利用斜率法求最值--《数学教学研究》1994年05期
利用斜率法求最值
【摘要】：利用斜率法求最值赵勃元（甘肃武威市三中）求最值问题的解法较多，但对于某些类型的最值问题，根据其结构特点，通过数形结合进行转化，利用求直线斜率法去解决，会迅速得到巧解．现举例说明：例１若实数ｘ、ｙ满足３，求的最值。分析由题设条件可知，是经过国上的动切时...
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：G633.6【正文快照】：
利用斜率法求最值赵勃元（甘肃武威市三中）求最值问题的解法较多，但对于某些类型的最值问题，根据其结构特点，通过数形结合进行转化，利用求直线斜率法去解决，会迅速得到巧解．现举例说明：例１若实数ｘ、ｙ满足３，求的最值。分析由题设条件可知，是经过国上的动切时，有
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京公网安备75号辛伐他汀抑制损伤血管新生内膜过度增生及促进再内皮化的研究--《第三军医大学》2007年博士论文
辛伐他汀抑制损伤血管新生内膜过度增生及促进再内皮化的研究
【摘要】：
内皮细胞损伤和功能不全是血管损伤后有害修复、动脉粥样硬化的始动因素和根本原因,平滑肌细胞增生迁移是其继发因素和外在表现。修复损伤血管的关键在于抑制平滑肌细胞过度增生与促进损伤内皮重建。既往关于增殖性血管疾病治疗的研究热点主要集中于平滑肌细胞增生机制的探讨及如何有效抑制平滑肌细胞过度增生。雷帕霉素和紫杉醇药物洗脱支架是临床防治损伤血管过度的有效手段,但往往会干扰内皮修复,引起损伤血管段再内皮化不全或延迟及迟发性支架内血栓形成。因此,筛选选择性抑制新生内膜增生不影响甚至损伤血管再内皮化的洗脱支架包被药物是新一代洗脱支架的研制方向。
既往认为,参与损伤血管修复的细胞成分是血管壁平滑肌细胞和内皮细胞。近来研究发现,骨髓中存在血管祖细胞——平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cells, SPCs)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)。血管损伤后这些细胞可动员入外周血,归巢于损伤血管段,平滑肌祖细胞分化为平滑肌细胞,促进新生内膜生成,同时可导致管腔狭窄;内皮祖细胞分化为内皮细胞,重建管腔内皮细胞单层,抑制损伤血管有害重构。最近动物实验和临床研究均证实新生内膜中约一半以上平滑肌细胞是骨髓来源的,约25%内皮细胞是内皮祖细胞来源的。说明骨髓源平滑肌祖细胞和内皮祖细胞是参与损伤血管修复的重要细胞源。因此,抑制平滑肌祖细胞增殖可减少血管损伤后新生内膜过度增生,促进内皮祖细胞增殖,有助于损伤血管再内皮化,抑制新内膜发展。
他汀类药物具有良好的调脂作用,能够降低低密度脂蛋白胆固醇和升高高密度脂蛋白胆固醇。同时,在胆固醇水平相当的情况下,他汀类药物能显著降低心血管事件的发生率。此外,他汀类药物还具有抑制血小板聚集和血管中膜平滑肌细胞增殖,改善内皮功能,抑制炎症反应及增加斑块稳定性作用。新近研究显示他汀类药物能增加内皮祖细胞数量、改善内皮祖细胞功能。他汀类药物的这些生物学效应提示其有可能成为理想的第二代洗脱支架药物。由于损伤位点有效药物浓度过低,临床口服他汀类药物并不能抑制支架内再狭窄。局部用药有靶区有效血药浓度高、作用时间长和全身毒性低优点。尚不清楚局部应用他汀类药物能否有效抑制新生内膜增生,同时加速损伤区再内皮化。
1.观察临床广泛应用的洗脱支架包被药物雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响;2.观察辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响。3.观察辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响;4.建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,观察局部应用辛伐他汀能否抑制损伤血管新生内膜过度增生并促进损伤血管再内皮化,为应用他汀类药物包被洗脱支架提供实验依据。
1.观察雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,分别重悬于平滑肌祖细胞和内皮祖细胞培养基中,接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度雷帕霉素(0,0.01,0.1,1,10,100 ng/ml),培养12天后,α-SMA和CD34免疫荧光染色鉴定骨髓源性平滑肌祖细胞,荧光显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和Di I-acLDL双染阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞,并在倒置荧光显微镜下计数。收集原代培养8天贴壁细胞,分别加入不同浓度雷帕霉素(0,0.1,1,10,100,200 ng/ml)培养0、12、24、48、96 h。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮祖细胞和平滑肌祖细胞的增殖、迁移和黏附能力。
2.观察辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:分别采用酶消化法和组织块法分离培养大鼠血管内皮细胞和平滑肌细胞,加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)培养0、6、12、24、48 h,然后分别采用3H-TdR掺入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮细胞和平滑肌细胞的增殖、迁移能力。采用前述方法分离培养内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L),培养8 d,前述方法鉴定内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,倒置荧光显微镜下计数。收集原代培养8 d的内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,分别加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)培养0、6、12、24、48 h。然后分别采用3H-TdR掺入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮祖细胞和平滑肌祖细胞的增殖、迁移和黏附能力。Western blot检测不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)作用24小时对内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞周期抑制蛋白P27表达的影响。
3.观察辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响:不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)干预平滑肌细胞24 h,1μmol/L辛伐他汀干预平滑肌细胞6～48 h ,RT-PCR检测SDF-1αmRNA表达。
4.局部应用辛伐他汀对损伤血管新生内膜过度增生和再内皮化影响:建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,将400μg辛伐他汀溶于50μl F-127基质胶中,加在颈动脉外膜区域模拟洗脱支架。2周后,处死动物,取目标血管段,固定,石蜡包埋切片,HE染色观察新生内膜厚度,vWF染色观察损伤血管再内皮化程度。
1.雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:成功分离培养骨髓源内皮祖细胞和平滑肌祖细胞。内皮祖细胞vWF染色阳性,UEA-Ⅰ和DiLDL双染色阳性,可见梭形细胞首尾相连形成线状结构。平滑肌祖细胞α-SMA、CD34染色阳性。雷帕霉素浓度依赖性抑制骨髓单个核细胞向内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化。0.1 ng/ml的雷帕霉素作用12天,分化EPC数量减少59.3±5.8%(n=5,P0.01),平滑肌祖细胞数量减少70.5±34.5%(n=5,P0.01)。雷帕霉素浓度和时间依赖性抑制内皮祖细胞和平滑肌祖细胞增殖。1 ng/ml作用24 h显著抑制EPC (1 ng/ml雷帕霉素组与对照组之比为0.418±0.018 vs 0.580±0.034,n=5,P0.01)和SPC(1 ng/ml雷帕霉素组与对照组之比为0.476±0.016 vs 0.687±0.043,n=5,P0.01)增殖。1 ng/ml雷帕霉素作用12 h对EPC和SPC增殖无明显影响(n=5,P0.05)。0.1 ng/ml雷帕霉素对EPC和SPC增殖影响不明显(n=5,P0.05)。雷帕霉素也浓度依赖性抑制EPC和SPC迁移和黏附能力。
2.辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞增殖和迁移。0.01μmol/L辛伐他汀即可抑制平滑肌细胞增殖(0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为 vs ,n=5,P0.05)和迁移(0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为41±3 vs 45±3,n=5,P0.05)。0.01～10μmol/L的辛伐他汀不影响内皮细胞增殖(10μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为 vs ,n=5,P0.05)和迁移(10μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为35±5 vs 37±5,n=5,P0.05)。辛伐他汀浓度依赖性抑制骨髓单个核细胞向平滑肌祖细胞分化,促进其向内皮祖细胞分化。1μmol/L辛伐他汀作用24小时分化平滑肌祖细胞减少62.1±3.5%(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为32±5 vs 85±4,n=5,P0.01),内皮祖细胞增加1.2±0.1倍(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为87±5 vs 39±4,n=5,P0.01)。辛伐他汀浓度和时间依赖性促进内皮祖细胞增殖,最大作用剂量1.0μmol/ L,24 h达作用高峰。浓度和时间依赖性抑制平滑肌祖细胞增殖,1.0μmol/ L辛伐他汀作用24小时,内皮祖细胞数量增加2.2±0.1倍(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为 vs ,n=5,P0.01),平滑肌祖细胞数量减少62.1±5.6%(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为 vs ,n=5,P0.01)。辛伐他汀也抑制平滑肌祖细胞迁移和黏附,促进内皮祖细胞迁移和黏附。辛伐他汀浓度依赖性促进平滑肌细胞和平滑肌祖细胞周期抑制蛋白P27表达,抑制内皮祖细胞P27表达,不影响内皮细胞P27表达。
3.辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响:辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞SDF-1αmRNA表达。
4.局部应用辛伐他汀对大鼠损伤血管新生内膜过度增生和再内皮化影响:局部应用辛伐他汀抑制大鼠损伤颈动脉新生内皮过度增生,对照组与辛伐他汀组新生内膜面积之比为0.58±0.13 mm~2 vs 0.27±0.12 mm~2 (n=6,P0.01),辛伐他汀组内膜/中膜比减少(对照组与辛伐他汀组之比为1.95±0.27 vs 0.97±0.24,n=6,P0.01)。内皮细胞vWF免疫组化染色未观察到对照组和辛伐他汀组再内皮化差异。
1.雷帕霉素时间和浓度依赖性抑制骨髓源平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附;雷帕霉素也减少骨髓源内皮祖细胞数量和抑制其功能。寻找新的洗脱支架药物需考虑其对平滑肌祖细胞和内皮祖细胞的影响。
2.辛伐他汀选择性促进骨髓单个核细胞向内皮祖细胞分化,促进内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,抑制其向平滑肌祖细胞分化。抑制平滑肌细胞和平滑肌祖细胞增殖、迁移和黏附,不影响内皮细胞增殖和迁移。
3.辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞SDF-1αmRNA表达,间接抑制平滑肌祖细胞参与的新生内膜增生。
4.局部应用辛伐他汀能有效抑制损伤动脉新内膜过度增生,不影响损伤血管段再内皮化。
【关键词】：
【学位授予单位】：第三军医大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2007【分类号】：R96【目录】：
英文缩写词表6-8
英文摘要8-14
中文摘要14-18
论文正文 辛伐他汀抑制损伤血管新生内膜过度增生及促进再内皮化的研究18-113
第一部分 雷帕霉素对骨髓源血管祖细胞分化、增殖和黏附的影响21-44
实验一 雷帕霉素对内皮祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响21-31
材料与方法21-27
实验二 雷帕霉素对平滑肌祖细胞分化、增殖、黏附和迁移的影响31-41
第二部分 辛伐他汀对血管细胞和血管祖细胞增殖、迁移和黏附的影响44-68
实验一 辛伐他汀对大鼠血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖和迁移的影响44-58
材料与方法44-54
实验二 辛伐他汀对平滑肌祖细胞分化、增殖、黏附和迁移的影响58-65
材料与方法58-59
第三部分 辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞SDF-1αmRNA 表达的影响68-76
材料与方法68-71
第四部分 局部应用辛伐他汀抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化实验研究76-82
材料与方法76-78
全文结论82-83
照片84-101
参考文献101-113
文献综述 循环血管祖细胞在损伤血管新内膜修复中的作用113-131
参考文献121-131
研究生期间发表论文情况131
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京公网安备75号长江冲淡水转向原因的探讨--《海洋与湖沼》1985年05期
长江冲淡水转向原因的探讨
【摘要】：本文认为东海本身所存在的流场、风场和压力场是影响和控制长江冲淡水运移的环境因子,并将这些因子引入流轴运动方程。 台湾暖流、沿岸流和风海流给长江冲淡水一个推力,使其流轴运移方向夏天向左偏,冬天向右偏。黑潮控制着长江冲淡水的扩展。风的效应由直接和间接效应组成,其综合效应相当重要,不可忽略。
【作者单位】：
【关键词】：
【正文快照】：
长江冲淡水人海后的扩展姿态是相当复杂的,总的来看,其主体先顺河口走向直下东南,然后可能朝三个方向运移:〔l)向东北,即向济州岛方向运移,流轴出现左转现象;(2)向南或东南方向运移,即沿江浙沿岸南下,流轴向右转向;(3)大致沿河口方向向前伸展,流轴无大的转向LI],”。第一种情
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