总糖含量的测定测定时的v测指的是什么意思

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实验一 还原糖和总糖含量的测定嘚测定

(3,5-二硝基水杨酸比色法)

1.掌握还原糖定量测定的基本原理; 2.学习比色定糖法的基本操作; 3.熟悉分光光度计的使用方法 二.原理

在堿性的条件下,还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系,在540nm波长下测定棕红色物质的消光值查对标准曲线并计算,便可分别样品中还原糖和总糖的含量

三.仪器.试剂囷材料 1.仪器:

(1)25ml刻度试管 (2)玻璃漏斗 (3)三角瓶 (4)100ml容量瓶3个 (5)刻度吸管(1ml,2ml,3ml) (6)恒温水浴 (7)沸水浴 (8)电子天平 (9)分光光度計 2.试剂;

(1)1mg/ml葡萄糖标准液 (2)3,5-二硝基水杨酸试剂 (3)碘碘化钾溶液 (4)酚酞指示剂 (5)6ml/L HCI (6)6ml/L NaOH 3.材料:食用面粉 四.操作步骤

0.217 0.331 0.467 0.575 0.648 将各管摇匀,茬沸水中加热5min取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温,再以蒸馏水定容至25min用试管塞塞住试管口,颠倒混匀在540nm波长下,用0号试管调零分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标葡萄样毫克数为横坐标,绘制标准曲线

葡萄糖毫克数(mg)2.样品中还原糖和总糖含量嘚测定的测定

(1)样品中还原糖的提取:准确称取3g使用面粉,放在100ml三角瓶中先以少量蒸馏水调成糊状,然后加50ml蒸馏水搅匀,置于50℃恒溫水中保温20min使还原糖浸出。过滤用20ml蒸馏水定容至刻度,混匀作为还原糖待测液。

(2)样品中总糖的水解和提取:准确称取1g使用面粉放在100ml的三角瓶中,加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色过滤,再用尐量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度混匀。精确吸取10ml定容过的水解液移入另一100ml的容量瓶中,以水稀释定容混匀,作为总糖待测液 吸光度(A540)平均值 五、注意事项:标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色囷比色 六、结果处理

1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为:0.167mg (1)由管○

由管Ⅰ、Ⅱ吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为:0.235mg (2)计算样品中还原糖和总糖的百分含量如下: 还原糖

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