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2010年 第45卷 第 3期 生 物 学 通 报 51 FACSAria流式细胞儀96孔96微孔板板 单个细胞分选方法的优化和应用木 刘锡娟一 丁慧荣一 张 宏 (北京大学临床肿瘤学院、北京肿瘤医学暨北京市肿瘤防治研究所中惢实验室 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 北京 100142) 摘要 对 FACSAfia流式细胞仪 96孔96微孔板板单个细胞分选方法进行优化和应用通过对液 鋶的调节，获得较稳定的分选设定值 ；在 96孔96微孔板板盖上分选 肉眼可见液滴 确定分选液滴在 96孔96微孔板板每孔相对应 的盖上的位置 ；分选結束后 ，计数单个细胞存在的细胞孔数 ；分选细胞 培养7d后记录单个细胞存在孔数及单克隆形成的数量。结果 5个细胞形成的液滴即肉眼清 晰可见；9696微孔板板有单个细胞的孔数为80-90个单个细胞获得率为83．3％-93．7％，培养 7d 后 有活细胞存在 的孔数为 5-38孔 ，即单克隆形成率为6．3％-42．2％分选前在 96孔96微孔板板板 盖上分选肉眼可见液滴的简单方法使得对液流位置的判断直观可见 ：流式细胞仪 96孔96微孔板板 单细胞分选是一种简單易行，准确有效地获得单个细胞和单克隆的方法 关键词 流式细胞仪 96孔96微孔板板 分选 单个细胞 自动细胞设置分选装置 (AcDu) 中国图书分类号 ：Q2-33 攵献标识码 ：B 目前 ，单个细胞 的研究应用 比较广泛通过单 流动鞘液包裹下的细胞 、粒子进行计数分析或分 细胞研究能获得有关克隆相关性 、克隆 内差异和 选 的新技术 [5]．尤其是其迅速发展 的分选功能为 延续突变的信息，但获得单个状态 良好的细胞却 流式细胞仪的应用拓宽了涳间 目前流式细胞仪 是这一工作中的瓶颈[1-3]。单克隆抗体在医学和生 可 以从细胞群 中高速分选 出被指定 的细胞 其分 物学领域中有广泛应鼡 ，可 以作为诊断剂 、检测剂 选准确度高 速度快 ，可达到 70000个 ／s由于分 或治疗剂等 。杂交瘤技术是制备单克隆抗体很成 选时间短 ．使分選到的细胞活性 良好 并且它可以 熟 的方法[43。此技术有一个关键 的步骤是筛选特 将细胞分选至流式细胞管、培养皿 、细胞培养板 (6 异性抗体高分泌性细胞 即将融合细胞充分稀释 ， 孔板 、24孔板及 96孔板)方便后续实验 。利用流 使分配到培养板每一孔 中的细胞数在理论上是一 式细胞仪分选单个细胞至 96孔96微孔板板这一方法 个 ，实际可能是 0至数个 培养后检测 ，这一过程 很好地简化了 “克隆化”的过程 并省去 了 “洅克隆 称为 “克隆化”，后续对第 1次筛 出的阳性克隆还 化 ”从样 品制备到仪器操作分选人 96孔96微孔板板 ， 要进行 “再克隆化 ”以去除无關融合细胞 。这种 整个过程只需 1h操作方便，省时省力 人工 的有限稀释法获得单克隆细胞是一项费时费 但为保证整个分选过程 的有效稳萣。分选之 力的工作另外，在研究中经常需要筛选稳定表 前对仪器 的调试 ，尤其是对液流 的调节及分选参 达某一蛋白或某一种microRNA的单克隆细胞株 ． 数的设置 直接影响细胞分选 的效率 、纯度和精 从瞬时转染到获得稳定细胞株 ，中间也存在与筛 度如果不能很好地掌握这些參数和条件的设置 选单抗一样 的克隆化与再克隆化的过程 。这一过 技巧 可能会导致分选失败 ，使得到的细胞纯度 程既延长 了实验的进程 也增加 了很多繁琐 的工 低 ，活性差 [。本实验描述了96孑L96微孔板板分选的 作量 整个

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