怎么分离土壤中的产蛋白酶菌株的筛选的菌株需要具体的步骤和实

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-12 23:24 标签： 产蛋白酶菌株的筛选

【摘要】：为筛选得到适合嫩化牛肉的优良菌株,从贵州传统豆豉和甜酒曲分离得到产蛋白酶的细菌22株;以酶活值为主要指标,牛肉的质构特性为参考指标,对菌株进行复筛,最终确定D7为最优菌株,酶活达71.68U/g。结合16SrDNA序列鉴定及系统发育树分析,对目的菌株进行分子生物学鉴定。结果表明:D7与解淀粉芽孢杆菌(JN)最为接近,相似度达99%,该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌。


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【摘要】： 中性蛋白酶是人类最早发现的蛋白酶制剂之一,广泛应用于食品工业、洗涤业、皮革业以及医学治疗等领域中。目前市场应用的蛋白酶来源中以细菌蛋白酶最多,选育中性蛋白酶高产菌株仍是当前的研究重点。提高微生物产中性蛋白酶途径有很多,简单有效的诱变方法仍是研究的课题。 从土壤中分离的产中性蛋白酶菌株N19,经初步鉴定为枯草芽孢杆菌。以N19为出发菌株,考察了紫外线、微波以及亚硝酸等传统诱变方法对该菌的诱变效果。最终筛选到了一株产酶量比出发菌株提高408%的突变株UMN-26,菌株蛋白酶酶活由158U/mL提高到803U/mL。传代十次,具有很好的遗传稳定性。可见,利用物理和化学复合诱变的方法是提高微生物产中性蛋白酶活力的有效途径。 在摇瓶发酵水平上,对UMN-26菌的发酵产酶条件进行了研究,确定了其最佳培养基成分及最佳培养条件。研究了不同碳源、氮源、无机盐、吐温—80等因素对UMN-26菌产酶的影响,发现酵母膏、蔗糖、玉米浆浓度对产酶的影响较大。对酵母膏、蔗糖、玉米浆各选取三个水平进行正交试验,确定UMN-26菌产酶的最佳培养基成分为酵母膏2%、蔗糖1.5%、玉米浆1.5%。通过摇瓶发酵试验,确定其最佳培养条件为:摇床37℃,240rpm,发酵培养基的起始pH为6.5,接种量为2.5%(V╱V),装液量为40mL/300mL,培养32h。在此条件下培养,酶活力达1378U/mL,是优化前的1.72倍。 对比诱变前后的菌株产酶发酵曲线,出发菌株和突变株的生物量及pH值曲线无明显变化,产酶曲线仍是两个峰,突变菌株酶活从出现第二个高峰后下降不多,维持相对较高水平,更适于应用于生产。 研究了菌株UMN-26发酵粗酶液的酶学性质,结果表明该酶的最适催化温度为65℃;其热稳定性为65℃水浴保温30min,酶活保持50%,且随着温度的升高酶活下降很快。该蛋白酶在pH6～8作用酶活较高,酶的最适pH值为7.0,属中性蛋白酶。在不同pH下的稳定性试验显示,该酶在pH6.5～8.0内表现出高的,比较稳定的蛋白酶活性,在pH7最稳定。该蛋白酶活受EDTA(下降约30%)抑制,但Fe~(2+)对其有明显的激活作用,能提高3倍多。 本论文研究建立了菌株UMN-26的发酵工艺条件及其酶作用条件,为其应用奠定了理论基础,具有一定的实践意义。

【学位授予单位】：河北农业大学
【学位授予年份】：2008


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