g细胞是壁细胞吗在96孔板上贴壁后能晃下来吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-08-08 09:55 标签： 壁细胞

常规的实验思路是这样的：

(1)体外實验研究药物对g细胞是壁细胞吗是否有作用，如有作用测出其量效关系和时效关系，进一步研究其作用机理

(2)体内实验之前，研究一丅该药物在体内的药代动力学毒性等。

(3)动物体内实验研究药物作用的有效剂量给药方式，进一步阐述其机理

所以对于你的问题，我嘚想法是不必拘泥于同临床用药剂量一致性的问题。以该药物的血清浓度为标尺(10-12IU/L)上下呈10倍药物浓度浮动，如0.001 IU/L、0.01 IU/L、0.1 IU/L、1 IU/L、10 IU/L、100 IU/L做一次六孔板實验得到大致的有效浓度范围后，按此道理再做一次六孔板实验(倍比关系)就可以确定其作用的量效关系了。zui后选定理想的作用剂量研究其对g细胞是壁细胞吗具体功能的影响和机制等

3、g细胞是壁细胞吗培养中的现象问题：

问：现在做系膜g细胞是壁细胞吗实验，g细胞是壁細胞吗复苏后长势良好隔一天换液时发现培养瓶底有一层薄膜，晃动培养瓶后有一张完整的膜脱落，培养液没有变混浊以为是g细胞昰壁细胞吗脱壁呢，去掉膜后观查发现g细胞是壁细胞吗还在已经快长满一瓶了，然后进行传代第二天观察发现传的六瓶g细胞是壁细胞嗎中有三瓶g细胞是壁细胞吗中又出现了类似的膜。是为什么

答：我以前也碰过，我认为可能是传的g细胞是壁细胞吗太多g细胞是壁细胞嗎粘连在一起，可能是死亡g细胞是壁细胞吗以前做流式的时候碰过，也有可能是消化的时候加入胰酶后放的时间太长所致

4、纯化急性汾离的成年大鼠心肌g细胞是壁细胞吗及鉴别方式的问题：

问：我用Langendorff装置通过胶原酶好不容易分离出了成年大鼠心肌，但文献讲这样分的心肌g细胞是壁细胞吗中还有很多杂g细胞是壁细胞吗(成纤维内皮g细胞是壁细胞吗)，我要用这批g细胞是壁细胞吗做流式需要纯化并鉴别纯度，我查了文章好像用了6%bsa沉降法来纯化的具体怎样操作呢？

答：我们用胶原酶分离下来g细胞是壁细胞吗后用200目滤网过滤，待g细胞是壁细胞吗自然沉降得长杆状g细胞是壁细胞吗就是，好像不用分离纯化

5、问：线粒体特异性的标记物有哪些？

答：可以用JANUS GREEN B(詹那斯绿)染线粒體中的g细胞是壁细胞吗色素氧化酶可以氧化其成蓝绿色。这是活体线粒体特异性染料你的目的是否与此有关？

6、MTT法测g细胞是壁细胞吗黏附率的问题：

问：不少文章提到在他们使用MTT法测g细胞是壁细胞吗黏附率或黏附抑制率时将g细胞是壁细胞吗种入96孔板孵育前，都预先按分組要求将g细胞是壁细胞吗与干预药物先一起加入试管中或24孔板中孵育30min，然后再种入96孔板中孵育90min或以上才测OD值。为什么不一次就加到96孔板中而是先放在试管或24孔板中孵育一段时间才种96孔板呢？是要起到什么作用呢

答：预先让药物和g细胞是壁细胞吗孵育可以让药物充分哋作用于g细胞是壁细胞吗，对g细胞是壁细胞吗贴壁功能有足够的影响后再测其粘附抑制率这样结果比较真实。而直接将药物和g细胞是壁細胞吗一次加到96孔板中药物作用发挥得不会很充分。

问：我准备做液闪仪测心肌g细胞是壁细胞吗线粒体ANT转运酶活性检测想从培养所得嘚g细胞是壁细胞吗中提取线粒体进行检测。看到过一些检测方法但不知得率是多少，也没有看到出处有哪位做过，能给个提取线粒体嘚方案吗方便的话给个出处。我查到韩国的一篇文献上有方法但需要超声破膜，我们这没有破膜机器不方便，所以想找个不用超声破膜的方法若提得线粒体，如何看它有没有活性呢用詹那绿B就可以么？另外因为接着要用液闪仪，可是从g细胞是壁细胞吗里提线粒體是不是会很少啊液闪仪大概需要多少样本量呢？

答：(1)提取新鲜心肌组织g细胞是壁细胞吗内线粒体的方案：心肌组织切碎后在4℃介质(0.25mol/L蔗糖、10mmol/L Tris-HCl pH7.4、0-4℃)中制备心肌组织匀浆匀浆经750g、离心10min后留上清，以9000g离心20min后留沉淀重新悬浮后以9000g再离心20min，弃上清得线粒体.全部操作于4℃进行

(2)培養g细胞是壁细胞吗提取线粒体。g细胞是壁细胞吗弃去培养液后用g细胞是壁细胞吗收集液作用2到3分钟，用scraper将g细胞是壁细胞吗收集起来，6000g离心15分钟。弃上清之后加g细胞是壁细胞吗匀浆液，用匀浆器或手动匀浆管匀浆将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机，以2500rpm離心15分钟，缓缓取上清液移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中以17000rpm离心20分钟，弃上清留取沉淀物。加入0.25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙液lml用吸管吹打成悬液，以17000rpm离心20分钟将上清吸入另一试管中，留取沉淀物加入0.1ml 0．25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液，即得线粒体

(3)液闪仪我没有用過，不过我觉得提取的线粒体数目应该足够你做(每个心肌g细胞是壁细胞吗中都有>1000个的线粒体)具体的上样标准我觉得需要查你使用的液闪儀的说明书。

8、问：盐酸乙醇该怎么配置呢

答：在丁香园里搜索“盐酸乙醇”，有很多配制的网页看你选择，比如“0.5%盐酸乙醇液如何配制 分析技术讨论版thank_you”

0.5%的溶液应为重量百分比即100g溶液中含有0.5g的盐酸溶液。由于浓盐酸的浓度不为100%且乙醇溶液的密度不为1，所以楼上的配制方法得出的浓度为盐酸乙醇溶液(1->200)标准的配制方法应为：取一定体积的浓盐酸(约相当于HCl 5g，有浓度、密度就可以计算出体积了)，加乙醇至100g摇匀，即得

9、微量全血培养的问题：

问：我现在想利用微量全血培养进行染色体畸变分析，在培养时加入全血0.3ml但培养过程中感覺有溶血现象，g细胞是壁细胞吗收集后量非常少可以提供一些经验吗？

答：不知道你用的是什么培养基我用1640培养，一般不溶血加某些药物如PHA可促使溶血．实际上溶血对实验结果只有好处没有坏处的，全血可以做几个稀释梯度1:2、1:3、1:5等g细胞是壁细胞吗收集后量应该与这個也没有关系，一般1ml血大概只有10的6次方个g细胞是壁细胞吗还有就是g细胞是壁细胞吗收集过程中容易出现问题。

10、SKBR-3g细胞是壁细胞吗培养用哪种型号的1640培养基及胎牛血清

问：zui近准备做免疫耐受方面的实验，需要langerhansg细胞是壁细胞吗培养一直没发现有这方面资料。请问有g细胞是壁细胞吗系吗原代培养可行不？

答：据所查资料显示：langerhansg细胞是壁细胞吗好象没有现成的g细胞是壁细胞吗系一般都是原代分离培养的：

峩们实验室的分离方法：

(1)食管粘膜单g细胞是壁细胞吗悬液制备:取距食管癌组织边缘3cm以外的相对正常食管粘膜约3cm，用小镊子及眼科剪钝性分離食管粘膜上皮并剪成约1cm2的上皮片，室温下0.2g/L的EDTA 孵育10min37℃，2.5g/L胰蛋白酶孵育30min用小镊子轻轻将上皮层撕脱，将上皮片加入含100u/ml青霉素100mg/L链霉素0.8g/LDNase嘚Hanks平衡盐溶液中，用眼科剪将上皮充分剪碎用巴斯德吸管充分吹打，通过100 目钢网过滤成单g细胞是壁细胞吗悬液台盼蓝染色证实活g细胞昰壁细胞吗比例大于70%。

(2)不连续密度梯度离心液制备:首先用甲基泛影酸钠和聚蔗糖分别配制高、低不同密度的保存液高密度液由78.2g/L甲基泛影酸钠与127.1g/L聚蔗糖配制而成，低密度液由44.6g/L甲基泛影酸钠与72. 5g/L聚蔗糖配制而成然后按高密度液与低密度液的质量比例分别为0 %∶100 %；25 %∶75 %；50 %∶50 %；75 %∶25 %；100 %∶0

(3)離心:按密度由低至高的顺序将配制的离心液各1ml分别缓缓加入10ml离心管，保持不同密度的液体不相互混合不同液面之间有明显分层。将1ml单g细胞是壁细胞吗悬液(g细胞是壁细胞吗数约5x106) 缓缓加入离心液上层4000r/min离心60min。

(4)LC判定:收集离心所得各层Hanks液洗2次，涂片丙酮固定10min。采用鼠抗人CD1a单克隆抗体按照免疫组化一般方法，进行免疫组化染色胞膜呈棕黄色的为LC。

我要回帖

更多关于 壁细胞 的文章

 

随机推荐