸粗毒素培养液，再用等体积的氯仿分三次进行萃取，合并有机相，用无水MgSO4干燥，然后减压除去溶剂得到褐色粘稠物。用10ml苯加热将该粘稠物溶解，冷却后得到黄褐色固体。用饱和NaHCO3溶液溶解所得的固体物质，然后用1mol/L浓度的盐酸调节溶液的酸碱性至刚好出现絮状沉淀时，用30ml×3的氯仿萃取三次。将分离出的水相再用1mol/L的盐酸酸化至絮状沉淀不再出现，用等体积氯仿分三次萃取。合并两次的萃取液，用无水MgSO4干燥过夜，然后减压除去溶剂得到淡黄色固体物质，再用苯将其重结晶得到100mg无色针状晶体。将该晶体进行熔点测定及元素分析，并通过1HNMR、13CNMR、1H，1H-cosy及DEPT光谱等手段进行结构分析，确认所得物质为交链孢酸。下述为有关数据1HNMR(δppm，CDCl3TMS)0.86(d，3H，J＝7.10Hz、15-H)，0.87(t，3H，J＝7.18Hz、14-H)，1.34(m，2H，13-H)，1.80(m，1H，12-H)，3.95(d，1H，J＝1.80Hz，11-H)，5.75(d，1H，J＝15.7Hz，9-H)，5.97(m，1H，17-H)，4.82(s，1H，17-H)，2.40(m，2H，5-H)，3.20(m，1H，4-m)，2.64(m，2H，2′-H)，4.60(m，1H，3′-H)，1.45(d，3H，J＝6.2Hz，4′-H)，17.87(s，1H，COOH)。
13CNMR(δppm.CDCl3，TMS，DEPT)166.0(C，C-1)，102.9(C，C-2)，203.8(C，C-3)，37.17(CH2，C-4)，30.9(CH2，C-5)，145.7(C，C-6)，38.93(CH2，C-7)，129.5(CH，C-8)，129.8(CH2，C-9)，79.74(C，C-10)，76.66(CH，C-11)，35.08(CH，C-12)，28.00(CH2，C-13)，11.75(CH3，C-14)，12.69(CH3，C-15)，176.8(C，C-16)，111.9(CH2，C-17)，194.9(C，C-1′)，39.2(CH2，C-2′)，70.6(CH，C-3′)，20.57(CH3，C-4′)。
取由实施例1所制得的交链孢酸按如下方法制备含50％交链孢酸的可湿性粉剂分别称取重量比为500mg的交链孢酸、350mg陶土、50mg木质素磺酸钠、100mg二丁基萘磺酸钠，混合均匀，进一步用球磨机粉碎混合约2小时，使其颗粒的85％通过325目筛，即制得本发明的含50％交链孢酸的可湿性粉剂。
取由实施例2制得的含交链孢酸50％的可湿性粉剂，用水配制成按有效成分计算浓度分别为100、10、1.0、0.1ppm的含药PSA平板，在各个PSA平板上分别接种直径为4.5mm的黄瓜灰霉病菌，油菜菌核病菌的新鲜菌丝块，于22±1℃下培养72小时，再测量菌落直径，并与空白对照组比较，计算出相对抑制率。结果表明本发明对上述两种植物病原菌的菌丝扩展有明显的抑制作用，当本制剂的交链孢酸浓度按有效成分计算为100ppm时，可以100％抑制上述两种植物病原菌菌丝的生长，即使在0.1ppm的低浓度下，相对抑制率也在60％以上(见表1)。
取由实施例2制得的含交链孢酸50％的可湿性粉剂，配制成按有效成分计算，浓度分别为100、10、1.0ppm的含药PSA平板。将油菜菌核用0.1％的升汞液进行表面消毒后置于上述各含药平板的表面，在22±1℃黑暗条件下培养5天。计算菌核萌发数，并与空白组对照比较，计算出本制剂对油菜菌核萌发的抑制率。结果表明本发明制剂在≥10ppm浓度下可以100％抑制油菜菌核的萌发(见表2)。
取由实施例2制得的含交链孢酸50％的可湿性粉剂配制成按有效成分计算浓度为500ppm的药液，然后进行如下处理(1)将离体的黄瓜子叶、真叶在该药液中浸泡2分钟后取出(2)将该药液喷施到黄瓜幼苗上，至药液自叶面流失为止。上述处理物在药液阴干后分别接种上黄瓜灰霉病菌及油菜菌核病菌的新鲜菌丝块，再在22±1℃的光照箱内保湿培养48小时，然后沿主脉测量各接种叶片病斑直径，与不施本药液的空白组对照比较，计算出防治效果。结果表明500ppm的本发明制剂的药液对上述两种病害的防治效果幅度为81.6～91.7％(见表3)。
在温室盆栽条件下，以稗草、油菜、苋菜做供试杂草植物。在供试植物出苗前，以及1-2片真叶期用由实施例2制得的含交链孢酸50％的可湿性粉剂，按有效成分计算以100克/亩、50克/亩、25克/亩的剂量分别做土壤处理及茎叶喷雾处理。在处理后15天测量上述杂草植物的地上部分鲜重，以茎叶鲜重减少百分率为活性评价标准，结果见表4。
用本发明制剂在100克/亩剂量下，进行土壤处理对稗草、油菜、苋菜均有100％的防除效果；进行茎叶直喷雾处理的防除效果为稗草81.8％、油菜91.2％、苋菜100％。用本发明制剂在25克/亩低剂量下，对单子叶稗草无论是进行土壤处理还是进行茎叶喷雾处理，防除效果均下降至20％左右，但对双子叶油菜、苋菜，用土壤处理仍有100％的防除效果，用茎叶喷雾处理的防除效果为油菜51.5％，苋菜47.4％。
表150％交链孢酸可湿性粉剂对两种植物病原菌菌丝生长的影响
表250％交链孢酸可湿性粉剂对油菜菌核萌发的影响
&/tables&表350％交链孢酸可湿性粉剂配制的500ppm(按有效成分计)药液对两种植物病害的防治效果
表450％交链孢酸可湿性粉剂除草活性(鲜重减少％)&tables id="table3" num="003"&&table width="850"&施用剂量(有效成分)克/亩稗草油菜苋菜土壤处理茎叶处理土壤处理茎叶处理土壤处理茎叶处理051.87.551.068.&/table&&/tables&
1.一种含有植物病原真菌提取物交链孢酸的农药制剂，其特征在于它是由以下配方组成50％(重量百分比，下同)的交链孢酸、35％的农药载体(如陶土、膨润土或硅藻土)、5％的分散剂(如木质素磺酸钠、木质素磺酸钙或烷基萘甲醛缩合物磺酸盐)、10％的湿润剂或湿润渗透剂(如二丁基萘磺酸钠、皂角粉或月桂醇聚氧乙烯基醚)。
2.按照权利要求1所述的含有植物病原真菌提取物交链孢酸的农药制剂，其特征在于所说的农药载体为陶土，分散剂为木质素磺酸钠，湿润剂为二丁基萘磺酸钠。
3.一种如权利要求1所述的含有植物病原真菌提取物交链孢酸的农药制剂，其特征在于它用作杀菌剂，可抑制黄瓜灰霉病菌或油菜菌核病菌的生长；用作除草剂，可用于防除单子叶稗草、双子叶油菜或苋菜等杂草。
本发明属含有植物病原真菌提取物的农药制剂，它由50％交链孢酸、35％的农药载体(如陶土、膨润土或硅藻土)、5％的分散剂(木质素磺酸钠、木质素磺酸钙或烷基萘甲醛缩合物磺酸盐)、10％的湿润剂或湿润渗透剂(二丁基萘磺酸钠、皂角粉或月桂醇聚氧乙烯基醚)组成，可应用于有效地抑制黄瓜灰霉病菌、油菜菌核病菌的生长，防除单子叶稗草、双子叶油菜及苋菜等杂草，它在自然环境中容易降解，不会污染环境和农作物。
文档编号A01N63/00GK103990
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者李树正, 岳东霞, 刘准, 杨秀凤, 张素华 申请人:南开大学