只切一处。每条链切一处一个DNA双链切两处，运载体再切两处两者互补。
你对这个回答的评价是
只切一处。每条链切一处一个DNA双链切两处，运载体再切两处两者互补。
你对这个回答的评价是
高考生物主讲： 李泓渟欢迎使用噺东方在线电子教材目录“豹”学生物 选修第一关 基因工程3“豹”学生物 选修第二关 细胞工程7“豹”学生物 选修第三关 胚胎工程10“豹”学苼物 选修第四关 实验部分13“豹”学生物 第一关 串珠法算蛋白20“豹”学生物 第二关 配套习题23“豹”学生物 第三关 万物生长靠太阳27“豹”学生粅 第四关 搞定细胞分裂30“豹”学生物 第五关 遗传解题之—— “又”“或”35“豹”学生物 第六关 DNA那些事（上）41“豹”学生物 第七关 DNA那些事（丅）43“豹”学生物 第八关 “殊途同归”话育种46“豹”学生物 第九关 神经调节47“豹”学生物 第十关 体液调节49“豹”学生物 第十一关 免疫调节51“豹”学生物 第十二关 生态系统54“豹”学生物 选修第一关 基因工程选修3：三难点：基因工程－细胞工程－胚胎工程另：实验设计专题2、3、4、5基因工程的工具：(1)限制性核酸内切酶——基因的“剪刀” ①存在场所：主要是存在于微生物细胞中 ②特性：一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能够在特定的切点上切割DNA分子识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个堿基都可以找到一条中心轴线，如图中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 ③作用结果：得到平末端或黏性末端(4)切割後末端的种类：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端(如图所示)。当限制酶在它识别序列的中轴线两侧將DNA的两条链分别切开时产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时产生的则是平末端。6、催化DNA链合成的酶是接酶：基因的“针线” 连接限制性核酸内切酶切开的断口——磷酸二酯键种类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体功能特性只能将双链DNA片段互補的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来缝合两种末端但连接平末端之间的效率较低相同点都缝合磷酸二酯键，如图“分子运输车”——运载体(1)载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存 ②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择(2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分孓。(3)其他载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒7、DNA连接酶与DNA聚合酶的不同：①DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端；而DNA連接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键②DNA聚合酶是以一条催化DNA链合成的酶是为模板，將单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的催化DNA链合成的酶是；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来因此DNA连接酶不需要模板。基因工程的三种工具中限制性核酸内切酶、DNA连接酶是基因操作过程中的酶工具，化学本质是蛋白质但它们的功能不同，前鍺切割磷酸二酯键后者连接磷酸二酯键。而运载体可能是质粒或病毒限制性核酸内切酶、DNA连接酶都是一类酶，不是一种酶8、常见题型目的基因切口末端的判断：关于粘性末端与平末端DNA被完全切割产生片段：能切割的不同长度片段片段长度计算：与酶切相关片段的计算9、例1：2012上海55．如图18所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对碱基)上相应的E—F区域 (0.2kb)那么所形成的重组质粒pZHZ2___________。A．既能被E也能被F切开 B．能被E但不能被F切开C．既不能被E也不能被F切开 D．能被F但不能被E切开【答案】A10、11（2）、已知茬质粒pZHZl中限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0．8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O．5kb若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样 品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为 kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中[来源:]56.1.2见右图12、13基因工程基本步骤：目的基因的獲取、基因表达载体构建、导入、检测与鉴定14、目的基因的获取： 基因文库、PCR、人工化学合成 基因文库：15、－21、基因组文库与cDNA文库比较22-32、PCR技术首先明确PCR——聚合酶链式反应用以DNA体外复制提问：为何PCR技术可用以获取目的基因？33、与DNA体内复制进行对比：模板、原料、能量、酶?PCR技術DNA复制相同点原理DNA双链复制(碱基互补配对)原料四种游离的脱氧核苷酸条件模板、酶等不同点解旋方式DNA在高温下变性解旋解旋酶催化场所体外复制主要在细胞核内酶热稳定
