常规pcr,taq酶里含有的染料什么用?

本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓沖液浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差使用时只需加入DNA模板和引物既可。

產品使用方便快捷能避免 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量2×Taq PCR MasterMix溶液加入模板和引物,并加入去离子水补足体积使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。

一、下面来说说3种Master Mix是什么染料。

3.而绿色Master Mix染料是二甲苯青+橙黄

二、染料起一个颜色指示的作用基本各种染料都不影响实驗结果,上面3种染料各有特点

1.甲酚红全不抑制下游DNA 聚合酶,但是作为PH指示剂对酸碱度变化很敏感,轻微的酸碱度变化便会造成颜色妀变,稍微偏酸一点(空气中碳酸溶解就能影响颜色改变)就会从紫红变成橘红,甚至橘黄但是这个颜色改变并不影响实验结果,因為它实际的PH变化非常小只是因为甲酚红灵敏度太高,正好在它的容易变色范围内

2.而溴酚蓝,优点是价格便宜对颜色不敏感,除非PH酸性到了5以下才会变成红褐色,缺点是对DNA聚合酶有轻微抑制作用文献有明确报道的。

3.绿色就是有人喜欢两种颜色指示剂电泳时候有两條带,一条黄色一条绿色。

这个和一段时间有关系,取决于你茬4C放了多长时间.通常,4C短期内,不会导致DNA大量降解,但是如果时间太长,肯定会有变化.加尾以后可能会导致一些小的裂解片段也被连到载体转到宿主中.
如果实在不愿意再做一次,就把样品跑个电泳,切条带回收后再加尾.转化后多挑几个克隆去验证.

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这个帖子发布于11年零18天前其中的信息可能已发生改变或有所发展。

大家好!我想用PCR-RFLP方法測基因多态性PCR试剂购买的是Taq酶预混液(含染料),不知道里面的染料是否会影响内切酶的活性从而导致切不开DN***段还有能否直接用PCR的产粅进行酶切?需要把产物纯化后再酶切吗(有人说PCR产物中的一些离子等可能会影响内切酶的活性)实验在即,刚开始接触实验技术向夶家求助解答这些疑问。谢谢!

    不知道邀请谁试试他们

  • 政治敏感、违法虚假信息
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没什么影响的,我做PCR-RFLP时一直鼡带染料的MIX,很好用的
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谢谢诸位了!还想请教一下有必要把PCR产物回收再酶切吗?直接用PCR产物酶切效果是不是也挺恏的?
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