高危一个月查梅毒TPPA用的方法学明胶颗粒凝集法结果阴性能排除吗？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-05-19 18:10 标签： 十个梅毒九个艾

【摘要】目的：对TP-ELISA（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验）与TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集实验）两种方法在孕妇梅毒螺旋体筛查中的应用比较，以优化梅毒血清学筛查方案。方法：分别选取86例TP-ELISA结果阳性或弱阳性（S/co值≥1）以及8例TP-ELISA结果阴性（S/CO值

梅毒是一种由梅毒螺旋体感染而引起的慢性性传播性疾病，具有高度传染性，属于医院检验科传染病检测的常规项目。梅毒感染机体临床表现复杂，可引起全身各组织和器官产生慢性系统性病变，严重危害机体健康。孕妇感染梅毒，可经由胎盘传染给胎儿，引发宫内感染进而导致胎儿流产、早产或导致成活胎儿患有先天梅毒。因此，出于优生优育及传染病防控的目的，对孕妇进行梅毒筛查是至关重要的[1]。目前，针对孕妇梅毒筛查，常采用TP-ELISA（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验）及TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集实验）两种梅毒抗原血清学方法进行检测。但由于两种方法在灵敏性及特异性等多个方面存在差异，可导致梅毒检出率不一致，也容易导致临床医生难于做出正确判断[2]。为此，本研究拟对TP-ELISA与TPPA两种方法进行比较分析，以探讨孕妇梅毒血清学筛查方案。

选择近来于我院做梅毒筛查的孕妇94例，其中86例TP-ELISA结果阳性或弱阳性（S/CO值>1），8例TP-ELISA结果阴性（S/CO值<1）。对以上标本进行TPPA检测。

材料及试剂TP-ELISA操作采用烟台烟台艾德康生物科技有限公司全自动酶免仪;TP-ELISA及TPPA检测试剂盒分别购自北京万泰生物药业股份有限公司和珠海丽珠试剂公司。

（1） TP-ELISA：按照烟台烟台艾德康生物科技有限公司全自动酶免仪使用说明书，设置好各项参数并准备好血清标本及相应试剂，仪器自动完成测试操作及读数。（2） TPPA：首先，将100μ1生理盐水加入U型板第1个孔，后面7孔每孔加入25μl生理盐水;然后，第1孔加入25μl待测血清，混匀后取出25μl加入第2孔，稀释至第8个孔，弃掉25μl稀释血清;最后，在第3个孔加入25μl未致敏粒子，第4至8孔均加入25μl致敏粒子，混匀后室温静置2h，结果判读参照文献[3]，以血清稀释度1：80作为阳性最低稀释度报告标准。

在所检的94例孕妇血标本中，8例TP-ELISA结果阴性的标本，TPPA检测结果同样为阴性，符合率为100%;而86例TP-ELISA结果阳性（80例）或弱阳性标本（6例），TPPA检测结果为阳性的标本数为79例，符合率为91.86%（见表1）。进一步的分析发现，在TP-ELISA結果为弱阳性值（1≤S/CO值<4）的6例血标本检测中，TPPA结果均为阴性;而TP-ELISA结果阳性（S/CO值>4）的80例标本，TPPA检测结果阳性标本数为79例，未检出的一例标本为TP-ELISA结果S/CO值介于4～5之间，阳性检测结果符合率为98.75%。

为了进一步探讨TP-ELISA与TPPA检测结果的关系，我们对TP-ELISA S/CO值与其相对应的TPPA抗体效价进行深入分析。如图l所示，在TP-ELISA S/CO值大于4，TPPA抗体效价总体趋势上是随着S/CO值上升而上升的，比如TPPA检测效价为1280对应的TP-ELISA检测值绝大多数分布在S/CO≥20。但我们也同时注意到，这两种检测方法的检测结果并不是成线性关系的，这值得广大临床检验工作者注意。

研究表明，近年来，随着社会经济快速发展，我国梅毒发病率逐年上升，而先天性梅毒感染上升趋势明显，防控形势严峻H。机体在感染梅毒螺旋体约两周后即可产生特异性抗体，主要包括IgG和IgM两种特异性抗体，前者为治愈后也终生存在，而后者在机体存在时间较短[5]。通过检测受检者血清中的梅毒特异性抗体，即可对梅毒进行实验室筛查。实验室梅毒血清学特异性抗体检测方法主要是TP-ELISA和TPPA两种方法，具有很高的特异性和敏感性。

TP-ELISA是采用酶联免疫吸附法原理，在微孔板上包被梅毒螺旋体抗原，以双抗原夹心法同时检测IgM和IgG两种特异性抗体，阳性结果S/CO值与血清中特异性抗体浓度成正相关。TP-ELISA检测法操作简单、测试费低廉且易于自动化，适用于医院大规模梅毒抗体筛查，是当前最广泛使用的梅毒特异性抗体检测方法，也被作为实验室梅毒特异性抗体检测的首选方法[6]。但研究发现，利用TP-ELISA检测法进行梅毒筛查，由于受检者患有自身免疫疾病等原因可导致假阳性结果的产生，也可由于钩状效应的原因导致假阴性结果的产生[7-8]。TPPA作为国际公认的梅毒确诊的首选检测方法，是利用明胶颗粒包裹纯化后的梅毒螺旋体毒株制成抗原，检测受检者血清中梅毒特异性抗体及效价，特异性及灵敏度均较好。然而，TPPA检测法所需试剂的成本高，检测费相对于TP-ELISA也较高。与此同时，TPPA法需要检验人员对血清标本梯度稀释，不能自动化操作，结果判读也依赖于肉眼，结果准确性也依赖于检验人员的工作经验，因而不适合于实验室大批量的梅毒筛查工作。

在本项研究中，TP-ELISA检测结果阴性的8例标本，TPPA检测结果也均为阴性。而对于TP-ELISA检测结果弱阳性（1 ≤S/CO值<4）的6例标本，TPPA结果为阴性，说明TPPA特异性较TP-ELISA更好。值得注意的是，在TP-ELISA检测结果阳性的80例标本中，仅有一例S/CO值介于4～5的标本，TPPA检测结果为阴性，这说明随着S/CO值得增大，TPPA与TP-ELISA的阳性检测符合率就越高，所以TP-ELISA结果阳性的标本，需要利用TPPA法进一步确认。

综上所述，TP-ELISA适用于孕妇梅毒的大批量自动化筛查，但阳性结果需要通过TPPA法进一步确认，既能节约时间和医疗费用成本，也能减少误诊。

[2]廖远泉，梅毒的实验室诊断技术进展[J].热带病与寄生虫学，2016，14 （04）： 245-250.

[3]赵娜，刘瑞霞，李鲁平等，捕获法ELISA检测TP-IgM抗体在各期梅毒诊断及疗效评估中的应用[J].中国病原生物学杂志，2015，10 （12）：.

[4]程娟，段红岩，李安信，梅毒流行病学和诊疗现状分析[J].传染病信息，2012 （01）：58-60.

[6]吴立春，代黄梅，谷仕艳.3种梅毒抗体检测方法在梅毒诊断中的应用分析[J].国际检验医学杂志，2017， 38 （08）：.

[7]胡利清，周玉球，梅毒螺旋体抗体两种检测方法的对比分析[J].中国实用医药，2017，12 （13）：50一51.

[8]袁晓华，胡惠萍，关于梅毒检测程序的探讨[J].国际检验医学杂志，2012， 33 （24）： .

　临床中诊断梅毒主要采取血清学检测，常用的检测方法是梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验法和酶联免疫试验法，均具有较高的敏感性[1]。但在实际工作中，易出现假阴性、假阳性的情况，给临床工作带来较大影响。为有效提高梅毒检验结果的准确性，笔者对梅毒检验的假阴性与假阳性原因进行探讨，现报道如下。
　　1 资料与方法 本文由WwW. 提供，毕业论文 网专业代写教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临
　　1.1 一般资料 选取2010年5月至2013年5月在我院门诊实验室进行检验的8万例患者作为研究对象。其中，男性患者和女性患者的比例为1∶1，年龄0～82岁。
对进行检验的8万例患者中出现假阴性与假阳性结果的临床情况进行分析，并探讨原因。主要采用血浆反应素试验法（RPR）和梅毒螺旋体明胶凝集试验法进行检测（TPPA）。操作时，严格根据试剂盒说明书进行操作。其中，TPPA测定：首先对待验的血清进行稀释处理，然后将其加入到非致敏粒子与致敏粒子中，运用平板混合器混合半分钟后，将其放置到15～30℃的室温下静置，两小时后观察结果。RPR滴度测定：在纸卡圆圈内放置50l梅毒阳性对照、阴性对照以及待检血清，使用专用滴管将1滴RPR试剂加入到纸卡圆圈内，按照100r/min的速度摇动，8min后观察结果。
　　对8万例患者检验检查结果进行统计，共出现1024例错误结果，占检验患者的1.28%。其中，假阳性492例，占错误率的48.0%，假阴性532例，占错误率的52.0%。
　　临床中，部分患者患有疾病，但血清学试验后结果显示为阴性，而部分正常人群，经血清学试验后显示为阳性，大大加大了临床诊断难度，给临床工作带来较大麻烦。因此，对检验的阴性、阳性结果进行仔细分析十分重要。以下对梅毒假阳性和假阴性的影响因素进行探讨：
　　3.1 假阳性的影响因素分析 临床对梅毒的检测主要采取血清学试验，而酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体明胶凝集试验法为最常用的检测方法。其中，酶联免疫吸附试验法主要具备高敏感性、高特异性、检测费用少的优点，在采供血单位和医疗单位中应用广泛[2]。但均存在不同程度的假阳性。通过对梅毒假阳性发生的原因进行分析，主要包括以下因素：①基础疾病因素：肺癌、肠癌、子宫内膜癌、腹腔内膜癌等癌症，肺结核、血液病、自身免疫性疾病等患者因自身免疫环境改变，导致出现误诊。其中，肿瘤患者具有高抗体滴度的特点，炎症、老年人则具有低滴度的特点。因此，对炎症、老年人患者进行诊断时，可将检测滴度小于1∶9 本文由WwW. 提供，毕业论文 网专业代写教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临的情况排除梅毒，但癌症患者具有高滴度特点，易导致发生误诊的情况。②标本因素：导致的假阳性主要包括血液标本离心处理不彻底、发生溶血以及细菌污染等因素。其中，血液标本溶血后，血细胞被破坏，细胞内液中的活性酶以及其具有酶样活性的物质能够和底物非特异性结合；血红蛋白具备的类过氧化物酶活性，效应类似于辣根过氧化物酶，发生溶血后，孔非特异性会吸附Hb，催化产物会产生显色，进而升高本底A值，导致为假阳性。如血标本内纤维蛋白析出不完全，容易在板孔内形成絮状物或者纤维蛋白薄膜，并残留于相应孔内，进而提高吸光度值，导致假阳性。血液标本被细菌污染后，细菌体内会出现内源性辣根过氧化物酶，进而影响相应酶的测定方法产生影响，出现非特异性干扰，最终导致出现假阳性。
　　3.2 假阴性的原因分析 梅毒出现假阴性主要受到以下几个因素影响：①技术因素：受到部分检验人员自身技术因素影响，对实验条件比较模糊，存在不严格按照操作标准加入抗原量、随意改变试剂量的情况，进而降低实验灵敏度和抗体滴度，导致发生假阴性。②检测方法学：梅毒患者早期血清内的反应素含量较少；或部分患者体内含有的血清反应素量较高，导致假阴性出现。③其他方面的因素：主要包括患者就诊率增高、滥用抗生素等[3]。
　　为有效提高早期梅毒确诊准确率，降低假阴性发生率，实验室工作人员要对试验中的仪器、试剂等进行严格监测，严格按照规范流程进行操作，最大程度减少操作因素带来的误差。另外，做好稀释试验，有效避免前滞现象导致发生的假阴性；临床医师在进行实验室检查前，详细询问患者病史，了解患者服药情况，嘱咐患者积极配合医师进行检查，如检查前保持空腹、停止服用其他药物等。此外，在条件允许的情况下，可应用特 本文由WwW. 提供，毕业论文 网专业代写教育教学论文和毕业论文以及发表论文服务，欢迎光临异性和敏感性的检查法。患者、临床医生以及实验室检测之间的紧密配合，能够为提高临床诊断正确率提供重要依据。
　　综上所述，梅毒患者检验结果会出现假阴性和假阳性，为有效提高梅毒检验准确率，要求患者、实验室医师、临床医师之间要紧密配合。
　　[1] 武强，章双虎，柯文才，等.化学发光法检测梅毒特异性抗体进行梅毒筛查的可行性评价[J].中华医院感染学杂志，2014，24（3）：769-771.
　　[2] 谢昭宁.多种不同梅毒检验方法检测梅毒螺旋体的结果准确率比较[J].安徽医药，2013，17（5）：797-799.
　　[3] 谭旭明.梅毒检验的假阴性与假阳性结果原因分析[J].中国基层医药，2011，18（17）：.

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