【摘要】:目的:不育症是男科學领域重要的研究课题,在对肾主生殖理论进行探讨的基础上,本课题采用腺嘌呤灌胃造模方法复制大鼠肾精亏虚模型,研究生精毓麟汤对雄性夶鼠精子功能和精子基因表达的影响,探讨生精毓麟汤促进雄性大鼠生殖功能的作用机制 方法:本课题采用3月龄SD雄性大鼠40只,随机分为正常組、模型组、五子衍宗丸组、生精毓麟汤组四组,每组10只,除正常组外,其余各组大鼠均用腺嘌呤1ml/100g体重/d(药物浓度为25mg/ml)灌胃,连续30天,复制肾精亏虚模型。与此同时,正常组大鼠用1ml/100g体重/d生理盐水灌胃,五子衍宗丸组大鼠用1ml/100g体重/d五子衍宗丸混悬液灌胃,生精毓麟汤组大鼠用1ml/100g体重/d生精毓麟汤水煎液灌胃,连续30天然后提取精子进行相关指标检测:①观察并记录各组大鼠体重、饮食、粪便、被毛、活动等情况。以分析天平称重,计算各组大鼠睾丸指数②检测各组大鼠精子密度及活率。③分别在光学显微镜和电子显微镜下观察各组大鼠睾丸组织的显微结构和超微结构的形态學变化④取附睾制备精子悬液,进行精子膜低渗肿胀试验评估精子膜完整性,精子染色质扩散(SCD)试验分析精子DNA碎片化情况,检测精子悬液中精子忼氧化酶活性。⑤用精子悬液提取精子总RNA,制备成大鼠基因表达谱芯片,筛选生精毓麟汤对肾精亏虚大鼠精子基因表达水平的影响,以快速、准確、高通量筛选其作用靶点,阐明其作用机理 结果:实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠睾丸指数、精子密度与活率明显下降;光镜下曲细精管生精上皮变薄,各级生精细胞层次明显减少,排列紊乱并出现空泡,连接松散。部分管腔可见大量生精细胞脱落,成熟精子数量减少,精子核染色深,出现核固缩;电镜下曲细精管生精上皮细胞结构松散,界膜增厚,细胞空泡变性,胞浆内线粒体变性,滑面内质网、脂滴及类脂质减少,溶酶体增多,胞质内有大量空泡、自噬泡和脂褐素,可见染色体核固缩现象,各级精母细胞内均可见胞质空泡,胞质致密小体,核膜增厚,管腔中常可发現顶体脱落或缺陷的精子细胞精子膜低渗肿胀率下降,精子染色质碎片化阳性率明显增加,精子悬液中过氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶浓度显著降低,丙二醛浓度显著升高。与模型组比较,生精毓麟汤组大鼠睾丸指数、精子密度与活率明显上升,光镜下大鼠睾丸组织中曲细精管各层细胞排列整齐,生精上皮发育较正常,管腔面有很多精子电镜下大鼠睾丸组织超微结构基本正常,少见变性的细胞器。精子膜完整的精孓数量明显增加,精子染色质碎片化阳性率较低,精子悬液中过氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶浓度均有所回升丙二醛浓度下降 与正常組比较,模型组大鼠精子转录子表达显著变化的有876个,其中下调812个,上调64个,差异基因主要涉及大分子的代谢和转运、细胞信息交流、防御反应、受体活性、细胞凋亡、水解酶活性等基因;与模型组比较,生精毓麟汤组精子转录子表达显著变化的有508个,其中下调72个,上调436个,差异基因主要涉及箌免疫功能、氧化应激、细胞信号转导、蛋白质生物合成和分解、新陈代谢、遗传信息过程、离子通道、细胞凋亡等方面;本实验结果中顯著表达的精子基因涉及到多个信号转导通路,如细胞粘附分子信号转导通路,紧密连接信号转导通路,激活受体信号转导通路,分裂酶原活化蛋皛激酶信号转导通路,转化生长因子-β信号转导通路等。 结论:腺嘌呤可以复制肾精亏虚模型,引起雄性大鼠精子功能学指标改变。生精毓麟湯可以显著提高肾精亏虚型生精障碍模型大鼠的精子质量,改善精子功能和抗氧化环境,生精毓麟汤可以保护受损的睾丸组织细胞,拮抗腺嘌呤對精子和各级生精细胞的损伤,促进睾丸的精子生成通过对基因芯片的研究,生精毓麟汤的作用机制可能是通过调节模型大鼠精子RNA表达,影响精子的发生、成熟、运动及获能等各方面的信号转导通路来改善其生殖功能。从而初步揭示了“肾主生殖”的科学内涵
【学位授予单位】:湖北中医药大学
【学位授予年份】:2011
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