测elisa打板子视频盖要取下来吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-07-21 04:17 标签： 被打板子
 试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃栤箱取出后打开盒盖于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）
样品一般选择培养上清、血清、血浆其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）
 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥
 包被抗体遭到破坏 操作温和，移液枪鈈能碰到孔底
 样本和抗体孵育条件不合适 按照说明书条件建议孵育过程中全程振荡孵育。
 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作勿人为增加浸泡时间；
 TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-最高浓度的标准品出现深蓝色；S4-5囿淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本最佳稀释倍数
 酶标仪滤光片设置有問题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
不能使用细胞培养板建议使用ELISA专用高吸附力打板子视频。
背景深全部呈囿色（通常的Elisa背景值OD<0.2）  洗涤不充分，洗后未拍干样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒彻底拍干。加樣或加酶拍板的滤纸应弃去不用不要反复使用，否则易造成污染
 底物污染，未避光保存出现颜色
 样品稀释液污染
 吸头重复使用，未洗净或消毒不彻底
 不正确的孵育时间温度（尤其是底物孵育的时间） 最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃完全按照说明書要求。
按照说明书调整到最佳的浓度
酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板
在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
建议使用非溶血或轻微溶血样本严重溶血样本会导致背景偏高。
加样前充分混匀样品取样确保移液位置一致；
 包被板表面遭到破坏 洗板加样时尽量小心，避免破坏板的包被表面
 孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用
样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
 边缘效应（外周孔显色较中心孔深） 孵育时尽量100 rpm旋转混匀
 微量加样不准确 保证微量加样的准確性和均一性
洗液准确配制；充分洗涤静置15秒，确定每一步的洗涤
出现白板阳性对照不显色
 洗涤液配制有误 请按说明书所示稀释倍数配制
 未加酶结合物而认为已加入
 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用 每次加液前均应看清标签
 标准品稀释方法错误/或标准品有问题 请按照说明书所示配置说明书，注意单位和稀释倍数
 不同试剂盒或不同批号的试剂混用 建议使用同批次试剂盒不能混用不同试剂盒或不同批號的试剂。
 错误的方法重悬标准品  加入正确量的溶液重悬标准品重悬充分
 标准品稀释错误  按照说明书要求稀释标准品
 错误的倍比稀释步驟  按照说明书倍比稀释标准品
TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而 前者比色波长为450nm后者为492nm。双波长比色分析优于单波长
 不同批号試剂勿混用
 试剂盒在运输途中时间太长，温度太高标准品失活  尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温
TMB显色需终止后检测否则会出现620nm比450nm讀数高的现象。（数值仍有梯度规律）
样品或标准品OD超出正常范围  错误的样品或标准品的稀释  完全按照说明书稀释
 偶联抗体浓度过高  按照說明书调整到最佳的浓度
 调整到合适的孵育时间
 样品或标准品污染
 错误的孵育时间或温度  完全按照说明书
 孵育时未加盖导致溶液挥发和污染
标曲很好但是样本无法计算到数值  标曲选择不合适 选择最合适的标曲拟合；
 样本含量很低，低于灵敏度无法被检测到 尝试浓缩样本或使用高敏ELISA试剂盒检测
样本含量很高超过标曲 建议进行预实验摸索稀释倍数，确保样本OD值落在标曲范围内
标曲高浓度间无明显趋势 如OD绝对徝靠谱但是仅无梯度，则显色过度 TMB显色体系中建议根据S1S2颜色进行判断，当S1S2深蓝色，有明显梯度S5有淡蓝色时即可终止。
由于参考波長读取非特异性检测如指纹、划痕、水渍等，对结果也有影响建议最终结果以双波长为最准确。

上海恒远生物始终坚持以“求实创新、积累经验”的经营理念除了为客户提供优质的产品外，还提供更多的增值服务根据客户需求，为客户提供全程方案咨询、产品选型、专业采购、行业动态等各种优质完善的服务

我要回帖

更多关于 被打板子 的文章

 

随机推荐