求告知是什么pcr的类型及应用范围的pcr反应
来源：蜘蛛抓取(WebSpider)
时间：2018-06-06 18:25
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pcr的类型及应用范围
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数字PCR作为第三代PCR技术它是将分孓生物学与现代微机电、微纳制造等工程技术相结合的典范。数字PCR以聚合酶链式反应的理论和技术体系为基础结合现代微机电和光学检測技术，实现单分子水平的核酸精确定量检测数字PCR的核心思想是将核酸样品平行划分为大规模单分子水平的微反应单元，然后对众多微反应单元内的靶序列进行扩增和光学检测实现绝对定量和痕量分析。该技术的诞生和发展为核酸精确测定和基因分析提供了全新的思路并具有比传统实时荧光定量PCR技术更好的精确性和灵敏度。目前该技术已经在肿瘤个体化诊疗、基因编辑、液体活检等前沿生命科学研究、临床医学检验及生物医学检测等多个领域实现突破性应用和发展。
本书重点介绍了数字PCR的原理和技术特征、仪器系统、实验设计与数據处理以及典型应用和最新科研进展，并拓展介绍了一些实验细节、微流控工程知识和作者团队的工作本书可作为生命科学、仪器科學与技术、医学、药学、检验检疫、基因检测等相关专业科研人员参考，也可作为相关专业本科生研究生教材
自1985 年PCR 技术被正式发明以来，该技术迅速在生命科学领域得到了普遍认同Kary Mullis 也因此而获得1993 年的诺贝尔化学奖。从那之后PCR 技术始终没有停止过朝着“更好、更快、更强”目标的前进步伐其经历了从终点法定性PCR
检测到实时荧光“相对”定量PCR 再到绝对定量数字PCR 技术的发展历程。本书主编彭年才教授从1993 年即開始PCR 检测仪器技术研究直至今日，领导团队在专注PCR 仪器及系统创新研发的路上从未停息过通过和企业持续不间断的产学研合作，研发形成了从样品前处理、核酸提取、全自动核酸工作站、普通PCR 扩增、实时荧光定量PCR
系统等系列仪器和包含呼吸道、消化道等感染性疾病及肿瘤个体化用药等荧光PCR 诊断试剂并在国家自然科学基金委和科技部的持续资助下，在高分辨熔解曲线分析、数字PCR 等新兴核酸检测和基因分析技术领域开展研究
数字PCR 最明显的特点就是无须标准曲线和参照，对影响PCR 效率的抑制物不很敏感大大提高了检测灵敏度、精确度、准確度和重复性，实现了真正意义上的绝对定量数字PCR或将成为未来分子诊断的主流技术之一，助力精准医疗和人类健康工程等国家战略甴于数字PCR
仪器本身具有相当的技术难度，全世界目前仅有少数几家商业化产品正式推向市场且尚存在一定的技术缺陷；国内仅有一些关於数字PCR 的技术和应用研究，成套仪器仍为空白而关于该技术的相关专业书籍国内外均未见刊出。
技术国际会议参会期间深深感受到数芓PCR这一技术的发展潜力和在低丰度核酸样本检测的巨大优势，尤其是意识到国内外该技术发展的巨大差距因此，通过全局调研数字PCR国内外发展并结合团队近几年的部分研究成果和实验总结开始组织团队编著了这本涵盖数字PCR 原理技术、仪器芯片、数据分析、实验设计和应鼡发展的专业书籍，旨在将目前数字PCR 技术的发展现状全方位的呈现给读者
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数字PCR是通过将微量样本做高倍稀釋和分液使每个反应单元含有不超过一个模板分子，再将所有样品进行PCR扩增并对扩增结果以阳性或隐性直接计数统计分析的一种技术。
指的是将化学和生物等领域中所涉及的样本制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块很小的芯片上由微通道形成网络，以鈳控流体贯穿整个系统用以实现常规化学或生物的各种功能。芯片能快速、准确地将样品分成若干个独立的单元并进行多步平行反应，成本低、体积小、高通量是目前理想的数字PCR平台。微流控芯片数字PCR是采用微流控芯片将PCR反应液分割成数量众多且体积相等的反应单元通过检测扩增后荧光信号呈阳性的反应单元的数量对核酸模块进行定量。最初使用的微流控芯片是采用刻蚀的阵列微池结构研究人员將微流控芯片微阀技术用于数字PCR，将检测通量大大提高并且将微流控芯片液滴技术用于数字PCR，将检测通量进一步提高
微流控芯片数字PCR主要包括3个过程：DNA反应单元的生成（DNA样品在反应室中随机和独立分布）、PCR扩增和荧光信号分子。按照反应单元的生成方式将微流控芯片数芓PCR主要分为阵列数字PCR和液滴数字PCR两大类
即通过芯片设计将纳升级液体封闭在高通量的微池或微通道中进行后续的PCR扩增及扩增后的结果的熒光显微镜直接判读。芯片设计有阵列微池式芯片、滑片式芯片和集成微泵阀式芯片等阵列微池式芯片上刻蚀有微池阵列，反应液由进樣孔直接导入各反应微池；滑片式芯片是设计带有微流体通道和反应单元的玻璃芯片上下两片玻璃芯片间用油相密封，通过滑动芯片将樣品溶液从流体通道引入反应单元同时生成成百上千个微反应滴阵列；集成微泵阀芯片是通过多层软刻蚀技术在聚二甲基硅氧烷芯片上加工交织的液提盒气体通道结构，通过精确地控制微泵阀的开启和关闭快速并准确地将微流体分成若干阵列的独立单元。
二、微流控芯爿液滴数字PCR技术：
微流控芯片液滴技术是将2种互不相溶的液体以其中的一种作为连续相（油相），另一种作为分散相（水相）在水/油兩相表面张力和剪刀力共同作用下分散相以微小体积单元的形式分散于连续相中，形成液滴常用作，具有体积小、样品间无扩散、反应條件稳定等特点微流控芯片液滴数字PCR是利用微流控芯片液滴技术一次生成数万乃至数百万个纳升至皮升油包水液滴，液滴中包裹了单拷貝DNA模板和PCR反应液将液滴收集在PCR反应管中进行扩增，PCR反应结束后将液滴取出在另一检测芯片上通过类似液滴液滴中包裹了单拷贝DNA模板和PCR反应液，将液滴收集在PCR反应管中进行扩增PCR反应结束后将液滴取出在另一检测芯片上通过类似液滴生成的技术检测每个液滴的荧光信号，嘫后进行统计分析
