超净台中的紫外灯是否会使大肠杆菌超标灭活死亡？

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中蜂囊状幼虫病毒基因分型及其代表毒株生物学特性比较
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大肠杆菌的培养和分离
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大肠杆菌属于革兰氏阴性菌
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产肠毒素性大肠杆菌Sta-K99融合基因重组腺病毒载体的构建和表达.pdf 56页
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产肠毒素性大肠杆菌Sta-K99融合基因重组腺病毒载体的构建和表达
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宁夏大学硕士学位论文产肠毒素性大肠杆菌Sta--K99融合基因重组腺病毒载体的构建及表达姓名：杨继辉申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：王玉炯；邓光存201203摘要Escherichia产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigeniccoli，ETEC)是全球性人和动物传染性腹泻的重要病原体之一，给畜牧业造成巨大的经济损失，同时给人类公共卫生安全造成重要威胁。本研究利用PCR幂II基因重组等技术，克隆了产肠毒素性大肠杆菌STa和K99基因，并将其融合构建了穿梭质粒，将穿梭质粒和骨架质粒在293细胞内进行包装得到重组腺病毒。PCR鉴定结果表明，成功构建了重组腺病毒载体Ad5STaK99，在此基础上，利用Westernblot方法对重组腺病毒进行了融合蛋白表达的检测及免疫原性研究，为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定基础。主要实验结果如下：1．根据设计的特异引物，利用PCR技术，成功克隆了STa基因和K99基因，核苷酸序列测定结果有一个碱基突变，导致一个氨基酸的突变，分析表明，两氨基酸性质相同，蛋白质三级结构预测一致，不影响蛋白的免疫原性。穿梭质粒pAd5STa-K99和骨架质粒经Pac1分别进行酶切后回收，STa-K99。将穿梭质粒pAd5在293细胞内进行包装，细胞出现明显的病变效应，表明成功获得了重组腺病毒。3．将获得的重组腺病毒在293细胞内大量扩增，通过CsCl密度梯度离心法进行了纯化，根据ST-K99融合基因特异引物进行PCR反应，出现了预期大小的条带，表明STa-K99融合基因整合至腺病毒载体，成功构建重组腺病毒Ad5STa-K99。将重组腺病毒Ad5STa-K99感染的细胞提取蛋白，利用K99特异血清抗体对其表达蛋白进行TWestemBlotting检测，结果显示，在约22kD处出现特异性条带，表明重组腺病毒AdSSTa-K99在细胞内成功表达融合蛋白，且融合蛋白可以被特异性抗体识别。关键词：产肠毒素性大肠杆菌，耐热性肠毒素，粘附素，重组腺病毒载体AbstractEscherichiaoneofthetoaEnterotoxigeniccoli(ETEC)isimportantpathogenleadingglobalhumanandanimalinfectiouseconomiclossestolivestockandadiarrhea,causinghugebecomingmajorthreatforhumanhealthandthisK99andheatpublicsafety．InstableenterotoxinSTastudy,adhesinwefeclonedPCRandrecombinantDNAconstructedtheshuttlesuccessfullyusingtechnology．WeSTa-K99fusiontheshuttleandbackboneinplasmidcontaininggene，andpackagedplasmidplasmid293cells．PCRshowedthatanalysisSTa-K99fusionwasinsertedintorecombinantgenesuccessfullyadenovirustherecombinantadenovirusofAd5vector,andvectorSTaK99wasconstructed．successfullyWeidentifiedthefusionWesternandproteinexpressionbydidresearchontheblottingpreliminaryoftherecombinantadenovirusofimmunogenicityAd5thefoundationfortheSTaK99，establishingofrecombinantadenoviralvectorvaccineofthedevelopmentnewbomanimalsdiarrheapreventioncausedETEC．Theresultswereasfollows：byexperimentaltoclonedSTaandK99thePCR1．Accordingdesignedspecificprimers，wegenegeneusingtechnique．ThenucleotideresultWascorrect．Abasemutationresultedinanaminoacidsequencingmutation，whichwereofthesamenature．Butitdidnotinfluencetheoftheimmunogenicityprote
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实验1-大肠杆菌的培养与分离2016.2
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