低温脂肪酶高产菌株的筛选、鉴定及其发酵产酶条件的优化
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既然是未知酶,那么一时间就不能用产物来测了,但你可以试试对底物做一个全波长扫描,看看能不能不在其它地方也有比较强的吸收.还有一个比较异想天开的方法,就是提取到产物,对产物做一个全波长扫描
您可能关注的推广脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化--《中南林业科技大学学报》2013年09期
脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化
【摘要】：为获得高产脂肪酶菌株,对包括白地霉在内的数十种微生物进行了筛选。在采用油脂培养基进行初步筛选之后,用酸碱滴定法对菌株所分泌的脂肪酶活力进行测定,筛选获得了高产脂肪酶的白地霉菌株,其酶活力达10.79 U/mL;然后对该菌株的产脂肪酶培养基配方、pH值、温度、摇床转速等条件进行优化,得到最适产脂肪酶条件是:培养基配比的橄榄油2%、牛肉膏2%、蔗糖0.5%、(NH4)2SO40.1%,最优培养条件为pH值7.0、温度28℃、摇床转速225 r/min。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：TQ925.6【正文快照】：
脂肪酶是一类应用广泛且十分重要的工具酶,它能将油脂的甘油三酯催化生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。利用脂肪酶作用于脂肪释放出来的短链脂肪酸可以增加和改进食品风味;利用脂肪酶催化醇解和酯化反应可以生产各种香精酯;用专一性微生物脂肪酶可以提高食用油营养价值和增
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京公网安备74号产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及产酶条件优化--《海南大学》2010年硕士论文
产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及产酶条件优化
【摘要】：
从海口市各地采集含油污土样10份,富集培养得到产脂肪酶细菌优势菌种,梯度稀释后,以花生油为唯一碳源采用油脂固体平板透明圈法进行分离纯化,得到145株产脂肪酶的菌株。再经摇瓶复筛,获得两株产脂肪酶活力较高的菌株,编号分别为C737-11和C7828-5。按照《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰氏细菌鉴定手册》(2004版)的方法对两株菌进行了生理生化鉴定,以及结合分子生物学鉴定,确定菌株C737-11为洋葱伯克霍尔德氏Ⅰ型菌,菌株C7828-5为铜绿假单胞菌。
菌株C737-11粗酶的最适作用温度为37℃,最适pH值为8.0,初步优化了C737-11的产脂肪酶条件,获得高达10.5 U mL-1的脂肪酶活性。
应用单因子试验和正交实验对铜绿假单胞菌C7828-5产脂肪酶发酵培养基进行了快速优化。首先应用单因子试验确定铜绿假单胞菌C7828-5产脂肪酶最适碳源和最适氮源分别是花生油和蔗糖组合及牛肉膏。在此基础上通过L9(34)正交试验,考察了花生油、蔗糖、牛肉膏、硫酸铵等四个因素对产酶的影响,获得优化的培养基组成。最后通过单因子试验确定最适发酵温度、最适起始pH、最适接种量及最适摇床转速等。试验获得的优化培养条件为：蔗糖5gL-1、牛肉膏20 g L-1、(NH4)2SO4 1 g L-1、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、CaCl20.5gL-1,聚乙烯醇花生油乳化液120 mLL1,起始pH7.0,培养温度28℃,转速为200 r min-1,培养72h后,获得高达8.08 U mL-1的脂肪酶表达量。
对菌株的发酵粗酶液进行了酶学性质探讨,结果表明菌株C737-11和C7828-5脂肪酶的最适作用温度和最适作用pH分别都是37℃和8.0,都属于中温弱碱性酶。菌株C737-11脂肪酶热稳定性良好,50℃处理60 min后还有82%的酶活力；60℃处理40 min后还有55%的酶活力；70℃处理20 min后还有63%的酶活力；该脂肪酶在pH6.0-8.0范围内具有较好的稳定性,不过,在强碱性条件下(pH9-10),该酶稳定性较差。菌株C7828-5脂肪酶60℃处理1 h后酶活力几乎丧失,在pH 5.0-10.0范围内具有较好的稳定性,而且在中性条件下(pH 7.0),该酶酶活性仍保持不变,pHH10.0温浴1 h后仍有45%的酶活性。
【关键词】：
【学位授予单位】：海南大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：Q814【目录】：
Abstract5-10
1 前言10-28
1.1 脂肪酶的简介10-13
1.1.1 脂肪酶的分子结构及特征11-12
1.1.2 脂肪酶的作用机理12-13
1.2 产脂肪酶的微生物13-14
1.3 产脂肪酶菌的筛选方法14-15
1.4 脂肪酶活性测定方法15-17
1.4.1 碱滴定法16
1.4.2 PNPB法16
1.4.3 皂铜法16-17
1.5 脂肪酶活性的影响因素17
1.6 生物柴油概述17-27
1.6.1 生物柴油研究现状17-18
1.6.2 生物柴油的制备方法18-25
1.6.2.1 直接混合法18-19
1.6.2.2 热解法19
1.6.2.3 微乳化法19
1.6.2.4 酯交换法19-25
1.6.3 生物柴油的发展趋势25-27
1.6.3.1 国外生物柴油的进展25-26
1.6.3.2 国内生物柴油的进展26-27
1.7 本课题的研究目的与意义27
1.8 创新27-28
1.9 本研究的技术路线28
2 实验材料、试剂及仪器28-31
2.1 材料28
2.2 试剂28-29
2.2.1 购买试剂28
2.2.2 配制试剂28-29
2.3 主要仪器设备29
2.4 培养基29-31
3 实验方法31-39
3.1 产脂肪酶菌株的筛选31-32
3.1.1 富集培养31
3.1.2 平板分离31
3.1.3 产脂肪酶菌株的复筛31
3.1.4 脂肪酶产生菌的保藏方法31
3.1.5 脂肪酶活性的测定31-32
3.2 菌株分类鉴定32-33
3.2.1 革兰氏染色32
3.2.2 固体平板上的菌落形态观察32
3.2.3 运动性试验32-33
3.2.4 不同温度对生长影响的测定33
3.3 细菌的生理生化特征试验33-34
3.4 16S rRNA序列分析34-36
3.4.1 细菌基因组DNA的提取34
3.4.2 16S rRNA基因的扩增及分析34-36
3.5 Fur基因序列分析36-39
3.5.1 B.cepacia全基因组DNA提取36
3.5.2 Fur基因扩增及分析36-37
3.5.3 PCR产物的克隆37-39
4 结果与分析39-57
4.1 菌株筛选39-40
4.2 菌株的鉴定40-45
4.2.1 菌株C737-11的鉴定40-44
4.2.1.1 形态学、生理生化特征40
4.2.1.2 分子生物学鉴定40-44
4.2.2 菌株C7828-5的鉴定44-45
4.2.2.1 形态学、生理生化特征44
4.2.2.2 分子生物学鉴定44-45
4.3 产酶条件优化45-54
4.3.1 C737-11菌株的产酶条件优化 #36.45-47
4.3.1.1 碳、氮源优化45-46
4.3.1.2 不同起始pH对产酶的影响46-47
4.3.2 C7828-5菌株的产酶条件优化47-54
4.3.2.1 菌株生长产酶培养基优化47-51
4.3.2.2 金属离子对产酶的影响51
4.3.2.3 菌株产酶条件优化51-54
4.4 酶学性质研究54-57
4.4.1 C737-11脂肪酶的酶学特性54-56
4.4.1.1 酶反应最适温度54
4.4.1.2 酶反应的最适pH54-55
4.4.1.3 酶的热稳定性55
4.4.1.4 酶的pH稳定性55-56
4.4.2 C7828-5脂肪酶的酶学特性56-57
4.4.2.1 酶反应的最适温度56
4.4.2.2 酶反应的最适pH56
4.4.2.3 酶的热稳定性56
4.4.2.4 酶的pH稳定性56-57
5 讨论57-61
5.1 脂肪酶产生菌的筛选57-59
5.2 菌株的鉴定59-60
5.3 脂肪酶活力测定方法的选择60
5.4 菌株的产酶条件优化60-61
5.5 脂肪酶的酶学性质61
6 结论61-63
7 存在的问题与讨论63-64
参考文献64-74
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碱性脂肪酶高产菌株Serratia+spSL11的筛选及酶的分离纯化与部分性质研究论文
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