肽的酶法制备工艺及抗疲劳活性研究03-第7页
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肽的酶法制备工艺及抗疲劳活性研究03-7
图2-5水解时间对多肽得率的影响；Fig.2-5Effectofhydrolysi；（底物浓度1%，酶用量6000U/g，水解温度4；2.3.4.5温度对多肽得率的影响；从图2-6可以看出，在最适温度之前，多肽得率随着；图2-6水解温度对多肽得率的影响；Fig.2-6Effectofhydrolysi；（底物浓度1%，酶用量6000U/g，水解时间3；2.3
图2-5 水解时间对多肽得率的影响Fig.2-5 Effect of hydrolysis time on yield of polypeptide（底物浓度1%，酶用量6000U/g，水解温度40℃）2.3.4.5 温度对多肽得率的影响从图2-6可以看出，在最适温度之前，多肽得率随着温度的上升而增大，反应速率随温度升高的效应比酶蛋白变性效应占优势。在温度为45℃时多肽得率达到最大值。温度超过45℃时，蛋白酶变性逐渐突出，多肽得率呈现下降趋势。因此，确定酶解反应的最适反应温度在45℃左右。 图2-6 水解温度对多肽得率的影响Fig.2-6 Effect of hydrolysis temperature on yield of polypeptide（底物浓度1%，酶用量6000U/g，水解时间3h） 2.3.4.6 正交实验测定酶解的最佳条件为了进一步确定酶解的最佳作用条件，还需要根据单一因素实验得出的结论进行正交实验。根据前面实验的结果，本实验不调节pH值，以底物浓度、加酶量、酶解温度和酶解时间为实验实验的因素水平因素，各取三个水平，以多肽得率为评价指标进行四因素三水平的正交实验[69]。设计如表2-3所示：表2-3 正交实验因素水平表Tab.2-3
The design of factors and levels of orthogonal experiment 因素 水平底物浓度（W/V，%）A酶用量（U/g）B温度(℃)C水解时间(h)D1 0.5 2 1 3 1.5
正交实验结果见表2-4。从表中可以看出，在不调节pH值的条件下，影响多肽得率的主次因素依次为：加酶量（B）、底物浓度（A）、水解时间（D）、水解温度（C）。各因素对多肽得率的影响趋势如图2-7所示。对正交实验结果进行极差分析，确定水解条件的最优组合为：B3A2 D2C3，即加酶量为8000U/g，底物浓度为1%，酶解温度为50℃，水解时间为2h。经验证实验得出，在此条件下多肽得率可达34.26%。图2-7 试验因素与指标趋势图 Fig.2-7
Factors and index trendgraph 表2-4
最佳水解条件的的正交实验结果 Tab.2-4
The results of orthogonal experiment 试验号 A B C D 多肽得率%1 1 1 1 1 16.06 2 1 2 2 2 25.64 3 1 3 3 3 28.32 4 2 1 2 3 19.47 5 2 2 3 1 30.19 6 2 3 1 2 34.61 7 3 1 3 2 19.13 8 3 2 1 3 26.59 9 3 3 2 1 31.73 T1 70.02 54.66 77.26 77.98 T2 84.27 82.42 76.84 79.38 T3 77.45 94.66 77.64 74.38x1 23.34 18.22 25.75 25.99 x2 28.09 27.47 25.61 26.46 x3 25.82 31.55 25.88 24.79 R 4.75 13.33 0.27 1.67
因素主→次 优方案 B→A→D→C B3A2 D2C32.4 海参肽的制备工艺2.4.1 酶解将海参经过前处理后配成底物浓度为1%的溶液，80℃加热10min后加入发酵罐中，然后以8000U/g蛋白的加酶量加入水解液中，酶解过程不调节pH值，酶解条件为50℃，2h。反应2h后，利用发酵罐进行高温灭酶灭菌。 2.4.2 分离将灭酶灭菌后的海参肽酶解液冷却至室温后，4000r/min下离心15min，收集上清液，用滤纸过滤后置于旋转蒸发仪里进行真空浓缩，直至原体积的1/4。加入95%的乙醇溶液直至体系达到60%的乙醇度，静止12h，离心收集上清液。 2.4.3 干燥将离心收集的上清液浓缩至适量，然后进行冷冻干燥，即可得到溶解性良好的粉末状海参肽粗品。2.5 海参多糖的分离纯化2.5.1 粗多糖的溶解将2.4.2离心分离得到的沉淀真空干燥，称重。配制质量分数为5%的粗多糖水溶液，弃去沉淀，离心收集上清液。 2.5.2 乙酸钾法除蛋白上清液中加入乙酸钾，使其浓度为2mol/L，调节pH值为10，4℃冰箱中静止10h，离心收集沉淀。2.5.3 多糖的脱色将所得沉淀加适量水溶解，小心加入双氧水，边加边搅拌防止局部浓度过大，使双氧水最终体积分数为4.5%，60℃水浴中加热脱色2h。 2.5.4 洗涤干燥脱色后的多糖溶液按2.5.2的方法进行再沉淀，然后用80%的丙酮溶液洗涤，真空干燥后得到浅黄色无定形粉末，此即纯化的海参精多糖，计算得精多糖的得率为0.402%（以鲜品海参的重量计）。2．6本章小结本章首先从酶的种类、反应体系的pH、底物浓度、加酶量、反应时间和温度等因素着手，以多肽得率为指标，研究了酶解反应的最佳条件，然后在最优酶解条件下酶解制得了海参肽的粗品。同时，从综合利用海参营养成分的角度考虑，分离纯化出了海参多糖。实验结果表明：在不调节体系pH的条件下，复合胰蛋白酶酶解海参蛋白的最佳酶解条件为：加酶量8000U/g，底物浓度1%，酶解温度50℃，水解时间2h。在此条件下进行酶解，多肽得率可以达到34.26%。将海参肽酶解液灭酶灭菌后冷却至室温，离心收集上清液，用滤纸过滤后置于旋转蒸发仪里进行真空浓缩，加入95%的乙醇溶液直至体系达到60%的乙醇度离心除去多糖沉淀后收集上清液。浓缩后进行冷冻干燥，即可得到溶解性良好的粉末状的海参肽粗品。将粗多糖沉淀用乙酸钾去除蛋白并进行脱色、洗涤干燥后得到了淡黄色的精制多糖。以鲜品海参的重量计算，采用上述工艺制得的多糖得率为0.402%。
第三章 海参肽的分子量分布研究3.1 引言经过酶解制得的海参肽粗品中还含有海参蛋白和酶等可溶性大分子蛋白，所以要对海参肽进行纯化。不同生理功能和活性的海参肽分布于不同的分子量段，因此了解其分子量分布是非常有意义的。Joen等研究应用超滤技术对鳍鱼蛋白水解物进行分离纯化，获得三个部分的肽片段并分别检测了各个肽段的活性。我国的哈高科大豆食品有限公司运用膜分离技术从大豆蛋白的酶解物中分离出具有降血压、血脂和调节血糖功效的大豆低聚肽产品。陈山等对大豆肽超滤分离纯化过程进行了评价和分析，结果表明超滤技术不仅能直接从发酵产物中分离出纯度较高的大豆肽，而且可以作为一种检测手段用来分析发酵产物中组分的相对分子质量分布[5]。马永强等[70]采用超滤法与凝胶过滤色谱相结合的方法，快速、简便地测定了大豆肽的分子量分布状况，结果显示产物中以分子量在1000Da以下的小肽为主。邓勇[51]等利用葡聚糖凝胶（SephadexG25）柱层析和高压液相色谱（HPLC）测定了大豆多肽分子质量与水解度以及分子质量与苦味之间的关系。刘健敏[52]等采用两种蛋白酶AS1.398和Alcalase 酶制备了水解度为10%―24%的大豆多肽,并对其抗氧化性、ACE抑制活性和相对分子质量的分布进行了研究。励建荣[39]等采用复合酶解工艺水解蚕丝素蛋白，并用 SDS―PAGE 电泳的方法初步分析了丝肽分子量的分布情况，用高效液相色谱法分析其氨基酸组成和含量。本章的主要内容是采用超滤膜对海参肽粗品进行纯化，再对纯化的海参肽进行分子量分布测定。肽的分子量测定通常应用经典的凝胶柱层析法，但是这种方法操作麻烦、周期长。采用HPLC中的凝胶排阻色谱法，以TSK-GEL G2000SWXL为分析柱，分析小分子量肽的分子量分布，快速而简便。3.2 材料与方法3.2.1实验材料 1．海参肽粗品，自制2．核糖核酸酶A（Ribonuclease A）：中国药品生物制品检定所产品，分子量为13700Da 3．人胰岛素（Human Insulin）：中国药品生物制品检定所产品，分子量为5808Da4．人生长激素释放抑制因子（Somatostatin）： 中国药品生物制品检定所产品，分子量为1638Da 5．苯丙氨酸(Phe)：中国药品生物制品检定所产品，分子量为165Da 3.2.2实验试剂包含各类专业文献、文学作品欣赏、应用写作文书、幼儿教育、小学教育、外语学习资料、肽的酶法制备工艺及抗疲劳活性研究03等内容。　
　其反应快,生产量大,但缺点是提取出来的肽类 活性...具有抗疲劳,改善肝、肾、肠胃疾病患者营养的功能, ...酶法生产活性肽 产品安全性极高,生产条件温和,水解... 　玉米肽具有抗疲劳、保肝、提高机体免疫力等功能;玉米肽 独特的氨基酸构成,有利于...酶法制备海洋生物活性肽是目前最常用的制备方法, 是通过适 当的蛋白酶水解海洋... 　生物活性肽生产方法主要有动植物组织器官提取 法、化学合成法、蛋自酶水解法、...抗癌;@呈昧;@结合矿物质和促进矿物 质的吸收;①抗氧化;@抗高血压;⑨抗疲劳... 　(2)主持山西省回国留学人员科研资助项目“多酶分步水解制备黑豆肽及其抗疲劳 ...“植物多肽食品的酶法生产与加工 重组技术研究” 2006 年 9 月经山西省科技厅... 　制备方法 传统获得肽的方法有很多。传统法主要有:微...抗疲劳、改善睡眠、增强记忆、 抑制肿瘤等;能促进...通过合适的酶,合理的酶配方,对其进行酶解, 也可... 　活性肽的分类 生产方法 原料选择原则 中国活性肽研究...大豆肽大豆肽是大豆蛋白质经酸法或酶法水解后分离...质营养失常状态及抗疲劳等功能, 除可制作治疗肝疾... 　提高其生物活性, 研究了酶法水解制备白果肽段的方法及其抗氧化 活性的变化。 通过...镇咳平喘耐缺氧、抗疲劳和延缓衰老、抗菌等 ③ 对银杏种仁的综合利用和存在问题... 　酶法制备蛋黄多肽条件的研究_化学_自然科学_专业资料...消除疲劳、改善因精神 紧张引起的暴躁等症;促进脂肪...通过氨基酸分析发现抗氧化性强的肽是由 10 个和 ... 　以豆粕为原料制备 大豆肽的两种方法,发酵法和酶解法...可明显地增强运动员的体力、耐力、迅速消除疲劳、 ...大豆生物活性肽的制备及其生物活性研究[J]. 中国...鲶鱼骨酶解产物抑菌活性的酶解工艺优化_百度文库
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酶促反应的速率与底物的浓度有关？为什么，添加底物的浓度，酶的活性没变啊，为什么速率会加快，我觉得是添加酶的浓度才会加快，求解
影响酶促反应的速率的因素不一定影响酶的活性 所有的活性中心都已经被底物占据出处：酶的活性受pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂的影响。影响酶活性的因素，一定会影响酶促反应的速率，但影响酶促反应的速率的因素不一定影响酶的活性，这是易忽略点也是易错点。pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度...
王老师给您解释这个问题：这个问题涉及到必修一酶的特点在一定范围内，随着低物浓度增加，酶促反应速率逐渐加快，超过一定浓度，不再增加。原因是一开始的时候酶的量重足，低物不足，之后所有的酶都参与了反应，所以会这样。好好学习天天向上...。中文题目：黑豆蛋白提取及酶法制备活性肽的研究。外文题目：Black Soybean Pro..
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黑豆蛋白提取及酶法制备活性肽的研究
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